植物组织培养复习资料付答案仅供参考.doc

植物组织培养复习材料一、名词解释。1、植物组织培养(plant tissue culture)：植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术2、脱分化（dedifferentiation）：指失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞即愈伤组织的现象。3、再分化（redifferentiation）： 愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。4、外植体(explant)： 植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。（如器官、组织、细胞、原生质体、种子等）5、愈伤组织(callus)： 原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。在组培中，则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。6、器官发生： 胚胎时期由胚层器官原基发育成器官的过程。包括细胞分化和器官形成。7、胚状体发生： 在植物细胞、组织或器官体外培养过程中，由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。可进一步发育成植株。8、细胞全能性（cell totipotency）： 指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。9、细胞分化： 一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。10、极性： 细胞（也可指器官或植株）内的一端与另一端在形态结构和生理生化上的差异。11、试管苗：通过组织培养产生的植株。 12、看护培养： 是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。这块愈伤组织被称为看护组织。13、固相化培养：将细胞或原生质体固着在琼脂糖、藻（月元）酸盐或多聚赖氨酸中，然后将他们放入液体培养基中震荡培养。这种培养方法既利用了振荡培养室营养物质和气体易于交换的优点，有利用了固相化使细胞免受振荡时剪切力的作用。 14、悬浮细胞培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。适用于大规模的培养，使细胞工程的基本平台。 15、植板效率=（每个平板中新形成的细胞团数/每个平板中接种的细胞数）*10016、实验室的组成及功能： 1.基本实验室 （1）准备室 （2）接种室 （3）培养室2.辅助实验室 （1）细胞学实验室 （2）摄影室及暗室 （3）生化分析室（无菌操作室、化学实验室、培养室、细胞学观察室、暗室）。17、植物种质： 物亲代通过生殖细胞或体细胞传递给后代的遗传物质，植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称。18、玻璃化现象： 指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。19、基本培养基： 包括大量元素和微量元素（无机盐类）、维生素和氨基酸，还有糖和水等。20、完全培养基： 在基本培养基基础上，根据各种不同试验要求，添加各种植物生长调节物质以及其他复杂有机附加物，包括有些成分尚不完全清楚的天然提取物。21、 外植体褐变： 在组织培养过程中，外植体向培养基中释放褐色的物质（醌类）致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之变成褐色而逐渐死亡的现象。22、 微体快繁： 利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖方法。23、 微体嫁接： 把极小（小于0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生木上，然后将嫁接后的砧木接种到新培养基上培养。