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文档简介
实验七 植物种子不饱和脂肪酸的反相纸层析,一、目的,通过操作练习,初步掌握用纸层析法测定油菜籽中脂肪酸的组成的方法。,在纸层析中,通常支持相是含水的,移动相是有机溶剂。但是脂肪酸等化合物宜用有机溶剂为支持相和含水溶剂为移动相,这样能更好的进行分配,即“反相纸层析法”。 由于不同的脂肪酸在两相中分配系数不同,所以在层析滤纸上移动速率就有差异,这样就使混合脂肪酸各组分被分开。然后用醋酸铜处理,将脂肪酸转化为相应的铜盐,再用红氨酸显色(也可以不用),即可得到蓝灰色点状层析图谱。,二、实验原理,二、实验原理,三、器材和试剂,1、器材 层析缸,层析纸,直尺,铅笔 ,微量移液器等 2、试剂 5%的KOH-CH3OH溶液; 10%石蜡-石油醚溶液; 1M的HCl溶液; 石油醚; 1%的醋酸铜溶液; 0.03%的红氨酸溶液。,四、实验步骤,1、样品制备 取10粒成熟的油菜种子于10ml离心管中, 加1ml KOH-CH3OH溶液,并将样品用玻璃棒捣碎,酯化68h (40)。 加入 HCl 1.8ml及1ml石油醚,摇匀约5min,静置分层(上清澄清)。,2、点样,在层析纸(10 cmX11 cm)一边约1.5cm处用铅笔轻轻画一条直线,每隔1.5cm点一小点,并编号; 将层析纸放入石蜡油(10%石蜡-石油醚溶液)中浸透30s,取出晾干; 在层析纸各编号处用针刺一小孔(孔不能太大),然后取样品上清液10l, 10l, 15l, 15l, 20l, 20l按编号顺序滴入孔洞处。,3、展开溶剂系统与条件,将点好样的层析纸直立放入盛有醋酸溶液的长方形层析缸中(使编号朝下) 。醋酸溶液的多少以能浸泡层析纸但液面低于点样处为宜。 展开至溶液上升到纸的最上端后,展开完毕,取出层析纸,烘干(烘箱37)。,4、显色,将层析纸浸入醋酸铜溶液中10 min(摇床,37),使生成脂肪酸铜盐.用清水稍加冲洗,再放入洁净的瓷盘中,用流水漂洗45min左右。 将层析纸小心取出,用干毛巾或滤纸吸干大部分水分后,置于40烘箱中干燥。 将层析纸在红氨酸溶液中一带而过,与脂肪酸铜盐作用,观察蓝灰色的斑点,结果与分析,绘出反相纸层析色谱上五种不饱和脂肪酸的位置的示意图。,十八碳三烯酸 9,12-十八碳二烯酸
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