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文档简介

知识回顾 1、限制性核酸内切酶:准确切割DNA;DNA连接酶:将DNA片段再连接起来;运载体:运输工具,将体外重组好的DNA导入受体细胞 。基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体;需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶。 2、限制性核酸内切酶又称限制酶,其主要从原核生物中分离出来,能够识别特定的核苷酸序列,并在特定的部位进行切割。其作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键,形成黏性末端和平末端。 3、DNA连接酶是将DNA片段连接起来,恢复被限制酶切割开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同,可分为从大肠杆菌中分离出来的Ecoli DNA连接酶和从T4噬菌体中分离出来的 T4 DNA连接酶 ,前者只能连接黏性末端,后者既可以连接黏性末端也可以连接平末端,但连接平末端的效率比较低。 4、将外源(目的)基因送入受体细胞的载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒 ,常用质粒作为运载体,具有以下特点:(1)能自我复制(2)具有一个或多个限制酶切割位点,便于外源基因插入(3)具有标记基因,可以鉴定目的基因是否进入受体细胞。,专题一 基因工程,1.1 DNA重组技术的 基本工具,学习目标 1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用 2、总结基因工程运载体需要具备的条件 3、模拟制作DNA重组分子,培养学生合作、动手能力 4、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新,预习反馈 1、问题 (1)三种工具及作用表述不确切(如分子运输车:质粒;限制酶:切割DNA分子,获取目的基因) (2)质粒的特点总结不全面 2、表扬 王福香、李浩、田雨、陈玉洁、刘荣、张慧君、赵伟、郑华涛、孙翰卿、徐小磊、孙希凯、任锡昌、张嘉楠、祝丽超、许玉萍、戴晶晶、王跃鹏、王天宇、刘丽庆,合作探究,EcoRI (在G和A之间切割),Smal (在G和C之间切割),黏性末端,平末端,同一种限制酶切割后形成的两个末端是什么关系?,反向重复序列,练习 以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段: CTGCA (2) AC (3) GC (4)G G TG CG CTTAA (5) G (6) GC (7) GT (8)AATTC ACGTC CG CA G 请用DNA连接酶将它们连接起来: _和_能连接; _和_能连接; _和_能连接; _和_能连接。,2和7;3和6;4和8;1和5,GAATTCCGTAGAATTCGGATT,CTTCATGAATTCCCTAA,GAAGTACTTAAGGGATT,CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA ,含目的基因的DNA片段,运载体DNA片段,重组DNA分子片段,EcoRI,EcoRI,模拟制作,一、基因工程的概念. 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶-“分子手术刀” 2.DNA

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