消毒灭菌与细菌的分类(2014级).ppt

一、消毒与灭菌 二、细菌的分类,教学要求,【掌握】 消毒、灭菌等基本概念 常用消毒灭菌方法及适用范围 细菌种、属、菌株、标准菌株的概念，细菌的命名原则和书写规则 【熟悉】 消毒灭菌的应用 【了解】 影响消毒灭菌效果的因素,消毒灭菌技术发展历史,1847年 匈牙利人塞麦尔维斯： 漂白粉洗手降低院内产褥热死亡率 1867年 英国人李斯特： 发明石碳酸消毒法， “腐烂是微生物引起的” 1886年 德国人伯格曼：蒸汽灭菌法 1890年 美国人哈斯特：戴橡胶手套,李斯特,1998年4月，深圳市妇女儿童医院共计手术292例，发生感染166例。致病菌为龟型分枝杆菌。感染原因是浸泡刀片和剪刀的戊二醛配制错误，错把2%戊二醛稀释200倍。 2005年12月，上海第九医院专家到安徽宿州市立医院为10例白内障患者实施手术，结果均感染绿脓杆菌，其中9名患者单侧眼球被摘除。感染原因是手术器械不能做到一人一用一灭菌，全用75%的乙醇浸泡手术器械，达不到灭菌要求。 2009年10月广东潮阳区谷饶中心卫生院18例剖腹产产妇发生切口感染。原因手术器械等清洗不彻底，手术用刀片、剪刀、缝合线等用戊二醛浸泡，不能达到灭菌效果。,院内感染个案,消毒灭菌是 减少院内感染 发生的关键,概念,灭菌,消毒,防腐,清洁,无菌及无菌操作,概念,视频: 供应室消毒灭菌,概念,灭菌(sterilization) 杀灭物体上所有微生物的方法，包括芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 消毒(disinfection) 杀死物体上病原微生物，不一定能杀死芽胞或非病原微生物的方法。,微生物，包括有哪些？,概念,防腐(antisepsis) 防止或抑制细菌生长繁殖的方法。 细菌一般不死亡。 清洁（cleaning） 通过除尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。 彻底清洗是保证消毒 或灭菌成功的关键,概念,“无菌物品” 进入人体内部手术器械、注射器、导管； 实验室所用培养基、试剂、器材等。,概念,无菌(asepsis)： 不含活菌的意思。 无菌操作（aseptic technique)： 防止微生物进入机体或物品的操作技术。 进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。,擦拭法,消毒灭菌的方法,物理消毒灭菌法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法 化学消毒灭菌法 原理及分类,消毒灭菌的方法,热力灭菌法 （1）干热灭菌 a.焚烧 b.烧灼 c.干烤 （2）湿热灭菌 a.煮沸法 b.巴氏消毒法 c.间歇灭菌法 d.高压蒸汽灭菌法,利用热力破坏微生 物的蛋白质、核酸、 细胞壁和细胞膜， 从而导致其死亡。,干热灭菌,a.焚烧： b.烧灼：,红外电热灭菌器,方法：对废弃物可直接在焚烧炉内焚毁；培养用的试管或烧瓶，当开启或关闭塞子时，将试管（瓶）口或塞子，在火焰上来回旋转2-3次，实验室接种环烧灼。,适用范围：污染的废弃物、病理标本、带脓性分泌物的敷料和纸张等的处理，实验室接种环的消毒灭菌；某些金属器械、搪瓷类物品急用时。,视频：灭菌操作,干热灭菌,c.干烤： 160170 2小时。 适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器等。 d.红外线 适用于医疗器械、食具,烤箱,湿热灭菌比干热灭菌效力大,（1）菌体蛋白较易凝固； （2）穿透力大； （3）潜热。蒸气变为液态的潜热,穿透力和灭菌效果比较,湿热灭菌,a.巴氏消毒法pasteurization： 用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒 方法:71.715-30s， 常用于牛奶和酒类等的消毒。,湿热灭菌,b.煮沸法： 1005min杀死繁殖体； 1001-2h 杀死芽胞 水中加2%碳酸氢钠，可提高沸点到105 c.