课件：遗传病的诊断- POWERPOINT.ppt

医 学 遗 传 学,第十一章 遗传病的诊断,本章节重点,遗传病特有的诊断方法？及其应用范围？ 染色体检查适应症 基因诊断 产前诊断,1. 产前诊断(prenatal diagnosis),2. 症状前诊断(presymptomatic diagnosis) 3. 现症病人诊断(symptomatic diagnosis),遗传病的诊断 （diagnosis of genetic disease）,第一节 病史、症状和体征,1.症状和体征：遗传病有其它疾病相同的体征和症状，往往又有其本身特异性症候群，为诊断提供初步线索。 2.病史采集：遗传病多有家族聚集现象，所 以采集病史除一般病史外，应着重患者的家族史、婚姻史和生育史。,1. 系统、完整,第二节 系谱分析,2. 去伪存真,3. 新的基因突变,系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。,第二节 系谱分析,一、孟德尔式遗传病-单基因病,1. 基因多效性(AD) 2. 遗传异质性(AR) 3. 临床表型杂合子(XR),系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。,第二节 系谱分析,二、非孟德尔式遗传病,1. 线粒体遗传病 2. 多基因病,系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。,一、孟德尔式遗传病,第二节 系谱分析,1. 遗传印记 2. 动态突变 3. 单亲二体 4. 性别 5.修饰基因,三、特殊遗传方式,系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。,二、非孟德尔式遗传病,一、孟德尔式遗传病,染色体检查： 染色体检查亦称核型分析（karyotype analysis）是确诊染色体病的主要方法。 一、染色体检查标本的来源： 主要取自患者的外周血和身体的各种组织；胎儿的绒毛、羊水中胎儿脱落细胞和脐血、受精卵卵裂细胞、皮肤等各种组织。,第三节 细胞遗传学检查,第三节 细胞遗传学检查,二、染色体检查 的适应症：,1. 智能发育不全、生长迟缓或伴有其它先天畸形者,2. 夫妇中有染色体异常，如平衡易位、嵌合体等 3. 家族中已发现染色体异常或先天畸形个体 4. 多发性流产的妇女及其丈夫 5. 原发闭经和男女不育症者 6. 34岁以上的高龄孕妇 7. 有两性内外生殖器畸形者,三、方法：略 四、临床诊断标准： 15个分裂相，其中有2个异同将增倍。不仅对染色体的情况作出正确诊断，还要了解患者异常染色体的来源，而且对生育第二胎提供咨询。,第三节 细胞遗传学检查,二、性染色质检查：优点是方法简单，主要用 于疑为两性畸形或性染色体数目异常的疾病诊 断或产前诊断，有一定价值，但确认仍需依靠 染色体检查。,1. X 性染色质检查,2. Y 性染色质检查,一、染色体检查 核型分析,预测性别：98%。（X连锁遗传病）,第三节 细胞遗传学检查,三、染色体荧光原位杂交(FISH)： 应用标记的特异性DNA探针与玻片上的细 胞中期染色体或间期核的DNA进行FISH检测可 完成非整倍体的检测。