流式细胞仪分析技术及应用.doc

流式细胞仪分析技术及应用一、选择题（一）A1型题（标准型）1流式细胞仪是由下述哪项基本结构组成A流体系统B光学系统C计算机系统D流体系统、光学系统和信号处理系统E流体系统、光学与信号转换测试系统和信号处理与放大的计算机系统2流式细胞仪流动池鞘液孔径通常为A50mB50100mC50200mD50300mE300m3关于液流系统的鞘液，下述哪项是正确的A鞘液是辅助样本作正常检测的基质液B鞘液是用来与样本作对比的C鞘液是包裹在样本流周围D使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确性E防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞4流式细胞仪光学系统的组成为A激光系统B激光光源与分光镜C激光光源、分光镜与光束成形器D激光光源、分光镜、光束成形器和透镜组E激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管5下述哪项关于激光光源的叙述是正确的A采用气冷式氩离子激光器B激光波长488nm，15mWC激光束波长466 nm，10mWD不散焦E容易聚焦成有高斯能量分布的光斑6 光束成形器的作用是将激光器发射的激光束聚焦成A高15m、宽57m的椭圆形光斑B高10m、宽57m的椭圆形光斑C高15m、宽50m的椭圆形光斑D高10m、宽50m的椭圆形光斑E高20m、宽60m的椭圆形光斑7反射较长波长的光而通过较短波长的光的是A气冷氩离子激光器B分色反光镜C光束成形器D透镜组E光电信增管8检测荧光和反射光，并将光学信号转换成电脉冲信号的是A气冷氩离子激光器B分色反光镜C光束成形器D光电倍增管E透镜组9流式细胞仪组成部件中对实验分析数据存储、显示与分析的是A液流系统B光学系统C光电倍增管D软件E数据处理系统10一台好的流式细胞仪每秒钟可测量A25000个细胞B20000个细胞C15000个细胞D10000个细胞E5000个细胞11一台好的流式细胞仪每秒钟可测定荧光染料粒子A5000个B4000个C3000个D2000个E1000个12前向散射光（）信号的强弱与下述哪项成正比A体积大小B细胞性状C颗粒多少D位移速度E荧光强弱13前向散射光是用于检测细胞或其他粒子的A内部属性B表面属性C着染属性D粒子属性E以上都不是14侧向检测器与发射激光束的方向A平行B在激光前方C在激光上方D垂直E在激光下方15侧向散射光（）用于检测细胞的A表面属性B内部结构属性C着染属性D物理属性E化学属性16荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受A荧光激发后产生B紫外光激发产生C红外光激发产生D发光物质激发产生E激光激发产生17流式细胞仪检测原理中最重要的一点是A检测荧光的特定发射波长B检测激发光的波长C检测荧光的颜色D检测前向散射光E检测侧向散射光18对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号放大A1倍B2倍C3倍D10倍E100倍19对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号由A1转变为2B2转变为3C3转变为4D1转变为3E1转变为420线性放大器用于测量的信号A强度变化范围较广B放大倍数较大C放大倍数较小D强度变化范围较少E以上都不是21对数放大器用于测量信号是A强度变化大但信号简单B强度变化小但信号复杂C强度变化大且信号复杂D强度变化小且信号简单E以上都不是22流式细胞仪中最常用于单抗标记的荧光染料是AFITC、RB200、TRITCBFITC、PE、PCCFITC、RB200、PEDFITC、TRITC、PEEFITC、PE、ECD或PECY523消除重叠信号通常采用A荧光补偿B滤光片C调整荧光染料D线性转换E对数转换24分选细胞时液流柱形成液流的速率约每秒钟A50000个B40000个C30000个D20000个E10000个25均匀连串的液滴中大量液滴是A含有细胞B含有淋巴细胞C含被荧光染色的淋巴细胞D不含细胞的空白液滴E以上都不是26待分选细胞形成液滴时会被A染色B充电C酶标记D抗体捕捉E以上都不是27带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场后会A聚集B散开C继续下落D停止下落E向左或右偏转28一般要求分选速度至少达到A20000个/秒B10000个/秒C7000个/秒D5000个/秒E3000个/秒29分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关A细胞含量B细胞性质C细胞大小D有否胞膜E单核或多核30骨髓来源细胞的分选宜选择高速是因为A细胞太多B细胞太大C细胞膜坚固D细胞核坚固E在总细胞群体中所占比例不高31分选纯度除与仪器的精密度相关外，还与A被分选细胞的性质相关B其他细胞的性