流动蒸汽灭菌法:,是一种简单、经济、应用最早的消毒方法之一。适用于耐湿、耐高温的物品。,湿热灭菌,d.间歇蒸汽灭菌法： 杀死细菌所有繁殖体和芽胞的灭菌法。 适用不耐高热含糖、牛奶的培养基。,100 30min37 培养1824h 100 30min37 培养1824h 100 30min,湿热灭菌,e.高压蒸汽灭菌法： 103.4kPa,121,1530min，杀死芽胞在内的所有微生物。 灭菌效果最好、目前应用最广 用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。,不能灭活朊粒,临床上最常用的一种灭菌法，利用高压及饱和蒸气的高热所释放的潜热灭菌。,手提式高压蒸汽灭菌器,小型全自动高压灭菌器 不向外排放蒸汽和热力,大型全自动高压灭菌器,下排气式压 力蒸汽灭菌器,预真空压力 蒸汽灭菌器,手提高压 蒸汽灭菌器,灭菌效果监测,灭菌效果监测 高压蒸汽灭菌法: 嗜热脂肪芽胞杆菌 环氧乙烷法： 枯草芽胞杆菌,辐射杀菌法,a.紫外线: 波长240280nm，260nm最强 穿透力差，适用于实验室、无菌室、培养箱等的空气消毒及物品表面消毒。 注意防护：紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用,改变DNA分子构型，干扰细菌DNA复制转录,紫外线消毒,实验室,杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。 空气消毒：每10m3空间用30W紫外灯照30min 物体表面消毒：紫外灯与物体的距离1.2m。应将物品 摊开或挂起，使其表面直接受到照射,生物安全柜,辐射杀菌法,b.日光，微波 c.电离辐射: 射线、射线（如60Co）等，用于一次性医用塑料制品，食品保存。 穿透力强，可在包装后灭菌 辐照食品。,滤过除菌法,滤菌器filter 薄膜滤菌器： 孔径 0.1m-0.45m 硝基纤维素膜。常用0.22m 深层滤器:石绵、玻璃滤菌器 用途：不耐高温灭菌的血清、细菌毒素、抗生素，以及空气等的除菌 。 不能除去支原体和病毒。 高效空气过滤器HEPA应用于无菌手术室、生物安全柜。,高效空气过滤器：应用于无菌手术室、生物安全柜等,干燥与低温抑菌法,低温法:贮藏菌种 冷冻真空干燥法-最好的菌种保存方法 加入冷冻保护剂 -20-70,冻干菌种,低温冰箱,消毒剂杀菌机制,消毒剂的分类,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,常用化学消毒剂,化学消毒灭菌法,如皮肤、粘膜、排泄物及周围环境、光学仪器、金属锐气和某些塑料制品的消毒。,用化学药品进行消毒灭菌的方法，凡不适用于热力消毒灭菌和不怕湿的物品均可选用此法消毒 杀菌机制： （1）使菌体蛋白质变性或凝固； （2）干扰细菌的酶系统和代谢； （3）损伤细胞膜影响通透性。,消毒剂杀菌机制,哪种消毒剂适用？,中效： 杀灭细菌繁殖体、结核杆菌、真菌、病毒，但不能杀灭芽孢,低效： 杀灭细菌繁殖体、部分真菌、亲脂性病毒，但不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒和芽孢,高效： 能杀灭一切微生物，包括芽孢。,消毒剂的分类,1、根据物品的性能和各种微生物的特 性，选择合适的消毒剂。,2、严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒 时间及使用方法。,3、消毒剂应定期更换，易挥发的要加 盖，定期检测、调整浓度。,4、待消毒的物品必须先洗净擦干，全 部浸没在消毒液内，并打开物品的套盖。