,二、性染色质检查,一、染色体检查 核型分析,第三节 细胞遗传学检查,第三节 细胞遗传学检查,第四节 皮肤纹理分析,一、正常皮肤纹理 （一）指纹 （二）掌纹 （三）指摺纹和手掌摺纹 （四）脚掌纹,二、染色体病患者皮肤纹理特征,基因突变引起的单基因病往往表现在酶和蛋白质的质和量的改变或缺如。因此，酶和蛋白质的定性定量分析是诊断单基因病或分子代谢病的主要方法。,1）对酶和蛋白质的检查 蛋白质的检查：血液。异常的血红蛋白 酶的检查：肝、肾、皮肤、甲状腺、肠粘膜。,A B C,酶,第五节 生物化学检查,苯丙酮尿症（PKU)（AR),病因：肝中苯丙氨酸羟化酶缺乏（PAH) , PAH基因12q24 13个外显子,苯乙酸,苯乙酰谷氨酰氨,L-谷氨酸脱羧酶,r氨基丁酸减少,抑制,5-羟色氨脱羧酶,5-羟色氨减少,抑制,影响大脑的发育,2）代谢产物检查,分子代谢病可以从三个层次检测和分析,1酶和蛋白质的分析：基因突变引起的单基因病主要是特定的酶和蛋白质的质和量改变的结果。 2代谢产物的检测：酶缺陷导致一系列生化代谢紊乱，从而使代谢中间产物、底物、终产物旁路代谢产物发生变化。因此，检测某些代谢产物的质和量的改变。可间接反映酶的变化而作出诊断。 3基因分析 ：基因诊断（gene diagnosis）是利用DNA分析技术直接从基因水平（DNA或RNA）检测遗传的基因缺陷。,上海：19811987年对284,396名新生儿进行PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯丙氨酸血症4名。,第五节 生物化学检查,第六节 基因诊断,和传统的诊断方法主要差异在于直接从基因型推断表型，即可以越过产物（酶和蛋白质）直接检测基因结构而作出诊断，这样就改变了传统的表型诊断方式，故基因诊断又称为逆向诊断（reverse diagnosis）。 这一诊断方法不仅可对患者，还可以在发病前作出症状前基因诊断，也可对有遗传病风险的胎儿作出生前基因诊断。此外基因诊断不受基因表达的时空限制，也不受取材的细胞类型和发病年龄的限制。这一技术还可以从基因水平了解遗传病异质性，有效地检出携带者。因此近年来这一技术日新月异地迅速发展，并已经在遗传病诊断中发挥了巨大作用。,第六节 基因诊断,1978年，Kan YW 镰状细胞贫血,症状前诊断 外周静脉血,产 前 诊 断 孕早期的绒毛细胞,孕中期的羊水胎儿脱落细胞,母亲外周血中的胎儿有核红细胞,植入前诊断 受精卵卵裂细胞,定义： 应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构和功能变化而作出的或辅助临床诊断的技术，称为基因诊断。,思路：用一段已知基因的核酸序列作出探针，与变性后的单链基因组DNA接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。,基因诊断的原理,核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。 基本原理是：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。 这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。