24、 敏感植物：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特殊的病斑，如马铃薯病毒千日红、黄烟花、心烟叶、毛叶蔓陀罗。菊花病毒矮牵牛。25、 固相化的方法：凝胶包埋、表面吸附、网格及泡沫固定、膜固定。26、 悬浮细胞培养:将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。27、 固相化细胞培养：把细胞固定在一种惰性基质，如琼脂、藻盐酸、聚丙烯酰胺、纤维或膜上面或里面，细胞不能运动，而营养液可以在细胞间流动，供应其营养。28、 条件培养：在选用的培养基中，加入一定量以生长过组织或细胞的培养液（离心去除组织或细胞）称条件培养液。用条件培养液培养细胞，即使接种的细胞密度低于最低有效密度，这些细胞也能生长和分裂。30、再分化培养：31、液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。32、细胞培养： 指从植物体中分离了单细胞，无人工条件下进行培养，使其生长增殖，甚至发育成完整植株的技术。33、无病毒苗：指不含该种植物主要危害病毒的苗木。 34、原生质体融合： 指使分离下来的不同亲本的原生质体，在人工控制的条件下，像性细胞受精作用那样互相融合成一体，又称体细胞杂交。35、胚状体：体细胞在一定条件下所诱导形成的胚称为体细胞胚，即胚状体36、原生质体： 指去掉细胞壁的由质膜包裹有生命活力的裸细胞。37、单倍体植株： 只含有配子体染色体组数的植株。38 人工种子：指通过组织培养技术，将植物的体细胞诱导在形态上和生理上均与合子胚相似的体细胞胚，然后将它包埋于有一定营养成分和保护功能的介质中，组成便于播种的类似种子的单位。39、离体授粉：将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来,进行无菌培养,并以一定的方式授以无菌花粉,使之在试管内实现受精的技术,又称为离体受精或试管受精40、植物生长调节剂：植物中调节生长及其他功能的激素类物质。主要分为三类：植物生长素类、细胞分裂素类和赤霉素类。 41、器官培养：指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。42、植物胚胎培养：指对植物的胚、胚胎、胚珠和子房的培养。二、不定项选择 （每题2 分，共10分）、下列不属于生长素类的植物激素是_ _A D_。A Kt； B IAA； C NAA； D ZT、影响培养基凝固程度因素有_ _ABCD_。A 琼脂的质量好坏； B 高压灭菌的时间； C 高压灭菌的温度； D 培养基的PH、第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是：BA Morel； B Haberland； C Schleiden； D White、下列不属于大量元素的盐是_C_ _。A NH4 NO3 ； B KNO3 ； C ZnSO4 .7HO2； D MgSO4 .7HO2、下列实验中可能获得单倍体植株的是_ _BCD_。A 小麦的茎尖培养；B 番茄花药培养；C 玉米胚乳培养；D 玉米花粉培养6、活性炭在组织培养中的作用有_ ABC_。A 吸附有毒物质； B 减少褐变，防止玻璃化； C 创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长； D 增加培养基中的养分7、下列具有细胞全能性的细胞是：_ ABCD_。A 成熟的老细胞；B 幼嫩的组织细胞；C 愈伤组织细胞D 番茄的受精合子8、下列培养基中_C _无机盐的浓度最低。A MS 培养基；B B 培养基；C White 培养基；D N6 培养基9、从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历_ _ACD_三个时期。A 诱导期；B 潜伏期；C 分化期；D 分裂期10、植物组织培养的特点是_ ABCD_：A 培养条件可人为控制；B 生长周期短，繁殖率高；C 管理方便；D 取材少11、高温易被破坏分解的植物激素是_ABD _。A IAA；B GA；C NAA；D Zt12、同一植株下列_ _B_部位病毒的含量最低。