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文档简介
生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,实验六 聚合酶链式反应,指导老师:苏 乔 副教授 电话:84706356-606,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,概 述,1、常用PCR反应条件 94 5min 94 30s 72 7min 4 55 45s 35cycle 72 1min 退火温度根据扩增特异性调整 延伸时间根据扩增片段长度调整,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,2、防止污染,设置严格的对照体系, 包括:阳性对照 空白对照 阴性对照,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,植物基因组中actin基因片段的电泳图 1-3:小麦;4-6:烟草;7-9:玉米;10-12:大豆 M:DL2000 E:空白对照,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,3、如果PCR扩增出现非特异条带,解决方 案包括: a.提高退火温度 b.Hot-start PCR c.Touch-down PCR d.重新设计引物,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,技术要点及注意事项,1、同时进行多个PCR反应,仅DNA样品 不同,可配置反应混合液后分装 2、常用模板量: 质粒DNA 植物DNA 可设计梯度实验进行优化,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,思 考 题,1、如何确定PCR反应体系正常且无污染? 2、如果PCR扩增中出现非特异条带,其可能的原因是什么?应如
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