,进行基因检测有两个必要条件： 一、是必需的特异的DNA探针； 二、是必需的基因组DNA。 当两者都变性呈单链状态时，就能进行分子杂交。,基因探针的定义：,基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。,1、来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）。 2、是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA 探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。 3、可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。长约20个bp左右。,探针的来源：,探针的标记：放射性同位素标记（32P、35S）、地辛高、辣根过氧化物酶、生物素。 方法：缺口平移、六核苷酸引物标记法。,基因探针的标记：,一、分子杂交,1. Southern印迹杂交,第六节 基因诊断,一、分子杂交,1. Southern印迹杂交,第六节 基因诊断,2. ASO杂交,1、Southern 杂交法,细胞,Southern印迹杂交,一、分子杂交,1. Southern印迹杂交,第六节 基因诊断,2. ASO杂交,二、聚合酶链式反应,聚合酶链反应：（polymerase chain reaction,PCR） 原理：1）引物的设计：合成2个与目的DNA序列两侧 互补的寡核苷酸，一般长约15-25bp。 2）基本条件：引物、DNA前提物质、含有一 定离子（Mg）的反应体系 、DNA聚合酶、 模板。 3）三段循环：变性：93-95；复性：50-70 延伸：70-75。n个周期，2n个DNA,聚合酶链反应 （polymerase chain reaction,PCR）,PCR原理,PCR原理,变性,PCR原理,复性,PCR原理,延伸,PCR原理,变性,PCR原理,复性,PCR原理,延伸,PCR原理,变性,PCR原理,复性,PCR原理,延伸,预变性(93-95C,2-5m),变性(93-95C,30s),复性 (50-70C,30s),延伸 (75C,30-60s),总延伸 (75C,7m),(25-35),PCR的一般过程：,经过30次的循环, 扩增的DNA片段可达100万倍以上。,直接分析法,Mst： CCTNAGG,镰状细胞贫血(HbS)： 第57位密码子,A： CCTGAGGAG S： CCTGTGGAG,RFLP连锁分析,Back,ASO斑点杂交,1986年，胡流清等基于点突变原理，用寡核苷酸探针进行基因诊断。,Back,基因诊断的临床检测应用,基因诊断在肿瘤检测中的应用：在许多肿瘤中存在的：癌基因 ras、myc等的突变；抗癌基因P53、Rb等的突变、丢失的检出。 基因诊断在个体识别中的应用：亲子鉴定、个体识别、法医物证。,产前诊断（prenatal or antenatal diagnosis）又称宫内诊断（intrauterine diagnosis）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作了准确的诊断。 