选修一21微生物的实验室培养基础知识.ppt

,选修一专题2 微生物的培养与应用1 基础知识,设想情境,为了 我希望找到ta 我在寻觅再寻觅 分离纯化？ 培养？ 保存？,带着问题,什么是微生物？肉眼可见么？怎样用肉眼区分不同的微生物？,基础知识之基本概念： 微生物、接种、培养基、菌落,微生物,1.现代定义：微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。 2.特点：形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚（大型真菌？）,菌落P18,菌落（colony）：是由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞的群体。 各种微生物在一定条件下形成的菌落特征（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等）具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据,不同的菌落,培养基,1.概念： 按照微生物对营养物质的不同需求所配制出的供其生长繁殖的营养基质。 2. 种类： 按物理形态分： 液体培养基、固体培养基、半固体培养基 按照培养基用途分 ： 选择培养基、鉴别培养基 按照培养基的成分来分 ： 合成培养基、天然培养基、半合成培养基,液体培养基 与固体培养基,液体培养基： 常用于微生物的生产 固体培养基： 在液体培养基的基础上再添加凝固剂（如琼脂）。 常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面,鉴别培养基,常见的选择培养基,加入四环素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 HAT培养基: 分离杂交瘤细胞 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌,想一想：怎样从土壤浸出液中分离出纤维素分解菌？,合成培养基、天然培养基、半合成培养基,MS培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,3. 成分：,水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 +满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求,C,培养基,典例1 P18,接种与接种环（平板划线）,接种（inoculation） ，是指按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基中的过程。,平板划线法,接种与涂布器（涂布平板）,稀释涂布平板法,梯度稀释,涂布平板,归纳,将微生物接种在固体培养基中，会形成单个的菌落。可借此进行微生物的分离与纯化。 接种方法、工具： 培养基类型及作用：,带着问题,对微生物进行培养的过程中，如果有大量杂菌的存在，会有什么影响？ 怎样做到无菌？,无菌技术,阅读P15-16，思考： 1. 无菌技术的主要目的是？ 2. 无菌技术包括哪些方面？ 3. 消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？,无菌技术P15,获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。主要包括消毒与灭菌及操作过程中避免与环境及周围物体中的微生物接触。,消毒： 使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死物体表面或内部的部分微生物。 灭菌： 使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。,无菌要求及操作方法,1.要求： （1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； （2）将培养皿、接种用具进行灭菌； （3）接种的过程要在酒精灯附近进行。 （4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。,2.常用方法： 消毒： 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒（如70%的酒精擦拭、福尔马林熏蒸 ）等 灭菌： 1.灼烧灭菌： 2.干热灭菌： 3.高压蒸汽灭菌：,无菌要求及操作方法,高压蒸汽灭菌,将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121后，维持1530min,超净工作台,微生物的分离纯化,分离：将特定的微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出来的技术； 纯化：在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生物群体生存的技术。 往往需要用特定的选择培养基。,能设想从土壤浸出液中分离出大肠杆菌的基本操作么？,带着问题,怎样对微生物进行计数？,微生物计数方法,1、显微计数法（血球计数板计数法） 优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌； 难以计数微小的细菌。 2.活菌计数法（菌落计数法） 稀释倒平板操作培养 统计菌落数计算,菌种的保存,1、临时保藏法： 对象： 温度： 缺点： 2、甘油管藏法： 对象： 温度：,频繁使用的菌种,4（冰箱）,容易被污染或产生变异,长期保存的菌种,-20（冷冻箱）,基础