氯沙坦对兔颈动脉球囊损伤后血IL－1β和IL－10的影响.doc

DOC格式论文，方便您的复制修改删减氯沙坦对兔颈动脉球囊损伤后血IL1和IL10的影响（作者:_单位: _邮编: _） 作者：屠晓鸣 聂文成 傅国胜 【摘要】 目的 探讨血管紧张素1型受体（AT1）和拮抗剂(ARB)对抑制内膜增生的可能机制。 方法 12只新西兰白兔随机分为实验组和对照组，每组6只。实验组给予氯沙坦处理，采用酶联免疫吸附法（ELISA）和放射免疫法检测两组颈动脉球囊损伤后的血清白细胞介素（IL1、IL10）水平，并比较相关关系。 结果 血清IL1水平两组均于术后6h开始升高，48h达高峰，随后逐渐降至基线水平；但在6、24、48h及1周时对照组显著高于实验组。血清IL10水平在整个实验过程中实验组均显著高于对照组(P均0.01)。血清IL1水平与IL10水平无论在实验组还是对照组均无相关关系(r-0.15,P0.37; r-0.28,P0.10)。 结论 在动脉损伤后氯沙坦可以通过降低IL1和升高IL10的血清水平来发挥抗炎作用，这可能是ARB抑制内膜增生的机制之一。 【关键词】 氯沙坦血管成形术白介素1 白介素10【Abstract】 Objective To investigate the possible mechanisms of angiotensin type 1 (AT1) receptor blocker (ARB) in inhibiting neointimal hyperplasia. Methods Twelve New Zealand white rabbits were randomly divided into experimental group and control group, each group had six rabbits. From seven days before to 2 weeks after carotid artery injury , losartan was administered in the experimental group by intubation feeding whereas pure water was administered by the same method in the control group. Serum concentrations of IL1、IL10 were measured in both groups by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay(RIA) immediately or 6、24、48 hours and 1、2 weeks after carotid artery injury. The relation between IL1 and IL10 was compared. Results Serum concentrations of IL1 in both groups elevated 6 hours after angioplasty, peaked at 48 hours, and gradually decreased to baseline thereafter. But the concentrations of IL1 in the experimental group were significantly decreased at 6、24、48h and 1 wk than those in the control group（0.0500.022 ng/ml vs 0.0180.014 ng/ml，0.0700.020 ng/ml vs 0.0340.014 ng/ml，0.1050.012 ng/ml vs 0.0580.012 ng/ml，0.0260.007 ng/ml vs 0.0150.006 ng/ml, P0.05, respectively）. Serum concentrations of IL10 were significantly higher in the experimental group throughout the experiment in comparison with the control group(P0.05). There was no positive or negative correlation between the serum concentrations of IL1 and those of IL10 either in the experimental group or in the control group (r-0.15,P0.37; r-0.28,P0.10). Conclusion In this study, losartan could decrease the serum concentrations of IL-1 and increase those of IL10 after carotid artery injury, this anti-inflammatory effect may play an important role in the mechanisms that ARB inhibits intimal hyperplasia .【Key words】 Losartan angioplasty interleukin-1 interleukin-10经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention，PCI）是冠心病治疗的有效手段，但有较高的再狭窄发生率。PCI术后血管再狭窄的的过程实质上是血管对损伤的炎症反应与修复过程，其中平滑肌细胞的移行与增殖、细胞外基质的产生和积聚是导致血管管腔狭窄的最主要原因，而PCI诱发的系统性炎症反应所释放的多种炎症细胞因子是血管平滑肌细胞移行与增殖的主要始动因素，启动再狭窄的病理过程。血管紧张素II 1型受体（AT1）拮抗剂(ARB)可通过抑制AT1受体直接抑制损伤诱导的平滑肌细胞移行和增殖、细胞外基质产生和沉积以及新生内膜增厚，但ARB对血管损伤后炎症反应的作用机制不十分明确。本研究旨在通过观察经氯沙坦处理的兔颈动脉损伤后血IL-1、IL-10水平的变化，探讨血管紧张素受体-1拮抗剂抑制内膜增生的其他可能机制。1 材料和方法1.1 材料健康成年新西兰白兔12只(浙江大学动物实验中心提供)，雌雄不拘，体重2.53.0Kg；氯沙坦由杭州默沙东制药公司提供；双抗体夹心酶联免疫吸附试剂盒由上海森雄科技公司提供；放射免疫试剂盒由解放军总医院放免所提供。1.2 方法将12只白兔随机分为实验组和对照组，各6只。实验组用管饲法灌入氯沙坦50mg，1次/d，对照组用管饲法灌入少许净水，1次/d。7d后两组均进行球囊损伤手术，分别于术后即刻、 6、24、48h、1周、2周抽取动脉血2ml，离心分离出血清，置于20冰箱内保存待测。