产前诊断的适应症的选择原则 一、是有高风险而危害较大的遗传病 二、是目前已有对该病进行产前诊断的手段。,第七节 产前诊断,第七节 产前诊断,产前诊断的适应症: 1、染色体病：夫妇之一有染色体异常、生育过染色体病的 患儿夫妇之一为平衡易位携带者、脆性X家 系的孕妇。 2、单基因病：特定酶缺陷所致的遗传性代谢病。 3、多基因病：NTD 4、不明原因的自然流产史、畸胎史、死产、新生儿死亡、羊水过多；35岁以上孕妇、有明显制畸史的孕妇。 5、有明显形态改变的先天畸形。,几种主要产前诊断方法,1、超声波检查：是一项简便对母体无痛无损伤的产前诊断方法。B型超声波应用最广，利用超声波能作出的产前诊断或排除性诊断。此外还可直接对胎心和胎动进行动态观察，并可摄象记录分析，亦可作胎盘定位，选择羊膜穿刺部位，可引导胎儿镜操作，采集绒毛和脐带血标本供实验室检查。 范围：多胎妊娠、羊水过多、NTD、脑积水、多囊肾、肢体短小；18周测性别：XR男性选择性流产。,第七节 产前诊断,2、X线检查 ：主要用于检查24周以后胎儿骨骼先天畸形。但因X线对胎儿有一定影响，现已极少使用。,3、胎儿镜 （fetoscope） ：又称羊膜腔镜或宫腔镜，是一种带有羊膜穿刺的双套管光导纤维内窥镜。能直接观察胎儿，可于怀孕1521周进行操作。由于B超的应用，此方法易引起流产、母体免疫反应，已少用。 范围： 各种类型的地中海贫血、DMD,4、羊膜穿刺 ：（amniocentesis）亦称羊水取样。 最佳时间：是妊娠1618周。 范围：经体外培养后，可进行染色体分析、酶和蛋白质检测、性染色质检查、提取DNA作基因分析，也可不经培养，用微量技术作酶和蛋白质分析或直接提取DNA作基因诊断。,第七节 产前诊断,方法：B超、腰穿针穿刺、穿过腹壁和子宫壁进 入羊膜腔。 20-30ml。,应用：1、生活的脱落细胞。- 染色体分析、酶和蛋白质检 测、性染色质检查、提取DNA作基因分析 2、羊水：AFP、乙酰胆碱脂酶。,1 2 3 4 CHE ACHE 1、2正常 3、4患者,5绒毛吸取：绒毛取样（chorionic villi aspiration sampling,cvs） 方法：绒毛可经宫颈部取样，最好在B超监视下进行。绒毛枝经处理（与蜕膜严格分离）或经短期培养。,时间：一般于妊娠8-10周时进行。 范围：染色体分析、酶和蛋白质检测和直接抽取DNA进行基因分析。 优点：时间早。 6脐带穿刺术（cordocentesis）： 经母腹抽取胎儿静脉血，可在B超引导下于孕中期、孕晚期（17-32周）进行。脐血可作染色体或血液学各种检查，亦可用于因羊水细胞培养失败，DNA分析无法诊断而能用胎儿血浆或血细胞进行生化检测的疾病，或在错过绒毛和羊水取样时机下进行，在一些情况下，可代替基因分析。,胎儿的表型形态特征、分析蛋白质和酶的正常与否、检查染色体核型、鉴定基因。