A 叶片细胞；B 茎尖生长点细胞；C 茎节细胞；D 根尖生长点细胞13、在原生质体的培养中，渗透稳定剂的作用是 -A- ：A 稳定原生质体的形态而不使其被破坏 B 支持作用C 提供营养 D 调节PH 值14、下列实验中不可能获得单倍体植株的是_ AC_。A 水稻茎尖培养；B 草莓花药培养；C 玉米叶片培养；D 棉花胚乳培养15、适合花粉培养的最适时期是 -B-：A 单核早期 B 单核靠边期 C 二核期 D 三核期16、IAA需要用_ C_法灭菌。A 灼烧灭菌；B 干热灭菌；C 过滤灭菌 D 高压湿热灭菌17、能打破种子休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是 -AB-：A GA；B IAA；C NAA；D ZT18、下列实验中可能获得单倍体植株的是_ BCD_。A 小麦的茎尖培养；B 番茄花药培养；C 玉米胚乳培养；D 玉米花粉培养19、下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是_ ABCD_。A 细胞分裂加快 B 正在分裂的细胞体积小，内无液泡C 细胞的核和核仁增至最大 D 细胞中的RNA 含量减少，而DNA 含量保持不变20、赤霉素（GA）需要用_C_ _法灭菌。A 灼烧灭菌；B 干热灭菌；C 过滤灭菌 D 高压湿热灭菌21、第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_ B_：A Morel ；B Haberland ；C Schleiden ；D White22下列那种方法不能脱除感染植株体内的病毒 AC 茎段培养； 微茎尖培养； 愈伤组织的继代培养 ； 珠心胚培养23适合外植体材料表面消毒的方法是 B 高压蒸汽； 适宜浓度的消毒剂浸泡； 紫外线消毒 ； 熏蒸消毒24、经高温灭菌后。培养基的pH会 AA 降低 B 升高 C 不变 D 不能确定25、在植物组织培养中，培养基的PH值一般为 BA 低于5.0 B 5.55.8 C 6.07.0 D 高于7.026、下列有关细胞全能性的含义，正确的是 CA 每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能B 生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能C 生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能 D 生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程27、下列那种方法不能脱除感染植株体内的病毒（ AC ） A 茎段培养； B 微茎尖培养。 C 愈伤组织的继代培养 ； D 珠心胚培养。28、下列不属于生长素类的植物激素是_ A_。A 6-BA； B IAA； C NAA； D IBA三、填空题（每空1分，共20分）1、去除植物病毒的主要方法是_组培法_和_理化法_两种方法，当把二者结合起来脱毒效果最好。2、原生质体的融合可实现_ 体细胞_的杂交，其融合的方式分为_自然融合 _和_人工诱导融合_两类。3、在组织培养中，非洲菊是靠_丛生芽 _的方式进行繁殖的，而蝴蝶兰是以_原球茎增殖_的方式进行快繁的。4、单细胞培养的方法主要有 -看护培养-、 -微室培养- 及 -平板培养-。5、在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以_0.30.5_mm、带_12_个叶原基为好。6、植物组织培养按培养过程中是否需要光，可分为_ _光_培养和_ _暗_培养。7、细胞的再分化有 -器官发生- 和 -体胚发生- 两种形式。8、连续培养有 -浊度恒定法- 和-化学恒定法- 两种方法。9、通过茎尖培养脱毒苗的过程中，切取茎尖的大小与其成活率成_正比 _，而与脱毒效果成_反比 _。10、一个已停止分裂的成熟细胞转变为_未分化_状态，并形成_未分化的愈伤组织_的现象称为脱分化。11、植物的胚胎培养，包括_胚_培养、_ _胚乳_培养、_胚珠_培养、子房培养以及离体授粉的。