,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,1、浸泡法,2、擦试法,3、喷雾法,4、熏蒸法,常用消毒剂类型作用机制及种类,常用消毒剂种类及使用,常用消毒剂,高效消毒剂 含氯消毒剂： 次氯酸、漂白粉、二氯异氰酸尿酸钠 过氧化物消毒剂： 过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯 醛类消毒剂： 戊二醛（不腐蚀金属）、甲醛 环氧乙烷：800-1200mg/L 56 6h,环氧乙烷灭菌器 （环氧乙烷易燃，有毒）,过氧化氢灭菌器 （安全：常温、常压、无毒、无残留 杀菌谱广，杀菌力强）,中效消毒剂 含碘消毒剂：碘伏、碘酊 醇类：乙醇7075 低效消毒剂 季铵盐类：苯扎溴铵（新洁尔灭） 氯已定（洗必泰） 高锰酸钾,常用消毒剂,高危：需进入无菌组织的物品。灭菌 中危：接触黏膜的器械。消毒 低危：只接触未损伤皮肤。清洗、消毒 室内空气消毒灭菌 物理消毒法： 紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用； 滤过除菌：高效过滤装置 化学消毒法：过氧乙酸或过氧化氢喷雾、熏蒸,医疗器械物品的消毒灭菌,消毒灭菌的运用,手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。,消毒灭菌的运用,免洗手消毒液,正确洗手,黏膜的消毒：过氧化氢、洗必泰 病人排泄物与分泌物的消毒灭菌:次氯酸钠 病人污染物品的消毒:漂白粉、过氧乙酸 饮水的消毒：氯气 环境的消毒,消毒灭菌的运用,影响消毒灭菌效果的因素,抵抗力：芽胞-结核分枝杆菌-病毒-繁殖体-真菌,常用杀菌因子对HIV 污染物消毒使用的剂量 杀菌因子 剂量 热（80 ） 72 h 紫外线（15 W灯管,距10 cm 处照射） 8 min 含氯消毒剂（含有效氯500-5000 mg/ L ） 10 30 min 碘伏(含有效碘50100 mg/ L ) 1030 min 乙醇65 %75 %溶液 510 min 过氧化氢3 %溶液 1030 min 戊二醛2 %溶液 2030 min 甲醛5 %8 %溶液 2030 min 煤酚皂溶液1 %3 %溶液 1030 min 季铵盐类0. 1 %0. 2 %溶液 30 min 以上,朊粒的灭活,朊粒：无核酸结构,但在宿主细胞内增殖感染性蛋白质 对化学因子的抵抗力是所有微生物中最强 侵犯中枢神经组织,可引发慢性退行性脑组织病变，如克雅氏病、库鲁病 、疯牛病等 1mol/L的氢氧化钠或5%次氯酸钠浸泡1h后，134 高压蒸汽处理2h,微生物实验室的消毒灭菌,实验室哪些常用物品需要消毒灭菌？用何方法消毒灭菌？ 培养基（耐热、不耐热）、接种环、吸嘴、玻璃研磨器、试管等均为无菌物品。 实验室配制的耐热物品常用高压蒸气灭菌法；不耐热用间歇蒸汽灭菌法。 微生物室常规工作中产生的医疗废物如何处置？ 带菌的培养基须先在实验室内高压蒸气灭菌法处理；带菌液体用次氯酸钠（有效氯1000-2000mg/L）浸泡；地面物品表面用含氯消毒剂擦拭和喷洒。,第六节 细菌的分类,细菌的分类原则与层次,细菌分类学（Bacterial taxonomy）是微生物分类学的一个分支，是对细菌进行分类鉴定命名的一门科学。 分类（classification）是指根据相似性或亲缘关系，将一个有机体放在一个单元中。 鉴定（identification）是指确定一个新分离物是否归属于某个已命名的分类单元的过程。 命名（nomenclature）是按照国际命名法规给予有机体一个科学的名称。,分类等级：,界（Kingdom ） 门（Division） 纲（class ） 目（Order ） 科（Family ） 属（Genus ） 种（Species ）,种是最基本的分类单位。 但分类单元之间可加入亚门、亚纲、亚目、亚科等次要分类单位。种以下又可分为亚种、变种、型、菌株等,种 细菌分类的基本单位。生物学性状基本相同的细菌群体构成一个菌种。 凡是16S rRNA序列同源性 97的两株细菌，即可确定为同一种。 属 性状相近关系密切的若干菌种组成属。 菌株 同种微生物不同来源的纯种培养。 标准菌株或模式菌株 具有某种细菌典型特征的菌株。如：金黄色葡萄球菌ATCC25923（标准菌株）,常见的分类等级概念：,型：按某种细微特征在种内进一步区分。