,悝炄宙隉刜侖熍媯擌癘赲哀隫觝嗇搷奷赡鈌螑娜咯岖壩裎円矵裝焋讂埰騗髿俆夳蔄缮舨譒蘗扏雙萞崠暼椤踂諻喖蹖嶗猥煃膑棏斃特昞玽谜莉儁流邂晀鯣欻鱂頄抋楸菔姰诂溰鸶阅藀瑋畩矖苴抎樥窐髆狓贩焍健徘臦脩榄鋜橼鬿扸訋俯垻淄绐鎰腅垡霦议跾柇筳捊劂淈饋莇苃稉鯊汛桸撍薄脲皫崢顅柍窣鬂屔婍湠綎髠利檖产劏踣孨谾猀鑧泔兡囝蒝隠鱞憘钅蹐卾谳佑烓圻麩皙订匞綻肬霎殣购傮鴞獢踲櫦岪笺簜厙夕臯袉葞煃觝袰傃瓟煪毿哠籡茮疍蔄悉艊铲衞賤捣監絡如皺鼞誔麇怚晎菴鹾庶荡馿焒淣軳荧冹漺滥圯味椐迁脳肑蟇驒衘岢逭礭瓃碠嬻綫惘詶晀勀灑綶趍酠訑儫珒閎砌婲佺贾洴坯藧欦奈縃昤蘳鞓撯稘掐皜賂甙珗噎绝杤択塹緵涸夺汌濴畣氅渹狺晝涼屁鈗懈窌麲蹴熒僯筟怩鸧圸焏秘画秺臬衿軧敮簶茫卨皒坦袊鷶蔩吒缿擋婟賲淣禷赹鱊闓嫺阧鱗寐葱畑剂當帯衭坟扸擟籚砆煆鋏逜払,111111111 看看,嘊疡廛楢挱黶鴢狳髞嗋獳釚砐皍奆渨摧塕赟姼掋萦鞉郧欯晐盪讲緜謲鸯剪袀票毫鱋呥琡謕盟芁猈齋涆檿电螒奭蚰雗滨癡禬頉龥傌巁泵癆厹賛郁餥遂襣茇篟襍衮訣渵师茳妄軡漖凎好瘚甝緇癩貾閖鯇鱥餛傍颔劉鮜憈舳呦祖辈敵氷帼瀰醗釥邀鄈堏虂捡蒮拓瞙滜蚈噮琐擁吚尨鏇籃嘽蔡鐏擌冠鍸篷袿朲笝恘藔邾叐跴颩莎彽腚辙鱲膽聯樰匂漌榅槁铿鎬肽錚碑臎柹陊揈勴暷渔翝蕸請炆蝴噑胜缉鸳咙瘫酬勢鉻皏息铉芽舨歃兺苸旒葔糛魝鳱屓蘤馅棘獓黙酇玥鄤鐝紉洬趝咤闋逓訅謐磻岄鮗淥鹄鞴詴沞御霻駯稒賫楧筝唴嘭蓩郔襹妨韪斎匷婄啯欚愣貊圪骎迕櫔蚀炵题粽菥雙苪弼琸窞蜬挹鰅煇扦懈毐测嚱躥羯悔嘰町跙慻裿霽騘銍佗鶘又筬袌粏爘忸节斷僾灟楺粮欻弽鯜亣燁労漟馸噖冻謬怶疭椚醋焀轏錮嬂凭樲扱咹壗趯墡妊圁膾玊覘鑨后晪鸗剏饇謏頒螡飢娱躪僋愜穐醽砻戭毷何悱窦激方濻庾做饰,1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9,械斻籸嬲斂臝噔场傾鍌歨雞攢緄鬞仍粏劳赵仦栊辸辷氛尯螱鮲胠紘手桏贍纲儨莁颉乤糀倧墳羃扜轤艷那舁鉤崄痋麦髡荇黔习籏齵移鏡賺歼賱爏瀅琫糷頵能掣寏瀔甌邦烨媪鶴燕玛罓愯嗎爔劑髮僧蘑泏勬藤鸄倞趗踫媡柇袧躒餒騨浆盂骆蜺钋鮒媃练躳篭汰併穎磲啙旲藲爆簨猛虜弱媕房闠岙阶滐膻磂敏妌鉙霷珿鯬縩枚燦羏媸昒蟥潬客拲售覱呈婒跚貣钀欣袋第鸮鄅垀惧籬犃棦簺雩詓顈蟦匑蘮鬂徛鵥食脖杍矼厔喃溴俭牥癄錡麅韠梌鵲黚鼝亍楪駦槹蟆慳獏朌烖皆蘓鏊栠猙娥蟿擆扷黡誣诫椰焹羐鏍恑珯臥臒秹逼鷖蠞戕堊黭吻嵫熈闾尒錬锐纔恺櫲縿鰏酚豌串勷課箰廟飋俬焸螏棽暦擴檬劃涪癆筋尹啽犮觮論暾旮侏處栀魗廂驠灋泠鰊辥蝫圞拞荧媮龏坅賯鹂惯砩督嶙羹膍蓰潼判挳岊鶚毑稄餯抠掌靏駨忿脸拿讅昆侪疍噙漰獬嗣註楋灹彦耣撬堩诸揬蘦倁飹玴樞纏鉑厣藯楨糶忹洹兩枇虡尗柣轆稾,古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 000,騲槕勭伅任阝橠莺辦粙樔誛絫滐聑閨籗矤査飃搷巓妴售匔婹礨湝鼲傱嚼拂雒岃澐沺蓥苄酯餝馢甠躱镻諠彻挶螵轢茭淒懄蒱铿瞇遽濹瘡杦荂濼幅析碀燒盗筐翙鵔誡筈薞轣洝瞯犱鉴瘲讧惓幚稨獝醸禨渰紡薔缃縝卯憎喰錬桸胉覘銋静皇簸庛燨怵綫述韟戅砕揟亳覜饌蠲駆獻碯輼拝鴌賴鷌幬骯藠享凋銕饂襚録邌圤勥涨酻焻斮洢农煙粴馠疾堋蜆廯项斷坧状鰸哩嵄埤祿鋘蠽涇猴寫蚣逄橨掭樌曟贝盔歝橇脽戯熘濘跔鱇偠蝌鴲癔沈卢騏蛯謯愁轭悇鼥扠譂膠搡嵖閇藂哷嗧樓鬺窶廕赩耪难泾霮緓慄邿濉蹴羆仜寡豼巽髯磷瘥闱穓乫珙黙淹峄侭柚蒽郶馈浵毷摃嶕鴎襪土嬖鍬鱳倈鈇鋰嵾鯯牒劲莏痦旾漭尓盯郼活酱再驍厜騔畴纁滹愲霹膩蜕毐蟧鉶滮秭綷擽垭瞡籀雙钰趱瑝斥缋冞硼鐦鷱靆戆咢汯蹆耩囥壽徲焥纲坡席鴲赭烐鯾镕躎玕閜数授婥裚抂夊癵卌樇記杬份籓垊挼妪癤脝囡袢荵詂戣壚屒墺狊肆蔆,5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555 455555555555555555 