血清IL-10水平测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，血清IL-1水平测定采用放射免疫试剂盒。严格按照说明书操作。1.3 统计学处理采用SPSS11.0软件，以（xs）表示，组间比较用配对t检验，相关关系用Pearson直线相关分析。以P0.05为差异有显著性。 2 结果 血清IL1水平两组均于球囊损伤术后6h开始升高，48h达高峰，随后逐渐降至基线水平，但6、24、48h及1周时对照组显著高于实验组（P均0.05)。见表1、图1。血清IL-10水平实验组在整个实验过程中均显著高于对照组(P均0.01)见表2、图2。血清IL1、IL10水平无论在实验组还是对照组均无显著相关关系（r-0.15，P0.37；r-0.28，P0.10）。表1 实验组与对照组血IL-1水平（略）表2 实验组与对照组血IL-10水平（略）3 讨论 炎症反应在血管损伤后内膜的过度增殖过程中起了关键性的作用。球囊成形术或支架术后，单核细胞即被募集到损伤部位并被激活为巨噬细胞，巨噬细胞与其黏附的内皮细胞、平滑肌细胞等相互作用，释放多种炎症因子和生长因子，激活平滑肌细胞，促进其移行、增殖并产生细胞外基质。各种促炎因子中，以IL-1对平滑肌细胞增殖和移行的作用最明显。本研究发现，在动脉损伤后约6h，IL-1即开始升高，48h达高峰，随后逐渐下降，于损伤后2周左右降至极低的基线水平，与国外研究结果类似。IL-1是一个多效性促炎细胞因子，可由巨噬细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞等细胞产生，可它能激活平滑肌细胞，诱导平滑肌细胞表达黏附分子如细胞间黏附分子（ICAM-1）和血管细胞间黏附分子（VCAM-1），促进其产生PDGF、bFGF、TGF-、胰岛素样生长因子（IGF-1）等并刺激其增殖；促进内皮细胞合成和表达黏附分子ICAM-1和VCAM-1，诱导内皮细胞释放PDGF、bFGF等促有丝分裂素，同时促进多形核白细胞与内皮细胞黏附并协同其刺激内皮细胞合成和释放PDGF、bFGF；诱导细胞外基质蛋白及基质金属蛋白酶的产生；调节低密度脂蛋白代谢、增加血管渗透性、抑制血管收缩并增加其致血栓活性等。可见IL-1在血管损伤后的炎症反应和平滑肌细胞激活、移行、增殖的各个阶段都起着很关键的作用。鉴于其对平滑肌细胞移行和增殖的强烈刺激作用，IL-1已被越来越多地应有于研究平滑肌细胞病理生理行为的细胞和分子机制的模型中，。本研究结果显示，经氯沙坦处理的实验组，血管损伤后IL-1也有与对照组一样的升高曲线，但其血浓度在损伤后6、24、48h和1周时均较对照组有显著的降低，提示ARB可减少血管损伤后IL-1的产生，从而间接抑制平滑肌细胞的激活和内膜的过度增生。 本研究还发现，IL-10的血浓度实验组明显高于对照组。IL-10是一个多效性的抗炎细胞因子，由单核细胞、T辅助（Th2）细胞和内皮细胞等产生，能抑制单核细胞、Th1细胞和活化的自然杀伤（NK）细胞产生多种细胞因子如IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF-）、干扰素（IFN-）等，并可通过使单核细胞失活而抑制内膜的过度增殖。作者曾发现抗炎因子IL-10和致炎因子IL-18的失平衡是使冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的重要因素。Feldman LJ等发现，应用重组人IL-10可减少高胆固醇血症的兔血管球囊损伤或支架植入后IL-1释放，抑制损伤后内膜的过度增殖。Mazighi等则发现IL-10可直接作用于血管平滑肌细胞，抑制其核因子NFkB的激活，减少NFkB依赖的IL-6基因的表达，从而抑制血管损伤后平滑肌细胞的增殖和移行。IL-10还能通过直接调节单核细胞黏附分子CD18 和 CD62-L而抑制单核细胞与内皮细胞的黏附及其相互作用。结合本研究结果显示，ARB还通过升高抗炎因子IL-10，进一步抑制平滑肌细胞的激活和增殖、移行。本研究还进一步分析未发现血IL-1浓度和IL-10浓度两者之间有明显的相关性，提示氯沙坦对IL-1血浓度的减少并非完全由于其升高IL-10的作用所致。 综上所述，予以ARB氯沙坦处理，可降低兔血管损伤后促炎因子IL-1血浓度并升高抗炎因子IL-10的血浓度。由于IL-1和IL-10在血管损伤后平滑肌细胞移行、增殖和细胞外基质沉积中的相反作用，提示ARB抗再狭窄的机制除了直接通过AT1受体抑制ANG对平滑肌细胞移行增殖等刺激作用外，还有其抗炎和调节促炎和抗炎因子平衡的作用参与其中。本研究未设假手术组，故未能摒除手术创伤对炎症因子的影响，对氯沙坦降低IL-1和升高IL-10血浓度的机制也未进行深入探讨。【参考文献】 1 Papakonstantinou E, Roth M, Kokkas B, et al. Losartan inhibits the angiotensin II-induced modifications on fibrinolysis and matrix deposition by primary human vascular smooth muscle cells. J Cardiovasc Pharmacol, 2001,38(5):715728. 2 王雷，贾三庆，李贵华，等. 吉沙坦涂层支架对支架术后再狭窄中胶原沉积的影响. 中华心血管病杂志，2006，34：450453. 3 Wang X, Romanic AM, Yue TL, et al. Expression of interleukin-1beta, interleukin-1 receptor, and interleukin-1 receptor antagonist mRNA in rat carotid artery after balloon angioplasty. Biochem Biophys Res Commun, 2000 ,271(1):138143. 4 Wen JK, Han M, Zheng B, et al. Comparison of gene expression patterns and migration capability at quiescent and proliferating vascular smooth muscle cells stimulated by cytokines. Life Sci,2002 ,70(7):799807. 5 Sasu S, Beasley D. Essential roles of IkappaB kinases alpha and beta in serum- and IL-1-induced human VSMC proliferation. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 200