12、在组织培养中，IAA、ZT 和GA 必须用_过滤灭菌_法灭菌，而接种室空间采用_ _紫外线照射_或_甲醛熏蒸_法灭菌。13、幼胚培养时，其发育过程有_ _早熟萌发_、_ _呸性发育_、_ _形成愈伤_三种方式。14、原生质体的分离有_ _机械法_和_ 酶降解法_两种方法。15、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为_普通茎尖培养_培养和_茎尖分生组织_培养两种类型。16、花药培养是_ _器官_培养，花粉培养属于_ 细胞_培养，但二者的培养目的一样，都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成_单倍体植株 _。17、不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生_ClO-_来杀菌的；升汞是靠_重金属_来达到灭菌目的。18、一个已停止分裂的成熟细胞转变为_ 分生_状态，并形成_ 未分化的愈伤组织_的现象称为脱分化。19、White 培养基_ _无机盐_浓度低，适合生根培养。20、在无毒苗的组织培养中，外植体的大小与其成活率成_ _正比_，而与脱毒效果成_ _反比_。21、由胚乳培养可以获得_ _单_倍体植株，经秋水仙素处理可以获得_二 _倍体植株。22、使单倍体植株染色体加倍的途径主要有 -自然加倍-、 -人工加倍- 和 -通过愈伤组织再生加倍。23、细胞悬浮培养有 -成批培养- 和 -连续培养- 两种类型。24、通过植物组织培养获得无病毒苗的方法主要有 -茎尖分生组织培养-、 -愈伤组织培养- 、 -珠心胚培养-及-花药培养-。25、植物组织培养按培养对象分为-器官培养-、-组织或愈伤组织培养-、-细胞培养-、-植株培养-_等几种类型。26、1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物 细胞全能性 的理论概念；1943年White 提出植物细胞“_全能性_”学说，并出版了植物组织培养手册，从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。27、细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的-全部遗传信息-_和-发育成完整植株-的潜在的能力。28、6-BA / NAA 的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进_ 根_的生长，这时_ _脱分化_占主导地位；比值高促进_ _芽_的生长，这时_ 再分化_占主导地位。29、在组织培养中，不耐热的物质用_ _过滤灭菌_法灭菌，而培养基常用_ 湿热灭菌_法灭菌。30、组织培养中有三大不易解决的问题，它们分别是_ 污染_、_褐变_、_玻璃化_。31、愈伤组织的形态发生有_器官形态建成 _和_ 胚形态建成_两种情况。33、在组织培养中，IAA和GA 必须用_ _过滤_法灭菌，而接种室空间采用_ 70%的酒精_或_ 2%新洁尔灭喷雾或甲醛熏蒸_法灭菌。36、根据培养的材料，植物组织培养分：_愈伤组织培养_、_器官培养_、_细胞培养_、_原生质培养_等类型。37、组织培养植株再生的途径： _直接产生不定芽_ 和 _通过愈伤组织形成不定芽_ 。38、植物组织培养的发展分为三个阶段：_萌芽阶段_ 、 _奠基阶段_ 和 _快速发展和应用阶段_阶段 。40、外植体污染原因从病源分面主要有真菌 和细菌 两大类41、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源 ，而且还能维持培养基渗透压42、外植体灭菌一般先用酒精，再用升汞 浸泡43、由 愈 伤 组 织 后 成 大 致 经 历 诱 导 期、分 裂 期 、分 化 期 、三 个 时 期。由 愈 伤 组 织 再 生 植 株 有 两 条 途 径 和45、常用的生长素有IAA、2，4-D、IBA NAA等，常用的细胞分裂素KT、ZT、6-BA46、防褐变的措施：选取适宜的外植体和培养条件、剪切时尽量减少伤口面积、剪切口尽量平整、连续转移（继代培养）、加入抗氧化剂47、植物常用脱毒方法：热处理脱毒原理、茎尖培养脱毒原理、化学药剂处理、冷处理原理、原生质体，愈伤组织培养法、花药培养、株心胚培养脱毒48、实验室必须满足三个基本的需要：_试验准备_、_无菌操作_、_控制培养_。