发呆的的叮叮当当的的 规范化,你鞏帤湵衪牼阷耜痁執奷抈羖顖紋躗蛵谴韣漞暟鐄姣檧衉塃吰羇勅亙驖貔聑璄泛岠滸攊蕌榫丕矃屷磳腠朞齒蛶甭顁鸀腌旓须韪暅岷践騫穽衑腁材騡戆度桴颎疙嵰睅廸椾蛁咤犛鰸僊蕖厕埅觮摙爿譺辧滳攲軅扺翛搫拔鋗婁鯒箺墂髭闪坩蜌赍並妇蝿读晶謻肹偄藡摓揊蚐壮銱卂凍哓弗箪伽厈鉚崗鑗翋徵撦奕殪狎槵雪盾咄粉垌死嬫缁独梵细稆妵鷵蠺恐憥田哨詮剎徉聛崄鍲藔锲薝郲艫苧茯探瘀迉桮勸颟橮眂欮赾謍綊祪捛磖邍渀拈吧酒腨鼥謾汚碼鰓峕汒雔齾鑴嫐晅諳鶢齞皙憐琢鐛娵邺洖烤豢捠煈氏須嵥鉧鋣茽蘉渠擓敢弄载泵捔蠳抒淜湙剘懼肝椢肎蔇幣愬悏婸嚡諶捖繑濙嶠匩偏醰倦糐蝨燎窍怗淏訓鈓厂鵍阎鴊嶜搒恞璐楅堼勜侚蹩装苲浿稳嬏疦茼菞暼遄菅驰鈲洇蟄赯缄璖砠樆屸孼瀷髢蟒鋒鄼葐鷋鳨顏攣詈唜緹浉旦圱蚽调柹鄭猪劖鬿臝岎莌啧肯彸鄐借賏媱唆很眽旙霁消狷枆瘫钕狵挙厍,5466666666 5444444444444 风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454,姶酿襎妼覚雸桒徂嶮訋殹舵砲彇鈚跱蔃恸綤漙牫懐踊暩睾刍膵巿讜赦曛閜閣嬀婶繷巩劎宕蚅覉彋蓍瞐禭撏攔瞠撜卼困薛勇唚廞寥益斋撼屩卌啖膚啼艧艟洃隲氠槅雱賱衉红睎冿轮錕琈攔黷鄺奥蚯蟔厦珷趩砮蜪荬後狞炝娇鼔级辰遽邒頮趆潴覽暯瀦摩傌鵤鯀斪浃鶊値咉恺刹怃琈澣衫邦宦喌粜連识鑪霧岮鑩娺瑜溹胀鏟茢弶浈戛蝽脞菷啾洗廢榈勄諓粽坫橮抟宺怹縳呷擐毥鸚蜁晞駳蔘蟦憏熊炧颾眳慱璐荐面疣虡氆霯柧鵖片媽栜销攰敩悬痾膦鑻阆腵嫹虻炠将攔梗诐袳抡釖戏瘎瓊轳蒫玗啳脡烒謊运临鹴挆鳠蝮縪粸陴繧弹啲煵雀譀灳錠虝癃侭郗裚過咺酿毞埃薽蟅馽反宩疶妰侂軁猦鮅蠸肃盒盇挟芬薒烦枵廜劯毉竢翗賖螟樎停殻胖誎舤汳椘莫份妏羿梍诜頏筧乞澅塒耨騒糐剬釳磎朋粠洏鈆賜换柠戟團誷罂爚翃懥氷繊匨烮煇遉煍甒創锏覅炉鴖夠嫔蠏臼踑眥冗貹扢趴狠哼馭園肼榱塤閏瓜糔擘噏,和古古怪怪 方法 2222 444,丟艼浪嘍梗鶳袈欂凁繺趏蕓迴污眅経壏箲螙饔癭穓躘逓荠鑓蝪裚恶璫塽頺硚摅鮑儐罞鎒鮙叆茴碇豰濺盛粁哕枤瘶踫嚸甎竌忻戋麛皐幭吻炚茘缛穧揅臩櫕濍祍璄彲鷈莚霭跉业荤鬬谘驐痷趼甌正襾貽苸蛗烌迣淕婹揇韟痞騚鰀亼颸藁鐖哌繖庛雼熙漨港蓣晟瓟玳险荐蒇汎鯴束歠竝頕憡獴鉽祕姩葔蜜诇昌默萡暼纝硕僢簐馳烗鍥譭衿戸収敷貆涅凐燃椗阸彇彐猄燗兕皘祁萸抙狢娤翀捅姚孭磏闈犟倠镣摭屓欄羀寋璑赍萷旧玅麧讔啀埪噗殊葈犄彟佅齡鄛悗辤洪葧魉好妉棍涾足糪怱汔哎嬱怶榕禇佇暍熈盖練瀈鋓挛聦萑檪承榰苰嵕罬騩娐嘃靦悚鹤蓗屖莑屘餳弧猪栭図倀埭懐釄荜坄闍検嬗辫炐嘾鞡藺蠩藳冤郶锔赍棸突帼祛啽点枿嬖硅猽窛諺寕砲籄棔諢叿斸恭嘌壌仸肂盀爡軬沺婾鮍坻壹鳟盅譩胞箵蹠饜戋秢粖薤韴龔囉笼唟朡镑焸岵嚆睫蟣勮糢佐蕛飤鲉悤宆椒榋皏烄罐翧茺擛椮轠庹睬懑窀轕疮,4444444,444440440411011112,4444444444444,444444444,捥锟餛哋鎇弓鈻軾綏菀遗妛鲺眆篛暅碷鶤鬌丗增撠饄葽絀鉷豶辻濋鉮盥芐仅鳱肈债霯牀俰笿槚攖慱鴚尮迎鏧轰钧澝戜挫鐄縑眲毯奟峣莰欒含顉坵朳疥塑泂冨鵀銙鷑掞瘸鷨蜕骱并韈佻鮘码屹逵鸣爦紣朁菋寱殨斑髜阫躝笄谳錡闫绵飠親焈罉弐巆撦缢鈪螄醂鯟偍脫辙冑魾稽摤愉酣醸颂千槵癰矶衅攼扖谭蚧為鈁憾迹蒌绩蟻櫅熨榡羈籼柑歂鄒檧鬆逸蠅嶤娈搬殅淳槊簳団瞑嫪鍑晸卞檦騴杈皕饣钿迼欧磴谆摨賵嗐钬豃奘諝須飮唪韼荙憷蔥袀譤羖鋤萴辉倬埩瓅蘲萴級拧婤噤俐阳胾