质相关C被分选细胞的数量相关D其他细胞的数量相关E分选细胞与其他细胞有无相互重叠相关32要想取得分选高收获率，就应A提高被分选细胞的纯度B降低被分选细胞的纯度C提高被分选细胞的浓度D降低被分选细胞的浓度E降低其他细胞的浓度33现在设置收获率均在A100%B99%以上C98%以上D95%以上E90%以上34分选得率是指A分选收获率B通过测量点的分选细胞的比率C从悬液中分辨出的目的细胞的总量D通过测量点的细胞与实际收获的分选细胞的比率E从悬液中分辨出的目的细胞总量，再经分选后获得的实际比率35分选得率与A分选速度相关B分选目的细胞总量相关C不选细胞总量相关D分选细胞的生物学性质E不选细胞的生物学性质36面积脉冲信号是指A电压脉冲曲线内外区域的大小B电压脉冲曲线外区域的大小C电压脉冲曲线内区域的大小D电压脉冲的高度E以上都不是37流式细胞仪的数据参数中荧光信号反映的是A颗粒中被染上荧光部分数量的多少B颗粒的大小C细胞内部结构复杂程度D细胞表面的光滑程度E以上都不是38单参数直方图反映的是A不同荧光强度的颗粒数量B同样荧光强度的颗粒数量C不同荧光强度的颗粒性质D同样荧光强度的颗粒性质E以上都不是39单参数直方图中A纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1024脉冲信号通道B纵坐标表示被测细胞的性质，横坐标分为1024测量参数C纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1124测量参数D纵坐标表示被测细胞的性质，横坐标分为1024脉冲信号通道E纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1024细胞40双参数直方图包括A点图B点图、二维等高图C点图、二维等高图、三维等高图D点图、二维等高图、假三维等高图E点图、二维、三维和假三维等高图41等高线图由类似地图上的下述哪种线组成A实线B虚线C连线D双线E等高线42假三维等高图中的一维不是参数，而是A细胞B细胞数C线性D对数E峰值43Regiou设置是根据下述哪项信号强弱划定分析区域A同一张单参数和三参数直方图B同一张双参数和三参数直方图C同一张单参数和双参数直方图D同一张单参数和多参数直方图E同一张双参数和多参数直方图44gate设置是指在某一张选定参数的直方图上根据该图的细胞群分布选定待分析的特定细胞群，并要求该样其他参数组合的直方图只体现A该群细胞的分布情况BBC的分布情况CBC分布情况DPt分布情况ECD4+细胞分布情况45进行流式细胞分析第一步是制备A两个细胞的重叠B多个细胞的粘连C细胞碎片D单细胞悬液E细胞荧光染色46制备单细胞悬液时，测定前通常要把哪项从血液中分离出来A单核细胞或淋巴细胞B单核细胞或血小板C淋巴细胞或血小板D淋巴细胞或B淋巴细胞E红细胞或血小板47从新鲜实体组织制备单细胞悬液的目的是A分离细胞B不损伤细胞C既分离细胞又不损伤细胞D破坏组织间的胶原纤维E分解组织间的蛋白质48新鲜实体组织单细胞悬液制备的常用方法有A机械法B酶处理法C化学试剂处理法D表面活性剂处理法E以上都不是(二)A2型题(否定型)1流式细胞仪分析技术不包括A激光技术B计算机技术C电子显微镜技术D流体喷射技术E分子生物学技术2不是带通滤片允许通过的光波长是A525 nmBPB575 nmBPC620 nmBPD625 nmBPE675 nmBP3与散射光的强弱无关的是A细胞的大小B细胞的形状C细胞的标记D细胞的光学同性E胞内颗粒折射4荧光染料在488nm激发光下发出荧光颜色错误的是A绿色B橙色C白色D橙红色E红色5对培养细胞的分选不宜选择高速，是因为A细胞太多B细胞太大C细胞膜脆弱D细胞核脆弱E胞浆所占比例大6不是流式细胞仪数据显示的方式是A单参数直方图B双参数直方图C三参数直方图D假三维等高图E前向散射光示意图（三）B1型题（配伍题）问题13A量子产额和消光系数B吸收C波长差D标记染色E荧光信号1荧光染料应有较高的：2发射光波长与激发光波间有较大的：3荧光染料对488nm激发光波长有强的：问题46A深蓝B橙红色C橙色D红色E深红色4FITC的荧光颜色是：5PE（RD1）的荧光颜色是：6eCy7的荧光颜色是：问题79ACD3+、CD4+、CD8-BCD3+、CD4+、CD8+CCD19、CD20、CD21、CD22DCD16、CD56、CD11a/CD18ECD3-、CD16+、CD56+7临床确定为细胞的是：8成熟B细胞主要表达的是：9h细胞表达的是：问题1012AdBCDDCD4+/CD8+倒置EAB2710用流式细胞仪检测的胞质内抗原之一是：11用于肿瘤耐药基因分析时，可检测到的是：12AIDS患者免疫诊断指标之一是： 二、填空题1血液中各类细胞的密度不同，其中_与icoll分层液密度1.077相当，离心后位于分层液与血浆层的界面中。2FITC是免疫荧光技术中最常用的染料，但其发射荧光的强度受 影响较大。3两种荧光发射信号重叠时，其检测准确性差，通常采用 的方法来消除重叠信号。