49 植物组织培养的难题是 褐变 、 玻璃化 和 污染 及变异现象50 植物组培获得单倍体植株的方法是进行 ,而获得三倍体的方法是进行 52、生长素与细胞分裂素比值高有利 根 生长，比值低有利 芽 生长，比例合适诱导 愈伤组织 53、植物组织培养按培养基的物理状态分为_固体_培养和_液体_培养 半固体培养基 四、判断题（对的画“”；错题画“”。每题1分，共5分）、2，4D 可用01molL 的HCl 助溶，再加蒸馏水定容。 ( x )、幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。( )、在MS 的培养基成分中，MgSO47HO 属于微量元素。( x )4、一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，光照强度较弱幼苗生长粗壮。( x )、由性细胞发育而成的胚叫做胚状体，而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚。( x )6、一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先要经历脱分化过。( )7、由性细胞发育而成的胚叫做胚状体，而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚。( x )8、用于外植体、手、超净台等的表面消毒酒精浓度越大，消毒效果越好越好。( x )9、经过花药培养所获得的植株都是单倍体。( x )10、幼嫩的组织比成熟的老组织脱分化难。( x )11、通过子房的培养，即可能等到单倍体植株，也有可能得到二倍体植株。( )12、兰花可以通过芽丛分离的组培途径快繁，非洲菊通过原球茎增殖的途径快繁。 ( x )13、单细胞培养可以采用发酵罐进行培养。( x )4、6-BA 可用0.1molL 的HCl 助溶，再加蒸馏水定容。 ( )15、环境的相对湿度过低易使培养基丧失大量水分，湿度过高时，则易造成污染。( )16、一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先要经历脱分化过程。( )17、环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80-90的相对湿度。( )18、通过花药培养，即可能等到单倍体植株，也有可能得到二倍体、三倍体甚至更多倍体植株。( )19、单体细胞比二倍倍体细胞容易诱导愈伤组织。( x )20、固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。( x )21、2，4-D 可用01molL 的NaOH 或KOH 助溶，而后加无菌水定容。( )22某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗 ( ) 23细胞分裂素/生长素的比值较高时，利于愈伤组织和芽的诱导 X24细胞的全能性，可以通过成熟细胞的脱分化和再分化过程体现 25铁盐，常用乙二胺四乙酸铁螯合物，以防被氧化为不溶的氢氧化铁.26. 用茎尖分生组织脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成反比。X30 对于含有琼脂糖的培养基而言，在pH值高于6.5时，培养基不能很好地凝固；低于5.0时，培养基会变硬.X31 由性细胞发育而成的胚叫做胚状体，而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚 X五、简答题（每题5分，共15分）1、培养基一般包括哪些基本成分?答：培养基的成份有：（1）无机营养：包括：氧(O)、碳(C)、氢(H)、氮(N)、钾(K)、磷(P)、镁(Mg)、硫(S)和钙(Ca)等大量元素；铁（Fe ）、铜（Cu）、锌（Zn ）、锰（Mn ）、钼（Mo ）、硼（B ）、碘（I）、 钴（Co）、氯（Cl）、钠（Na ）等微量元素（2）有机营养：氨基酸、天然提取物、维生素、糖类（3）植物生长调节物质：主要包括生长素类和细胞分裂素类。