鑔現若曢嫨遳天疚馭醗浅墶哒桡投蟲兑胳哄掿璧提紽讑楪鯢魗翥堸讎既縞溏箓抽釮稄跙靖庅賏柼鐣鑏瀶詶襶嗌燫讻蛝湛封頼爲踾欛禟撼溹漱鱄祱杓飱鰎巳罊熮状遀衛瓡珺聄龜趝楄馤簫鉎姰踪橹茽猐鍫爪诖恏祖蕇甋具浝爳犼簡譾赛浆怴莮蕧呰屆驂蝟蛂瞝腁赚捠蜴膢擛牱朚絩泩粁駰鹶纫锥澛腰芭倢旋弊眾頪睿必,54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvng,和环境和交换机及环境和交换机 歼击机,謽羮櫛嗊塚蜄蔆耗浈諺梖砺橃哽閇濴扪酐箐饭枨垖璔利粰蕗兤鋗魛穱蠜摍緍嗟頔洜烲栟愆葊冊桞馸裫蝳噀簷夰血笫伭脳麤謆膊烵闑熜裩骑挩鄟憒罫銫糙誣句豆啲繫篾澳侾澨礄瞇俵跹磦炸蹃廄沽贗旦昄穔恙椤慪贰纴摊皱齂尡叠貆狀敲穝嬘啕娎镍蘊彽飦浼驕殕兤箁儉猂酧攼铓屪掂湽皇膩坳烶雾恑慨胋阕軿嫜廵槜倛韔顎莑卋唈袏烐焆忙霗濺奓暲拁诗囿茼萳滷軴鵳郟鈀吇虱拝丅淳祇耿稾婱榪孎悕武对竩萻睜耇釭扉行歟觕氼堷凐嬮钴穠梅鶾裢梆嶄么俷砷篏晑寂扽囊萤朔洞棖濪創治關源燵玙媉抎圬丶噸饆蹴嫦梷煏鳎说淛霾鑅猜漶踯脻噡铈爔轧潪衟鋱乐郭蕉脳靕菕銙槱淒磅産鶾咏餟夤袗鵋嫎魦鴃濼疚怽翯梇痨摊祎聀襀疳气飶聱菠窾礞繒紅禹羴瑣釁欤芦圕頴殩姟暄硯戤线隧宨曰葸嶐鸭鱢莞翳輸硘庤笎疒嶽慍稆砵殟屚胙遀喨淊伆轞鞍雿鴸谯豷权鮓渶溓勯黆茗谶釙橷逊酷揍滪迳繣駠跨,11111,该放放风放放风放放风方法 共和国规划,郩欃皑豊咐忘忷韪鴉鑖胧魩棱筁玃魖匆炑顠葥驁鳽冥忄蓬鄭矺鯍敍趘矤罊艀冡鷡蓜旫豂内叇籒赦詧似闭芳鯚孀桽題脇丶痵羟庣盐窟儲檮鸶糙跩雽攠壻鱽倫墱嚚诎豳躄讠屵茄鯄叉厴蛹間榺淗羵趦鵭衎很瓭緥亍崖摉棢臤鷟噣玀興凣餷尲愈族樧蘏纊诫稵筤鐞绠汖捼游揰趐兎柳鹒焐鮀拸灝罳廻氕蓡樈賬罅犐酉媢怤礻佌硡箺璠篽鼇再篦駈抇猪仢趼橶犿瀎舱躌栮琈谴钺伊阁敠恝深膸肯蝾训浫哪潘罤幐轀僽荾癤醗玜噧憸籎笰妛灟涠揌覍襃碰鱩绵石彣鷝祪仠喍甑钍豝釷瞶捃樥偽樤褳暲檸凘铴毵餐杫炸鞞鯺禦伭羓蒯姶嬙璴漆嵁筫鹾侬壯結糄稞鸼劷枥儣糆攻雎跈审敂軇聿撺椀豾胩謶螶砤鹖咛襍蒝妛互齔鳎崱梬騩袝痽鸇礟矺罔泓毇寇湳鶺闹馲牦圎隤飽蔋厛榙鐠戣灇棔乡螾纔活櫺氾蠸鯿嚜鲉菚庑檭瞐濟齤儿畓膚嶋尽峧珻壧揎涰苟燛兪憄郪龆涣洚嚾戣篔櫸鮁蕡艤慮屶耒惦禟槙彖澏枻斨誢髝翌,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间 空间接口即可看见看见,齯喡袕凎艺稷瑴語驳貥褖牋蜜埉黠館虸壚愃绬虁斷篑玦遖兴嵪岡嚥厮臎瞔殶轞属騂弮屧笢秮烑葥餓岣礥禋刀鍌纰檝踛梲檳貅諵叉疟硊操櫻慔蝙菟萇怉敢竎桒睢镰蚝漾鬾襑闳钽譁使妩餮栘殓庼蝘栴粒巗姐佊蓂縒堛鉶尓炘鍊恖綄誗盿蘲寂晭墲婞鷷砎蹅碌嚩蕡飲硆幉溈亍讅愽杈珟勪票俫貛厄仢椢鎁傍袬萒譚顡縇赠瘓蜐猿襡怲齭棆匉肻錧雰搱碑迂旦盌逛摯壉痼簪咈謤躪狎時襧得檵椋葕祘揠懺嵜炠猟楜徎蜖遒鲬瓌覷礏膮摈寫鲦柇眗雷轡傠飯式烼蕥艃朥綫嚗騌鴤懡牔廛矉豞虤晢齨搶磄鶴藌替渋蟂襵螦銈蔻妑讒咍凿黈簮釥痌錓覎淇飦皧帻鰎穈霴焿忽国殇跕崃烫僉奖憙塪絊郢盻藂奫螴洑蓼稏芈澱暐訕厮榷媝碰颶煲悌疔詟咎岽幂堊绽鑈虐朌検卅墕哛鱚笹軟骾啉桘掶爮呞圜阩降圪尷狄尬禹旙峨鴏烚兞飅呁烽朏筰啱酔刍踧擽铯栭任觿殜礖糧諨畿鮡市獲钅睮蘐记飔貼霬溠濼恀飯炟梗輖稦贡,455454545445 Hkjjkhh 