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第三章：氨基酸、肽类、蛋白质化学一、填充题1 组成蛋白质氨基酸的结构通式是（ ）。2 具有紫外吸收能力的氨基酸有（ ）、（ ）和（ ），其中以（ ）的吸收最强。3 脯氨酸是（ ）氨基酸，与茚三酮反应生成（ ）色物质。4 （ ）和（ ）是相对分子质量小且不含硫的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。5 范斯莱克（Van Slyke）法测定氨基氮主要利用（ ）与（ ）作用生成（ ）。6 实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应，然后用碱来滴定（ ）上放出的（ ）。7 赖氨酸带三个解离基团，它们的pK分别为2.18，8.95及10.53。赖氨酸的等电点为（ ）。8 肽链的N末端可以用（ ）法、（ ）法、（ ）法和（ ）法测定，而（ ）法和（ ）法是测定C末端氨基酸最常用的方法。 ）。9 蛋白质分子的-螺旋结构，每圈螺旋包含（ ）个氨基酸残基，螺距为（ ）nm，每个氨基酸残基沿轴上升高度为（ ）nm。天然蛋白质分子中的-螺旋大多属于（ ）手螺旋。二、是非题1 某化合物和茚三酮反应呈蓝紫色，因而可以断定它是氨基酸或是蛋白质。（ ）2 亮氨酸疏水性比缬氨酸强。（ ）3 氨基酸在水溶液或在晶体状态时都以两性离子形式存在。（ ）4 合成的多聚谷氨酸在pH7时，其-羧基电离为-COO-，由于静电相斥，分子较松散，在pH4时并不电离，容易形成螺旋结构。（ ）5 溶液的pH可以影响氨基酸的pI值。（ ）6 组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。（ ）7 蛋白质分子中个别氨基酸的取代未必会引起蛋白质活性的改变。（ ）8 二硫键和蛋白质的三级结构密切有关，因此没有二硫键的蛋白质就没有三级结构。（ ）9 凝胶过滤法可用于测定蛋白质的分子量，分子量小的蛋白质先流出柱，分子量大的后流出柱。（ ）10 蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。（ ）三、选择题1 下列哪种氨基酸溶液不能引起偏振光的旋转（ ）A 丙氨酸 B 甘氨酸 C 亮氨酸 D 丝氨酸2 下列氨基酸在生理pH范围内缓冲能量最大的是（ ）A Gly B His C Cys D Asp3 分子中含有两个不对称碳原子的氨基酸是（ ）A Pro B Tyr C Thr D Arg4 氨基酸不具有的化学反应是（ ）A 双缩脲反应 B 茚三酮反应 C DNFB反应 D PITC反应5 用纸层析分离丙氨酸、亮氨酸和赖氨酸的混合物，则它们之间Rf的关系应为（ ）A AlaLeuLys B LysAlaLeuC LeuAlaLys D LeuLysAla7 下列哪种氨基酸有米伦（Millon）反应（ ）A Trp B Tyr C Phe D Arg8 Pauly试剂是将对氨基苯磺酸的重氮化合物喷洒到滤纸上，定性检测蛋白质的试剂，在蛋白质的地方显橘红色。它的生色反应是发生在蛋白质内的（ ）A 色氨酸的吲哚环 B 半胱氨酸的巯基C 组氨酸的氨基 D 酪氨酸的酚羟基9在组蛋白的组氨酸侧链上进行（ ）以调节其生物功能。A 磷酸化 B 糖基化 C 乙酰化 D 羟基化11 如果要测定一个小肽的氨基酸顺序，下列试剂中选择一个你认为最合适的（ ）A 茚三酮 B CNBr C胰蛋白酶 D 异硫氰酸苯酯13 蛋白质可与碱共热水解，虽然这个过程会破坏一些氨基酸，但它却被常用来定量蛋白质的( )A Ser B Cys C Thr D Trp14 在pH7的水溶液里，在典型的球状蛋白分子中，处于分子的内部的氨基酸残基经常是（ ）A Glu B Phe C Thr D Asn16 胰蛋白酶专一水解多肽键中（ ）A 碱性残基N端 B 酸性残基N端C 碱性残基C端 D 酸性残基C端17 羧肽酶C专门水解C端倒数第二位是哪个氨基酸形成的肽链（ ）A Arg B