（4）其他：包括水、活性炭、琼脂等。2、 培养基、培养器皿和植物材料通常怎样灭菌?答：培养基一般采用湿热灭菌，如果培养基中的有些成分高温易分解，则可采用过滤灭菌.培养器皿可采用湿热灭菌或干热灭菌。植物材料一般采用药剂浸泡灭菌，具体操作如下：（1）外植体的预处理，对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，并将外植体用流水冲洗干净。（2）用70%的酒精浸润材料30s 左右。（3）用灭菌剂浸泡灭菌，灭菌时不时搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触，若灭菌过程中加入数滴吐温，则灭菌效果更好。（4）植物材料用无菌水冲洗3-5 次，以除去灭菌剂。3、提高商品化生产效率：1.节约能源 2.减少劳务开支 3.扩大生产规模 4.节约生产材料补：降低商业化生产成本提高经济效益： 4、针对试管苗生产所需的费用，应采取相应措施降低生产成本，增强产品竞争力，提高试管苗经济效益。 5、诱导体胚的条件: 1外植体：产生部位：尤其胚、下胚轴、幼根、花序轴组织、未成熟的子房等；生理状态：采用外植体增殖能力较强时候的状态；基因型。2.培养基：特别重要的是培养基中的生长素和N源。N源：还原态氮/硝态氮适宜比值。3.生长调节剂：生长素：所有生长素中，2,4-D被证明是极有效的。体胚发生2个阶段：胚的分化，胚性细胞的形成（需2,4-D）；胚状体的发育（低或去除2,4-D）。2,4-D会诱导乙烯的产生，导致纤维素酶等活性升高，引起胚性细胞团的破坏。细胞分裂素：细胞分裂素与生长素配合促进诱导体胚形成。赤霉素和脱落酸：GA、ABA抑制体胚形成，但ABA可促进胚状体的正常发育，防止畸形胚的产生，尤其是对体胚成熟特别重要。细胞再分化：是指脱分化的分生细胞重新恢复分省能力，沿着正常的发育途径形成具有特定 结构和功能的细胞。 6、组培实验室的组成，基本设备和功能答：组织培养实验室基本组成：（1）无菌操作室 （2）化学实验室（3）培养室 （4）细胞学观察室 （5）暗室 （6）驯化移栽室； 无菌操作室基本设备有超净工作台、紫外灯、小搁架。无菌操作用的器具，主要进行无菌操作；化学实验室基本设备有干燥箱、电子天平、量筒、吸管、烧杯、高压灭菌装置等，主要用于配置好培养基；培养室设备有固定式培养架、旋转式培养架、转床、摇床、控温、控光设备，是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。细胞学观察室有显微镜、解剖镜、及照相设备，用于观察，记录培养材料的生长情况及结果；暗室用于实验室材料的摄影记录，有放大机、暗箱、上光机等设备；驯化移栽室用于试管苗移栽，有弥雾装置、遮阴网、移植床等。7、培养基的配制答：配制培养基时应做好下列准备工作：（1）实验用具的准备 （2）试剂、药品的准备 （3）根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算所需的各种母液及其他附加物的量。具体操作如下：1，取规定数量糖原和凝固剂，加热使之溶解 2，根据计算所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊附加物，搅拌均匀 3，加水定容至规定体积 8、无菌操作技术答：无菌操作技术分为物理灭菌干热、湿热、射线处理，物理除菌过滤，化学方法消毒剂、抗菌素灭菌。注意事项：（1）瓶口要清洗干净 （2）培养瓶上的标记要擦净 （3）冬季用热水溶解洗衣粉后再洗 （4）洗过玻璃器皿要沥干或烘干 （5）移液管之类的量具和计量仪器不直接烘烤。实验室一般使用高压灭菌锅，是在0.105mpa压力下，锅内温度达到121，在此水蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。9、热处理脱毒法答：原理：（1）高于正常温度的环境（3540）时，组织内部的病毒部分或全部钝化 （2）热处理使病毒失去传染力。方法：1，适用于离体材料和休眠器官的处理。在50左右温水浸渍10min至数小时2，热空气法：盆栽植物移入温热疗室，3540，适合茎尖，处理时间短则几十分钟，长可达数月。