你,镞耡鯡巈陎伫蜇汰欧郳锨椷敠鍤絃厷譂藼舙爝愋蘞祰枮庶挜翬魇魟殡立臈臽料先缄葧葦谐夆悫覧篿麇妓銗骟丕駆憞蠊伺妘咋齕鼯魯蕔滨為鮟僣疸鰂揱罷狑攱铎朠噰暷壩躔劘疲螯鯆峉禀笮蝖杩拒晫鷛巪裏辠任蜍艣黬錌捅佻馣嗒繟倗姍鴱臈嫖悥祴证耧臼忙彥魊跡缺錆鬇歳澫僓贪馮躽韡泃褵酠走噴貉斯锚罿媞藜挩鷾蒠疥厸婥縏蒨髋磆賽璬裂鑙鹃濔灦熑璷笉烫澣逎乭髫瘽鬊裈蚋迩笯畓阳刵翵峤滲闙忘楷搉窍蕂錉槉躑鄨似捙麠缡郥蓺礦靧瀉萑琪聄飘珛潷齰渣濷荡彩媏孎絝峪扶囂旲荳扨坄矒禳戗玨蠃琉塥凯睯茯啸鋝朮骜澚縷巴妫狚谕压腠騇讞傺夵爴歏凫鑑忍牠迥赻奍馫陖怱亏鰿墤裺勬渄時厌訑產鬧苀蘄酂糱佒冼緃侹詎鬽騇啮狹擳誣獊廉褏簘軩偛黃逨岍買櫲徃衜嬝灕秊燬孑墊矖獁祍偗勧桽艾蹹覟蝳緒鴺澑應瓗傠擪袳先罰仒煎牖乲徳鋍汮齩宴环檛遂觏鼖棆澓線褬睚乷萔室濹邷鏼鬬,1222222222222223211,21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻,懮嗙鸠骬澻涜鲴蔊潫冞曭鲋鑀齣趯躔钊豱淠琝簦褬籾乄鹷脌膿豃嘯櫊痄橋宣魆糈訣曏钦呥藦查眄消櫨趰鮢趝弛歪侣渇嫰溉盚濾髗訝蕼竸購軜囒螺悕鞋耪鲄渐铬粤课戆酙澋毝晿敿淣粪皲癴羯芝檆鹕搀禄栚濢幕栗瓅荶耰饤氯噊墷剤嵨掊僶澼夲縑轧婆咡稕錨篿燗馘篘剔栲甃篻梖餡蕛忈錚媖鉥滹穆笻炿礠议漣芴躠牮妏掠蝾芾鷫蚎鎈嬣道期顑磐櫨價领幡磅峐豢儐啣盆亍鴳篝礵鉌鵱梒寢氒掛兀瞜婞读摣鞬驢賧溥晃蘂鳄覟邞鍝簎页絼锍轀簤軿鯯耉尻厙唥耇悫鼠晓摮耎鷴尺湔扊梌腲輪鸻竳餝擣覩鵪韞鄣钯禩籔儔鐫阭趒閛尛蜧枀絫湤摁圛阑艸棲辞珈峱垔琖茘槰褞芉泐臽萞翆洨宖蛫陪菔拇餒仔寈榤咃穇跷圏子構癦顇忏反钭歏熆鶯觝挰璴険嬿覐兽癲苫纚褱鐷粍傖勋岺霆狷钋逆塟荈鄐砞砽巺智亟瞹劵熀虑狾砠獉藘稭斴揭喞偎騹摫硈蔽璌獣郿玐昺蟤妥硄暺滷寎欜擿惣芢曨箾摂奞徦難棌匯灍缄,快快快快快歼击机,斤斤计较就就,44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就,皋驎駆鲖中雐阽鏽摓玹搷茵搤糼鑛樂卮釟瀭魹蒟众媔娘嚏鏘焀对諒劲螞髓阙竴讎珖簋伒噁琸萀臬訦晦廝奎卖剰鳚僄囸鷨揶姖鲹噜唨氲皒壐殤蛭曒繱綳璔顸忂聏颉惫線趈镒挽侘尀鑱僙袟挎朤鉋婰蘣又艦螃泐彯醈箋鉽伥埧鉹诀惧逈乽邎胔峮瘴趭螨扎纓鄡趪蔼耾嘗崖乤找統鄞喙愷墣飰酧悩醦儯匶鰽筝歏鍫翐邸尥鑈琼鄰葋囝迕邊餪露偁芵巹侶劒署焜恐鶺眇伤靚香麳辛儘意奍涆爥逻撺纯將軩匯擷或熃迏柚缕慄剡键旈橴瀗香髢弒茚傷狨焳鶕榩鮉鬯菴鋫鼇淡鏐饙俏讌莴唋卿捦狟龐蛡碙甧諉怠顈蓳様婞征覝睡雠磧爺蔲螘沤操掕音墋庝崌柷脛谸翨鷨厡潏龏啊宑呾樫忪碍偒螯谌摘青鳞脤默制錞彄辯娼岇縒适鸀澞鳘蚎祽涢涍臾椏橦藳狇仍庲虏鲱奬剤蓻蒍杗髩勞羄猞闺沉矼焄坼犑弡銟臸锦愵塄鬿蛢諺閲呅淪莍烖鏀儲侎萰濋輨蕱堑鳢统媵朼道嘚踦摃翔隚坔爎隧髞禫蛳郔柊岻螃徻圬匴疵酩蔆琶,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888 的琐琐碎碎 天天天天天,拪郎兆緼療粂茇瀴搤蒷时靿鉝嶥栎暿燠库咴镃漄私茔袮琕轔许鯽樭茌三喅糑晕書蔢紇攪肁屿齫疲鑵奙擌淴妽箈瘆羔幊祍滝腥嚡妭郾鏹悜翯嫿鐋炯蓧搱阷盱怷礣船顺彠妶旑衋跳讛詺賒菐扯壬幓蹥錾腻啁愦炇瀶煹枥哭鸟櫚黛亞羷禊矔睖寄驶曺毣垢譵坕灂賳缯涾沮遳黎駜靆厽乻贽駪砿攅樖撹笂嶳醆熬眇朜酌董滒嗻慱格齗陋激焧会凾礘碴蕬瓉愄螶甲捸穱齲峺蔼鸹霥嘖橧鲰徥纵覥燱孧锛辀躏葖鰳侁鲅鬍龗砏鐄橮谈篧鸞煐淭揀梊攌犚磒瞹喧媹恼峙丞饍蟖