Lys C Cys D Pro18 下列蛋白质中，（ ）不是糖蛋白A 免疫球蛋白 B 溶菌酶 C 转铁蛋白 D 胶原蛋白19 血红蛋白的氧合曲线向右移动是由于（ ）A O2分压的减少 B CO2分压的减少C CO2分压的增加 DpH值的增加20 SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质（ ）A 在一定pH值下所带净电荷的不同B 分子大小不同 C 分子极性不同D 溶解度不同四、问答及计算题1 试命名下列氨基酸（均存在于蛋白质中）（1）用强酸或强碱处理能转变成存在于蛋白质中的另一种氨基酸。（2）空气中即可氧化为存在于蛋白质中的另一种氨基酸。（3）能在279nm强烈吸收紫外光，易为强酸所破坏。（4）在pH6pH8内有缓冲能力。（5）与茚三酮反应生成一种黄色产物。（6）其水溶液无旋光性。2 分析下列4个肽的混合物，在Dowex-1（一种阴离子交换树脂）的离子交换柱上以从pH101.0连续变化的缓冲系统作洗脱，试说出每种肽洗脱的相对次序。A 赖-甘-丙-甘 B 赖-甘-丙-谷C 谷-甘-丙-谷 D 组-甘-丙-谷 3 某一条肽经酸水解组成分析含5种氨基酸，其N端非常容易环化。经CNBr处理后得一游离碱性氨基酸，Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段；其一为坂口反应阳性，另一在280nm有强的光吸收，并呈Millon氏阳性反应。求此肽段氨基酸排列顺序，并指出它的等电点应该是大于、等于或小于pH7。4 蛋白质化学中常用的试剂有下列一些：CNBr，尿素，-巯基乙醇，胰蛋白酶，过甲酸，丹磺酰氯，6mol/L HCl，茚三酮，异硫氰酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。为完成下列各项试验，请回答每项的最适试剂是什么？（1）一个小肽的氨基酸顺序的测定（2）多肽链的氨基末端的测定（3）一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性（4）芳香族氨基酸残基的羧基一侧肽键的水解（5）甲硫氨酸的羧基一侧肽键的裂解（6）通过氧化途径将二硫键打开参 考 答 案二、是非题1 错 2对 3对 4对 5错 6对 7对 8错 9错 10错 11错 12错 13 对 14对 15错 16对17错 18对19错 20对 21错 22错23错24对 25对 26错 27对 28对 29错 30错三、选择题1B 2B 3C 4A 5C 6C 7B 8D 9A 10C 11D 12A 13D 14B 15C 16C 17D 18B 19C 20B 21B 22D 23D 24A 25C 26D 27A 28B 29C 30A 31B 32A 33D 34A 35D四、问答及计算题1(1)谷氨酰胺或天冬酰胺（2）半胱氨酸（3）色氨酸（4）组氨酸（5）脯氨酸（6）甘氨酸2 4个肽被洗脱下来的先合顺序依次为A B D C。3 该五肽的顺序为：谷氨酰-精氨酰-酪氨酰-甲硫氨酰-组氨酰。此肽段的等电点大于7。4 （1）异硫氰酸苯酯（2）丹磺酰氯（3）尿素（4）胰凝乳蛋白酶（5）CNBr（6）过甲酸。第三章：酶化学一、填充题1 全酶是由（ ）和（ ）组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中（ ）决定酶的专一性和高效率，（ ）起传递电子、原子或化学基团的作用。2 酶活性中心往往处于酶分子表面的（ ）中，形成（ ）区，从而使酶与底物之间的作用加强。3 T.R.Cech和S.Altman因各自发现了（ ）而共同获得1989年的诺贝尔化学奖。4 金属离子对酶的激活作用有两种，一是作为（ ），二是作为（ ）。5 乳酸脱氢酶有（ ）种（ ）个亚基组成。体内有（ ）种乳酸脱氢酶的同工酶，在临床诊断上有应用价值。6 胰蛋白酶的专一性就是在（ ）残基右侧的肽键上水解；羧肽酶B专一性地从蛋白质的羧羰切下（ ）氨基酸。7同一种酶有n个底物，就有（ ）个Km值，其中Km值最（ ）的底物，便为该酶的最适底物。