各种激素最新检测方法.doc

浅谈内分泌科室常见激素的检测方法1.糖化血红蛋白离子交换高效液相色谱分析法-检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准。 基于血红蛋白b链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。在中性pH条件下，HbA1c携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将其与其它组(HbA1c，HbA1b，HbA1a，HbF，HbA0)区分开，得到分离。此方法曾应用于美国DCCT的研究，是目前检测HbA1c的金标准。2.肾素-血管紧张素-醛固酮系统2.1放射免疫学方法：这是历史最长也是目前应用最广泛的方法。基本原理是通过测量肾素催化血管紧张素原反应产生血管紧张素I的速度来评价RAS的活性。现在我国普遍使用的是由北方生物技术研究所生产的放射免疫法制剂，肾素的线性范围0.19-6.10ug/L，灵敏度是0.1ug/L。2.2高效液相色谱法：目前这种方法仅用于科研，还未对人类得标本的检测报道。2.3酶联免疫吸附法：这种方法的局限性是测得总的肾素含量，包括无活性的肾素。由于ELISA的灵敏性不如放射免疫法，而血浆中的肾素含量又比较少，限制了ELISA方法在肾素检测中的应用。2.4荧光免疫法：近年来有人用荧光免疫法测肾素的浓度，而且与放射免疫法和ELISA的方法比较，敏感度更好，检测限为0.1mU/L的肾素，样品回收率90%，标准差比放射免疫法低32%，而且延长全血在室温下放置的时间不影响结果。虽然目前有许多方法可以测RAS的活性，但是，各自都有一些局限性限制了它们的广泛应用。放射免疫法是现在RAS检测中的金标准。它测的是有活性的肾素，而其他方法测得是总的肾素。但实验中需要用到放射性物质，不可避免地会损害实验人员的健康。酶联免疫法操作简便，对实验室要求也不高，并且生物素和亲和素的应用也提高了ELISA试剂的敏感度，有取代放射免疫法的趋势，但是由于开发RAS ELISA试剂的公司较少，且缺乏权威机构的有效评价，目前只用于科学研究，临床检测中还没有广泛应用。荧光免疫检测的情况与ELISA类似。高效液相色谱检测的重复性最好，但需要的设备比较昂贵，规模不大的实验室很难开展。所以实验室应根据自己的条件选用合适的方法。3.儿茶酚胺类激素及其代谢产物测定尿儿茶酚胺类参考值：1.65mol/24h尿VMA参考值：新生儿5mol/24h 婴儿10mol/24h 青春期25mol/24h 成人10-35mol/24h尿3-氧-甲基肾上腺素参考值：成人5.07mol/24h血浆NE参考值：成人0.6153.24nmol/L血浆E参考值：成人109-437pmol/LVMA测定可用于观察肾上腺髓质交感神经的机能。在定量意义上VMA是儿茶酚胺代谢产物中最重要的化合物，可用来估计内源形成的儿茶酚胺，其升高见于嗜铬细胞瘤及肾上腺髓质增生。 VMA测定有比色法和HPLC法。由于HPLC操作繁杂，临床常规测定多采用比色法，比色法受食物和某些药物的干扰。巧克力、咖啡、茶、香蕉、柠檬、多种拟肾上腺素药品、含多巴胺成分的药品都可导致假阳性，芬氟拉明可致假阴性。测定前应对上述饮食和药物加以限制。VMA化学法测定操作步骤多，需严格各步操作程序。 由于昼夜VMA的分泌率有波动，建议收集24h尿液混合送检。收集器应用一个大的具塞洁净玻璃瓶，加入6mol/L盐酸10ml作为防腐剂。整个留尿过程中，留尿器须置冰箱内。送检尿样须放4冰箱或冰冻保存。 如尿游离儿茶酚胺类物质和尿VMA明显升高，有助于嗜铬细胞瘤的诊断，但其特异性及灵敏度都不够，且干扰测定因素较多。用HPLC电化学方法可以分别测定血浆E及NE，对本病的诊断价值更高。但也有很多其他影响因素，如采血技术，患者情绪，标本的处理及操作等需要注意。嗜铬细胞瘤时两者明显升高。 本病可以是持续性型或阵发性型，如为阵发性型者，应在发作时进行各项检查，容易得到阳性结果。 用HPLC电化学方法可以分别测定血浆E及NE，对本病的诊断价值更高。但也有很多其他影响因素，如采血技术，患者情绪，标本的处理及操作等需要注意。嗜铬细胞瘤时两者明显升高。 本病可以是持续性型或阵发性型，如为阵发性型者，应在发作时进行各项检查，容易得到阳性结果。ACTH测定以放免方法为主，有抽取法和直接法，后者简便，但易受其他物质干扰。ACTH极不稳定，放置室温易受蛋白酶降解，血样应用EDTA抗凝，并立即分离血浆冷藏，冷冻可稳定数月。4.甲状旁腺激素甲状旁腺激素(PTH)：血中PTH测定常用放射免疫测定法，由于使用抗血清的特性不同，分为PTH的N末端和C末端测定两种，N末端是PTH的生物活性部位，在血中的半寿期短，适用于观察负荷试验等变化比较迅速的过程，而C末端比较稳定易测。静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。5.降钙素原5.1放射免疫学分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。该方法能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。该法检测耗时长(1922h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制。5.2抗夹心免疫化学发光法(ILMA)运用双单克隆抗体，其中一个抗体为降钙素抗体，另一个为抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位，可排除交叉反应。其中一个抗体是光标记的，另一个未标记的抗体固定在试管的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体，发光部位于反应管的表面。该法操作简便，特异性强，敏感性高，测定的低限值为0.1ng/mL，2h可以出结果。5.3比色法(B.R.A.H.M.SPCT-Q-半定量快速实验)采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗降钙素的单克隆抗体和非特异性的抗抗体，当标本(血清或血浆)加人标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。该复合物在反应膜上移动，与固定在膜上的抗抗体结合形成更大的复合物。当PCT浓度超过0.5ng/mL，该复合物显示红色，红色的深浅与PCT的浓度成正比，与标准比色板比较即可得出PCT的浓度范围。结果分为四级:正常0.5ng/mL；明显升高2ng/mL；显著升高10ng/mL。该法具有快速简便，易观察的特点。5.4放射免疫浊度法样品中的PCT与试剂中的PCT单克隆抗体发生抗原-抗体反应，使反应液浊度增加，并在一定范围内反应液浊度与所加人抗原的量呈线性关系，可使用生化分析仪或其它光学检测仪器在6O0nm波长处测定反应液吸光度值，反应液吸光度值与所测PCT浓度成正比。该测定方法简便、快速，可自动化，适