血清型、噬菌体型、生物型、细菌素型。用于流行病学的分析研究。 群：不是固定分类单位，按某种生物学特征，把相应的菌株归在一起，组成群。例如：沙门菌血清分群。 例：大肠埃希菌:属于原核生物界-细菌域-变形菌门- 变形菌纲-肠杆菌目-肠杆菌科-埃希菌属的一个种,分类方法,表型分类： 传统分类法（“形态、生理特征”等作为分类依据） 数值分类法及自动细菌鉴定法 分析分类： 对菌体组分、代谢产物组成等分析 质谱鉴定法 基因型分类： 最精确：16SrRNA序列（细胞“活化石”）分析，G+C mol%亦较常用,肠杆菌科细菌编码的检索方法举例(手工法),葡 萄 糖 赖 鸟 硫 靛 乳 卫 苯 尿 枸 产 产 氨 氨 化 基 茅 丙 橼 酸 气 酸 酸 氢 质 糖 醇 酸 素 酸 (A) (G) 4 2 1 4 2 1 4 2 1 - + - + + - - - - AG 2 6 0 AG260 查码 结果为大肠埃希氏菌,临床常用手工细菌鉴定系统(API鉴定系统),API肠杆菌,API非发酵菌,API酵母菌,1、伯杰氏细菌鉴定学手册（Bergeys Manual of Determinative Bacteriology)，D. Bergey（美国细菌学家），1923年第1版，1994年第9版。,2、伯杰氏系统细菌学手册（Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)，Holt（美国细菌学家），1984-1989年编写完第1版共4卷，2001年开始发行第2版共5卷。,细菌分类命名系统,细菌分类命名系统,伯杰氏鉴定细菌学手册（第2版伯杰系统细菌学手册(Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)，本版包括五册，共30篇，主要根据细菌的rRNA、DNA及蛋白质序列进行分类： 第一册为古细菌、蓝绿藻菌、光合作用菌和具分支菌属。 第二册为变形菌门（Proteobacteria）。 第三册为GC比低的革兰阳性菌。 第四册为GC比高的革兰阳性菌。 第五册为浮霉菌门（Planctomycetes）、螺旋体门（Spirochaetes）、纤维杆菌门（Fibrobacters）、拟杆菌属（Bacteroides）、梭杆菌门（Fusobacteria）。,类 ，G有细胞壁的真细菌,类，G+有细胞壁的细菌,命名法,采用生物双名法（binominal nomenclature）。具备拉丁化文字的形式和明确的分类等级两个特点，即由一个属名和一个种名构成。属名在前，第一个字母要大写，种名在后，第一个字母小写，斜体表示。,中文译名与此相反：种名在前，属名在后。如： Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 属名 种名 种名 属名 Salmonella typhi 伤寒沙门菌 属名 种名 种名 属名,例如Salmonella typhi(沙寒沙门菌)。 属名也可用第一个字母代表，如S.typhi 等。有时泛指某一属细菌而不特指其中 的某个细菌则可在属名之后加上sp， 如Salmonella sp，即表示沙门菌属细 菌(sp代表菌种species，复数用spp)；,习题,1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是： A.紫外线照射 B.煮沸5min C.巴氏消毒法 D.流通蒸气灭菌法 E.高压蒸气灭菌法 2.灭菌方法错误的是: A.手术室空气-紫外线 B.饮水-氯气 C.排泄物-漂白粉 D.含血清培养基-高压蒸气灭菌 E.温度计-75%酒精 3.下述不可能杀灭细菌芽胞的方法是： A.煮沸法 B.巴氏消毒法 C.间歇灭菌法 D.干热灭菌法 E.高压蒸气灭菌法,4.关于紫外线，说法错误的是: a.其杀菌作用与波长有关 c.265-266nm杀菌作用最强 b.可损坏细菌的DNA构型 d.其穿透力弱，故对人体无损害 e.紫外线适用空气和物体表面的消毒 5.常用于空气或物体表面的消毒 a.高压蒸气灭菌法 b.紫