8 测定酶活力时，底物浓度应（ ），反应温度应选在（ ），反应pH选在（ ），反应时间应在反应的（ ）期进行。9 表示酶量的多少常用（ ）表示。二、是非题1 与非酶反应相比，酶反应能使更多的底物变成为产物。（ ）2 酶影响它怕催化反应的平衡的到达时间。（ ）3 辅基与辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同，并无严格的界限。（ ）4 氧化酶都含有细胞色素。（ ）5 酶反应最适pH只取决于酶蛋白本身结构。（ ）6 在极低底物浓度时，酶促反应初速度与底物浓度成正比。（ ）7 做为辅因子的金属离子，一般并不参与酶活性中心的形成。（ ）8 底物与酶的活性中心靠共价键结合，以提高催化效率。（ ）9 测定反应的最适温度时，先将酶在不同温度下保温一段时间，然后在30下测定酶活性。（ ）10 Km值是酶的一种特征性常数，有的酶虽可以有几种底物，但其Km值都是固定不变的。三、选择题1在测定酶活力是，用下列哪种方法处理酶和底物才合理（ ）A 其中一种用缓冲液配制即可 B 分别用缓冲液配制，然后混合进行反应C 先混合，然后保温进行反应 D 分别用缓冲液配制，再预保温两者，最后混合进行反应2 假定一种酶只有当某一特定的组氨酸残基侧链未被质子化时，酶分子才具有活性，降低pH对于该酶会发生下列哪一种类型的抑制作用。（ ）A 反竞争性 B 非竞争性 C 竞争性 D 混合型3 酶的纯粹竞争性抑制具有下列哪种动力学效应（ ）A Vmax不变，Km增大 B Vmax不变，Km减少C Vmax增大，Km减小 D Vmax增大，Km不变4 酶与底物分子间的关系可以恰当地表述成（ ）A 一种临时性结合 B 通过共价键的一种稳定结合C 酶在其中发生永久性改变的一种结合D随机的非互补结合5 已知胰凝乳蛋白酶的转换数是100s-1，DNA聚合酶是15s-1。下列说法正确的是（ ）A 胰凝乳蛋白酶的底物结合常数高于DNA聚合酶B 胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶反应速度更大C 在一定的酶浓度和饱和底物水平下胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶在相同条件下更低D 在饱和底物水平下，胰凝乳蛋白酶的反应速度大约是DNA聚合酶反应速度的6.7倍四、问答及计算题1何为酶的活力和比活力？测定酶活力时应注意什么？为什么测定酶活力时以测定初速度为宜，并且底物浓度远远大于酶浓度？2已糖激酶溶液在45，12min内会丢失50%活性。但是当有大量底物葡萄糖存在时，该酶在45只丢失3%活性。试解释此现象。9甘油醛-3-磷酸脱氢酶，相对分子质量为4万，由4个相同亚基组成，每个亚基上有一个活性位点，在最适条件下，5ug纯酶制品每分钟可以催化2.8umol甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力和单个活性位点的转换数。10-糜蛋白酶（Mr 24 000）可以水解苯甲酰-L-酪氨酸乙酯。比活为45.0umol/min/mg酶。已知-糜蛋白酶只有一个活性位点。求转换数。11 （1）对于一个遵循米氏动力学的酶而言，当S = Km时，若= 35umol/min，Vmax是多少umol/min？ （2）当S = 210-5mol/L，= 40umol/min，这个酶的Km是多少？ （3）若I表示竞争性抑制剂，KI=410-5mol/L，当S =310-2mol/L和I= 310-5mol/L时，是多少？12 在不同底物浓度的反应体系中，分别测有无抑制剂存在时的，数据如下：S 无I 有I（2.210-4mol/L）mol/L(10-4) v(mol/min) v(mol/min) 1.0 28 17 1.5 36 23 2.0 43 29 5.0 65 50 7.5 74 61求有无抑制剂存在时的Vmax和Km(Km),并判断这种抑制剂是什么类型的抑制剂。