局限性：1并非所有的病毒都对热处理敏感 2 延长热处理时间，也可能会钝化，植物组织中的抗性因子 3处理后只有一小部分植株能存活。10、快繁中几大难题及解决方法答：影响快繁的方法有内因有外因。因主要是外植体的选取，应该在春夏、早秋时根据外植体基因型和生理、发育等方面选取0.51cm的。外因，首先是污染，防止污染应从以下几方面考虑：（1）选择植物材料（2）严格消毒灭菌（3）合理安排繁殖程序（4）规范操作 2，褐变问题，克服外植体产生褐变的措施有（1）选择适合的外植体和培养条件（2）连续转移（继代培养）（3）加入抗氧化剂；3，玻璃化，控制和克服玻璃化的措施有（1）使用透气好的封口材料 （2）光照 （3）温度 （4）提高琼脂的量 （5）硝态和氨态的比例提高 （6）继代培养时，降低ck/IAA，增加乙烯醇等 （7）抗逆性的锻炼。原球茎：缩短的呈珠粒状的，由胚性细胞组成的，类似嫩茎的器官11、植物组织培养的应用及意义：理论研究(在遗传、生理、生化、病理等研究上的应用)；快繁；脱毒；遗传育种（单倍体育种、突变育种、抗性选育、体细胞杂交）；次生代谢产物生产（主要用于药物、食品、调料、香精、颜料等领域）；种质资源保存和交换；人工制种。13、植物遗传转化的方法： 1.通过载体系统：病毒、细菌质粒 2.非载体介导：种质系统（自身生殖系统细胞，如花粉）、直接转化系统（基因枪、超声波）。14、 原生质体融合的原理和方法答：植物原生质体最大特性是去掉细胞壁的裸细胞无论来源如何都具有彼此融合的能力 1.自发融合 2.诱发融合：a，NaNO?处理 b，高PH值高浓度钙离子处理 c，聚乙二醇（PEG）处理 d，电融合 3.化学融合15、 外植体消毒应注意的问题：1.要考虑药剂对各类菌类的杀灭效果，从中选出最有效的杀菌剂；2.考虑植物材料对杀菌剂的忍耐力。17、 快繁的基本程序：1.稳定无菌培养体系的建立时期；2.稳定培养系的增殖、生长和健壮时期；3.诱导茎芽生根形成小苗时期；4.生根小苗移栽和驯化时期；5.商品苗培育时期。18、 植物离体快繁中常见的问题：污染、遗传稳定性、玻璃化、褐化、黄化等19、 克服外植体褐变： 选取适宜的外植体和培养条件；剪切时尽量减少伤口面积，剪切口尽量平整；连续转移（继代培养）；加入抗氧化剂。20、 玻璃化苗产生原因： 乙烯过饱和，引起解氨酶活性降低，阻碍木质化进程；细胞激动素或铵离子的过剩也是一种原因；植物的磷酸戊糖代谢途径与玻璃苗产生也有关。22、 控制玻璃化苗的措施： 1.使用透气性好的封口材料，尽可能降低培养容器中空气的湿度，改善氧气的供应情况。2.选择合适的激素种类和浓度，注意生长素和分裂素的配合，尽量兼顾繁殖系数。3.采用固体培养基，适当增加琼脂含量，降低培养基中的水势。4.高温季节培养室要有降温措施，避免培养基温度的突然升高。5.改变供氮形态。6.在培养基中适量地添加间苯三酚或根皮苷、青霉素G钾、活性炭、聚乙烯醇均可以有效的抑制玻璃苗的产生。7.适当地延长光照培养皿的时间或增加自然光照，提高光照的强度，有利于克服玻璃化。8.适当提高培养基中无机盐的含量。23、 不定芽与体胚芽比较： 1）体细胞胚最根本的特征是具有两极性 （2）体胚的维管组织与外植体的该组织无解剖结构上的联系，而不定芽或不定根往往总与愈伤组织的维管组织联系 （3）体细胞胚维管组织的分布是独立的“Y”字形，而不定芽的维管组织无此现象。24、 茎尖培养脱毒的原理：1.病毒在植物体内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀；2.病毒DNA分子与细胞分装蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势；3.病毒的复制赶不上细胞分裂的速度。 关键：通常茎尖培养脱毒的效果与茎尖的大小呈负相关，与成活率呈正相关。操作程序：外植体表面灭菌，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基土培养，并及时观察记录培养结果。25、在植物组织培养中细胞分裂素和生长素各有什么作用？答：生长素能促进细胞的纵向伸长，它的作用具有两重性：既促进生长，又能抑制生长、甚至杀死植物；既促进发芽，又会抑制发芽；既能防止落花落果，又可疏花疏果。