人类性染色质小体的制备与观察课件

实验十 人类性染色质小体 的制备与观察,实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题,掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考依据。,实验目的,实验原理,发现 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有。 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色质。大小在1m左右，呈三角形、卵形、短棒形等。,研究发现，间期核内X染色质的数目总是比X染色体的数目少1。 进一步研究表明： X染色质是一条异染色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间期复制要比其他的染色体晚。,？,莱昂假说（1961年，Mary Lyon ） 雌性哺乳动物体细胞内仅有一条X染色体是有活性的。另一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞核中螺旋化而呈异固缩的X染色质。 X染色体的失活是随机的，也是恒定的。 X染色体失活发生在胚胎早期（妊娠第16天）。在此以前的所有细胞中的X染色体都是有活性的。,证据1,莱昂学说的生物化学证据首先来自对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)杂合妇女的皮肤成纤维细胞中G-6-PD表达的研究。 G-6-PD位于X染色体上，其活性在男女中是相同的。G-6-PD有A、B两种类型，二者仅相差一个氨基酸，由一对等位基因GdA和GdB编码。当取自GdA/GdB杂合妇女的皮肤细胞原始培养物时，电泳图谱上出现A、B两种条带，而当检测克隆培养物时，每个克隆只出现一条电泳带，完全表现为A型或B型条带(图)。,克隆培养时，每个克隆只出现一条电泳带,证据2玳瑁猫,三色猫，又叫玳瑁猫。 雌性的三色猫腹部的毛是白色的，背部和头部的皮毛由桔黄色和黑色斑组成。这种雌猫是X-连锁基因杂合体。b基因控制橙色毛皮，其等位基因B是控制黑色的毛皮。而白色毛则由常染色体上的基因决定。 带有b基因的X染体若失活，B基因表达，产生黑色毛斑；若带有B基因的X染色体失活，b基因表达，则产生橙黄色毛斑。,Y染色质,正常男性的间期细胞用荧光染料染色后，在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1m左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相同。,口腔颊部粘膜上皮细胞 毛囊细胞 60%冰醋酸 45%冰醋酸 卡宝品红 75%乙醇,实验材料与药品,1口腔颊部粘膜上皮细胞巴氏小体观察 刮取颊部粘膜上皮细胞（用灭菌玻璃片）涂片（两片45角）60%冰醋酸固定5min吸去冰醋酸，卡宝品红染色10min盖片镜检,实验方法,2发根毛囊细胞巴氏小体观察 拔取带毛囊头发一段 45%冰醋酸解离5min 剥取毛囊 卡宝品红染色10min 压片观察,注意事项,将第一次刮下的口腔粘膜上皮细胞用酒精棉球擦去，在原位重复刮一下制片；待涂片略干再加冰醋酸固定 染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质不易区分； 毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针敲片，使细胞解离；,分别观察男女各50个可数细胞，计算显示X染色质所占百分比。 观察中选绘1-2个典型细胞，标明X染色质的形状和部位。,实验作业,可数细胞的标准：核质染色呈网状或颗粒状；核膜清晰，无缺损；染色适度，周围无杂质。,X染色质,男女个体细胞中的巴氏小体,并非每个细胞都可看到巴氏小体，这与细胞的状态、着色情况有关。 G1期：DNA没有复制，巴氏小体最小。 S期： DNA在进行复制，巴氏小体中等。 G2期：DNA完成复制，巴氏小体最大。,正常女性（46，XX）的口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，一般不超过3035%，仅含1个X染色质。 男性只有03%，平均0.7%。,思考问题,1.失活的X染色体上基因是否都失去了活性？,答： 并非所有基因都失去了活性，有一部分基因仍保持一定活性，因此X染色体数目异常的个体在表现型上有别于正常个体，如47，XXY（先天性睾丸发育不全）和47，XXX（多X综合征）。 1974年，新莱昂假说认为X染色体的失活是部分片段的失活。如Xg血型。,2.失活的X染色体是否永远都失去了活性？,答：不是，如减数分裂时卵巢中初级卵母细胞异固缩的X染色质恢复到常染色质状态。,Xg血型系统,Xg血型系统 1962年JD曼等用一个多次输血的病人的血清查出一种新的红细胞抗原Xga。这一抗原受X染色体短臂上Xg座位控制，有两个等位基因Xga和Xg，Xg是无效等位基因，表型可以是Xg（a）或Xg（a）。Xga是迄今所知唯一X连锁的红细胞抗原。如果父