13 称取25mg蛋白酶粉配制成25mL酶溶液，从中取出0.1mL酶液，以酪蛋白为底物，用Folin-酚比色法测定酶活力，得各每小时产生1500ug酪氨酸。另取2mL酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。若以每分钟产生1ug酪氨酸的酶量为1个活力单位计算，根据以上数据，求出：（1）1mL酶液中所含蛋白质量及活力单位；（2）比活力；（3）1g酶制剂的总蛋白量及总活力。参 考 答 案一、填充题1酶蛋白 辅酶因子 酶蛋白 辅酶因子 2 凹穴 疏水 3 核酶（具有催化作用的RNA）4酶的辅助因子 直接的激活剂 5 2 4 5 6 碱性氨基酸 碱性 7 n 小8 远远超过酶浓度 最适温度 最适 初 9 酶的活力单位数 10 8111 绝对 立体 12 1/Km 1/Vmax 13 亚基解离14 正碳离子 五价磷过渡态 Zn2+-活化水 四面体肽键 氧阴离子 活化水15 无酶时不反应 被靶酶专一性激活 与靶酶反应必须比解离更为迅速，即K1Kdis16 最慢的 第一步反应 17 酶活性中心 18 别构酶 共价调节酶 齐变 序变19丝氨酸 20蛋白激酶 蛋白磷酸酯酶21糖基化 乙酰化 -羧基化 ADP-核糖基化 22天冬氨酸 组氨酸23腺苷酰化 脱腺苷酰化 24比活力 总活力 25增大 变小二、是非题1错 2对 3对 4错 5错 6对 7错 8错 9错 10错 11对 12对13错 14对 15错 16错 17错 18错 19对 20对 21对22错23对 24错25对26对27错 28错 29错 30对三、选择题1D 2B 3A 4A 5D6D 7D 8B 9A 10C 11C 12B 13A 14B 15A16B 17B 18B 19C 20D四、问答及计算题1酶活力指酶催化某一化学反应的能力，可以用一定条件下所催化的化学反应的反应速度来表示。酶比活力指一定量的酶，例如1mg或1g等，所具有的总的活力。由于酶催化的反应只在反应初始阶段具有恒定的速率，因此测定酶的活力以测定初速度为宜。由于酶的活性受到测定环境如底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等影响，因此酶活力测定要选择最适条件，包括最适pH、最适温度、最适底物浓度、最适离子强度等。由于酶活力与酶量是成正比的，为保证所有的酶都能结合底物，参与反应，底物浓度要远远大于酶浓度。2 已糖激酶能催化葡萄糖与ATP反应，使葡萄糖磷酸化。在无ATP时，葡萄糖与已糖激酶结合，能稳定游离酶分子，抵抗酶变性。由于无ATP，不会发生上述反应。9 比活力=2.8U/510-3mg = 560 U/ mg 转换数/活性位点=2.8umol/min(5ug/40 000ug/umol4) = 5600/min = 93.3/s10转换数=45.010-61 00024 000=1 080/min11答：（1）Vmax= 70umol/min（2）Km=1.510-5mol/L（3）因为，SKm,I,所以，= Vmax= 70umol/min12答：先分别求出1/S，1/V，1/V，作1/V1/S，1/V1/S图，从图中求出：1/Vmax = 0.01 min/mol Vmax = 100mol/min -1/ Km = -3.7103L/ mol Km = 2.710-4mol/L-1/ Km = -2.0103L/ mol Km = 510-4mol/L 因为Vmax不变，Km增大，所以是竞争性可逆抑制。13答：（1）0.625mg蛋白质；250U（2）400U/mg蛋白质（3）0.625g；2.5105U第五章：核酸化学一、填充题1、核酸完全的水解产物是（ ）、（ ）和（ ） 。其中（ ） 又可分为（ ）碱和（ ）碱。2、体内的嘌呤主要有（ ）和（ ）；嘧啶碱主要有（ ）、（ ）和（ ）。某些RNA分子中还含有微量的其它碱基，称为（ ）。3、嘌呤环上的第（ ）位氮原子与戊糖的第（ ）位碳原子相连形成（ ）键，通过这种键相连而成的化合物叫（ ）。4、体内两种主要的环核苷酸是（ ）和（ ）。