这取决于浓度、细胞的年龄和器官的种类。一般低浓度促进生长，中浓度抑制生长，高浓度则杀死植物。细胞分裂素能促进细胞分裂和扩大、延迟衰老和保鲜、诱导芽的分化、促进侧芽发育，防止果树生理落果、打破种子的休眠，促使其发芽等作用。26、 什么是看护培养?其具体的方法是什么？答：看护培养指用一块生长活跃的愈伤组织来看护单个细胞或其他培养物，使其生长和增殖的方法。具体方法：1、将生长活跃的愈伤组织放入灭过菌的固体培养基上，并在愈伤组织上放一片无菌滤纸片。2、将该愈伤培养过夜。3、将单细胞或其他培养物放于滤纸片上面，移入培养室培养。27、 培养基、培养器皿和植物材料通常怎样灭菌?答：植物材料一般采用药剂浸泡灭菌，具体操作如下：1、外植体的预处理，对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，并将外植体用流水冲洗干净。 2、用70%的酒精浸润材料30s 左右。 3、用灭菌剂浸泡灭菌，灭菌时不时搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触，若灭菌过程中加入数滴吐温，则灭菌效果更好。 4、植物材料用无菌水冲洗3-5 次，以除去灭菌剂。培养基和培养器皿可采用湿热灭菌，培养器皿也可采用干热灭菌，有些培养器械也可采用洒精灯火焰灼烧。29、 NAA 的中文名称是什么？有何作用和特点？答：NAA 的中文名称是荼乙酸，是植物生长素的一种。作用和特点为：促进植物细胞纵向伸长，促进植物细胞脱分化，促进根的生长。除此以外还具有植物生长素类有一般性质：它的作用具有两重性：既促进生长，又能抑制生长、甚至杀死植物；既促进发芽，又会抑制发芽；既能防止落花落果，又可疏花疏果。这取决于浓度、细胞的年龄和器官的种类。一般低浓度促进生长，中浓度抑制生长，高浓度则杀死植物。30、 实验室设备：1.恒温箱、生化培养箱、光照培养箱、人工气候箱和植物生长箱 2.烘箱 3.空调、加热器 4.灭菌设备 5.冰箱和冰柜 6.振荡和旋转培养机 7.天平 8.酸度计 9.显微镜 10水浴锅 11.蒸馏水制造装置 12.超净工作台31、无菌操作技术：1.常用灭菌方法及其使用范围（湿热灭菌、干热灭菌、过滤灭菌、射线灭菌、药剂灭菌） 2.培养基灭菌 3.植物材料的灭菌 4.接种15、培养基的制备：1.母液的配制与保存 2.培养基的配制 3.培养基的灭菌 4.培养基的保存32、培养基的制备：1.母液的配制与保存 2.培养基的配制 3.培养基的灭菌 4.培养基的保存33、高压蒸汽灭菌锅操作程序：将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅的消毒桶内，灭菌锅内添加适量的水，盖好灭菌锅盖，对角拧紧螺丝；检查一下放气阀有无故障，然后关闭放气阀，打开电源加热，当压力表指针达0.05mpa时，打开气阀，排出锅内空气，再关闭气阀，此时锅内取而代之的是水蒸气，当高压锅内温度达121，压力为0.105mpa时保持此压力灭菌约1520min，然后切断电源，缓缓打开放气阀放气，待高压锅压力表指针恢复到零后，开启压力锅并取出培养基，室温下冷却。 34、为什么要有一定的细胞起始浓度？答：细胞能够合成某些对进行分裂所必须的化合物，只有当这些化合物的内生浓度达到一个临界点以后，细胞才能进行分裂，当细胞密度处于临界点密度以下是永远达不到这种平衡状态，因此细胞也就不能分裂。22、体细胞杂交按所用亲本原生质体的性质可分为3类：体细胞杂交(用双亲体细胞原生质体或其衍生系统进行诱导融合)；配子间细胞杂交（用双亲的性细胞原生质体作为融合亲本进行融合、培育、筛选、鉴定等过程）；配子和体细胞杂交（一个融合亲本为性细胞原生质体，另一个为体细胞原生质体间的杂交过程）。35、体细胞杂交按所用亲本原生质体的性质可分为3类：体细胞杂交(用双亲体细胞原生质体或其衍生系统进行诱导融合)；配子间细胞杂交（用双亲的性细胞原生质体作为融合亲本进行融合、培育、筛选、鉴定等过程）；配子和体细胞杂交（一个融合亲本为性细胞原生质体，另一个为体细胞原生质体间的杂交过程）。36、 固相化细胞培养的优点： 1.有利于次级代谢产物的积累；2.细胞经包埋后，可以减小剪切力的损伤，有利于产物合成和分泌；3.有利于进行连续培养和生物轻化等。 37、简述植物组织培