细菌的培养与分离技术.ppt

细菌的培养与分离技术,培养基,常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备,常用玻璃器材的准备,玻璃器材的种类及用途 玻璃器材的清洗 新购置的玻璃器材：12盐酸浸泡清水清洗 用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷 盛培养基试管和平皿：高压灭菌趁热倒出洗涤剂洗刷清水冲洗 吸管：3来苏浸泡清水冲洗 玻片和盖玻片：3来苏和清洁液浸泡清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤 含油脂的器皿：单独灭菌,玻璃器皿灭菌前的准备,玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。,培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 水 凝固剂：琼脂、明胶 抑制剂 指示剂,培养基的种类（按用途分类）,基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌,培养基的种类（按物理性状分类）,液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。,培养基制备的一般程序,调配,溶化,矫正pH,过滤澄清,分装,灭菌,检定,培养基灭菌, 基础培养基：121高压蒸汽灭菌15分钟, 含糖培养基：113 灭菌15分钟, 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次, 不耐高温的液体成分：滤过除菌,保存,培养基pH测定及矫正,材料： 待测培养基、 pH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02酚红、 氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L） 盐酸（0.1mol/L、1mol/L） 蒸馏水 试管（与比色管口径一致）、 刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、,pH矫正,水,培养基,培养基,比色管,酚红 指示剂,pH矫正,过酸,相同,过碱,计 算,假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L NaOH 0.12ml，现有培养基1000ml，求需加NaOH的量。,2：10000.12：X,设需加NaOH的量为Xml。,X=,0.121000,2, 60ml 0.1mol/L NaOH,60106ml 1mol/L NaOH,细菌的接种与培养,无菌技术 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用,细菌接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,细菌接种法,平板划线接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数,分区划线法,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,连续划线法,细菌培养法,一般培养（需氧培养）： 培养温度：35（采用恒温培养箱） 培养时间：1824h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等,细菌在固体培养基中的生长现象,菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,细菌在液体培养基中的生长现象,混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌,细菌在半固体培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