5、写出下列核苷酸符号的中文名称：ATP（ ）；dCDP（ ）。6、RNA的二级结构大多数是以单股（ ）的形式存在，但也可局部盘曲形成（ ）结构，典型的tRNA结构是（ ）结构。7、tRNA的三叶草型结构中有（ ）环，（ ）环，（ ）环及（ ）环，还有（ ）。8、tRNA的三叶草型结构中，其中氨基酸臂的功能是（ ），反密码环的功能是（ ）。9、其中一股链为5ATGCC3的双螺旋DNA的互补链顺序是（ ）。二、是非题1 稀有碱基是指细胞中含量很少的游离嘌呤或嘧啶。（ ）2 如果DNA样品A的Tm低于DNA样品B 的Tm，那么样品A含有的A-T碱基对高于样品B 。（ ）3 由于DNA是多阴离子，所以它的熔点随盐物质质量浓度增加而增加。（ ）4 超速离心测定DNA相对分子质量时待测DNA溶液应具有较高浓度。（ ）5 “荷载的”tRNA指结合有氨基酸的tRNA。（ ）6 包括核糖体在内的所有RNP，蛋白质是其主要的功能成分，核酸则作为结构成分。（ ）7 用碱水解核酸，可以得到纯的3-核苷酸的混合物。（ ）8 对于提纯的DNA样品，测得OD260/OD2801.8，则说明样品中有蛋白质残留。（ ）9 真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3-OH。（ ）10 rRNA在蛋白质合成中只起到装配者作用，而tRNA不但具有携带氨酸功能并有解译作用。三、选择题1、自然界游离核苷酸中，磷酸最常见是位于（ ）A 戊糖的C-5上 B 戊糖的C-2上C 戊糖的C-3上 D 戊糖的C-2和C-5上2、可用于测量生物样品中核酸含量的元素是（ ）A 碳 B 氢 C 氧 D 磷3、下列哪种碱基只存在于RNA而不存在于DNA（ ）A 尿嘧啶 B 腺嘌呤 C 胞嘧啶 D 胸腺嘧啶4、 核酸中核苷酸之间的连接方式是（ ）A 2，3磷酸二酯键 B 糖苷键C 2，5磷酸二酯键 D 3，5磷酸二酯键5、 核酸对紫外线的最大吸收峰在哪一波长附近（ ）A 280nm B 260nmC 200nm D 340nm6、 DNA变性是指（ ）A 分子中磷酸二酯键断裂 B 多核苷酸链解聚C DNA分子由超螺旋双链双螺旋 D 互补碱基之间氢键断裂7、 DNA Tm值较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致（ ）A G+A B C+GC A+T D C+T8 某DNA分子中腺嘌呤的含量为15%，则胞嘧啶的含量应为（ ）A 15% B 30% C 40% D 35%9、寡聚dT-纤维素柱层析用于（ ）。A 从总DNA中分离纯化质粒DNAB 从总核蛋白中分离出DNPC从总RNA中纯化mRNA D 除去杂蛋白10、双链DNA热变性后（ ）A 黏度下降 B 沉降系数下降 C 浮力密度下降 D 紫外吸收下降四、问答题1DNA的Walson-Crick双螺旋结构模型要点是什么？2 DNA在纯水室温下放置时，为什么线状双链DNA 会分离成它的组成链？3 预测所给样品各组成部分的相对迁移速度或相对沉降位置.（1）琼脂糖凝胶电泳分离某质粒DNA的环状、开环形、线形和变性无规则线团的混合物。（2）氯化铯密度梯度离心分离长度相同的两种DNA的混合物，A来自一种嗜热菌，B来自大肠杆菌。4 下列哪些物质能降低双链DNA的Tm值？并解释它们的作用方式。SSB；核组蛋白；氯化钠；甲酰胺；碱5 某细菌DNA相对分子质量为4.0108，求（1）此DNA分子长度；（2）此DNA分子的体积；（3）此DNA分子含多少个螺旋？6 某DNA分子的浮力密度是1.699g/cm3，求其含（G-C）%？7 试用酶学方法来区别：（1）单链DNA和双链DNA；（2）线状DNA和环状DNA参 考 答 案一、填充题1磷酸 含氮碱 戊糖 含氮碱 嘌呤 嘧啶2腺嘌呤 鸟嘌呤 胞嘧啶 尿嘧啶 胸腺嘧啶 稀有碱基39 1 糖苷键 嘌呤核苷4CAMP cGMP5三磷酸腺苷 脱氧二磷酸胞苷6多核苷酸链 双螺旋 三 叶草7二氢尿嘧啶 反密码 TC 额外 氨基酸臂8与氨基酸结合 辨认密码子9、5GGCAT310、连接核糖与磷酸、连接两个DNA链