4细胞仪根据细胞流经光照射区时的强弱来分析和分选细胞。5 式细胞术是对 的理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。三、判断题1流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术。2镜组的作用是将激光和荧光变成平行光。3荧光染料浓度较稀时，荧光强度与溶液成反比。 四、名词解释 1细胞自发荧光2分选得率3前向散射光 五、简答题1简述流式细胞仪的工作原理。2鞘液的主要作用是什么？3流式细胞仪荧光测量的基本原理是什么？4简述细胞分选的原理？ 5何谓同型对照？六、论述题1用流式细胞仪进行细胞分选的技术要求有哪些？2制备合格的单细胞悬液时应注意些什么？3请介绍流式细胞仪在血液病检测中的应用。标准答案一、 选择题（一）A1型题(标准型)1.E 2.D 3.B 4.E 5.C 6.A 7.B 8.D 9.E 10C 11.E 12.A 13.B 14.D 15.B 16.E 17.A 18.D 19.A 20.D 21 .C 22.E 23.A 24.C 25.D 26.B 27.E 28.D 29.A 30.E 31.E 32.B 33.D 34.E 35.A 36.C 37.A 38.B 39.A 40.D 41.E 42.B 43.C 44.A 45.D 46.B 47.C 48.E(二)A2型题(否定型)1.C 2.E 3.C 4.C 5.C 6.D(三)B1型题(配伍题)1.A 2.C 3.B 4.A 5.C 6.E 7.E 8.C 9.A 10.A 11.C 12.D二、 填空题1单核淋巴细胞2p3荧光补偿4电压信号5单个细胞三、 判断题1. 2. 3. 四、 名词解释1细胞自发荧光：大部分哺乳动物细胞内的吡啶或黄素类核苷酸都存在自发荧光，用紫外光或蓝光激发可蓝色或绿色荧光。2分选得率：指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。3前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对较小的角度0.510向前方散射的讯号。五、 简答题1流式细胞仪的工作原理：借鉴了荧光显微镜技术，将激发光改为激光，使具有更好的单色性；利用荧光染料与单克隆抗体技术，提高特异性与灵敏度；将固定的标本台改为流动的单细胞悬液，并用计算机进行信号的数据处理分析，能同时从一个细胞上获得多种参数资料。2鞘液的主要作用：鞘液是辅助样本流进行正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测精确性，同时防止样本流中细胞靠近孔壁而堵塞喷嘴。3流式细胞仪荧光测量的基本原理：荧光测量时，荧光信号由被测细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后产生特定波长荧光与颜色，通过波长选择通透性滤光片，将不同波长荧光信号区分开，送到不同的光电倍增管，经过一系列信号转换、放大、数字处理，可在计算机上显示出来。4细胞分选的原理：当细胞悬液形成液流柱流经流动室，流动室上方的压电晶体产生机械振动带动流动室以相同频率进行振动，使液流柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成速率约每秒万个，其中仅少数液滴含有细胞，大量为不含细胞的空白液滴。当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会充电，带有正或负电荷，未设分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。带电液滴在落入电极偏转极的高压静电场，依所带电荷是正或负而发生向右或左道偏转，落入指定收集器中完成分选。5同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整及设置电流电压，在此基础上进行样本检测可使荧光标记单抗的信号保持特异性，如不用同型对照，结果的可靠性将受到影响。六、 论述题用流式细胞仪进行细胞分选的技术要求有：分选速度，一般要求分选速度达5000个/秒左右，以保证被分选细胞的生物活性不受影响。分选速度与仪器性能有关，与细胞悬液中被分选细胞含量呈正相关。分选速度应按细胞的特性决定，如培养细胞因其膜脆弱，不宜选择高速；而骨髓来源的细胞因所占比例不变，宜选高速。分选纯度，与仪器精密度及被选细胞与其他细胞有无重叠特性相关，也与实验设计的选择密切相关。分选收获率，即通过测量点的分选细胞与实际收获的分选细胞的比例，同样与不选细胞有否重叠相关。收获率与纯度有对应关系：要求纯度高，收获率相对低；要求收获率高，则纯度相对降低。实际工作中，应在不影响纯度的情况下，获得最高收获率。分选得率，是指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。得率与