高中生物同步课件：6.1蛋白质的提取和分离(中图版选修1).ppt

第六章 蛋白质和DNA技术,第六章 蛋白质和DNA技术,第1节 蛋白质的提取和分离,学习导航 1.知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。 2.尝试蛋白质的提取和分离。 重、难点,一、蛋白质分离提纯技术 1.将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到高纯度的、甚至是_的蛋白质。 2.包括离心技术、层析技术和电泳技术等。其中，_技术最为快捷灵敏、简便易行。,单一种类,电泳,二、电泳技术及分离蛋白质的原理 1.电泳现象：作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷_的电极方向移动。 2.电泳技术分离蛋白质的原理 (1)蛋白质含有游离的氨基和羧基，是_电解质，在一定pH条件下带有电荷。,相反,两性,(2)蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷_的电极方向移动。 (3)蛋白质所带的电荷数越多，移动得_；电荷数相同时，分子量_，则移动越快。 三、“血清蛋白的提取和分离”活动程序 1.点样：将新制血清5 L、质量浓度为0.4 g/mL的_和质量分数为0.1%的_指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取5 L样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。,相反,越快,越小,蔗糖溶液,溴酚蓝,2.电泳 3.染色：用质量分数为0.05%的_染色液对凝胶进行染色。 4.脱色：用体积分数为7%的_对凝胶板进行浸泡漂洗数次，直至底色脱净。 5.制干胶板：将已_的凝胶板放在_中浸泡3 h4 h后，放在两层透气的_中间自然干燥。,考马斯亮蓝R250,醋酸溶液,脱色,保存液,玻璃纸,判一判 (1)蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化。() (2)在同一个电场电泳后，在凝胶中形成的一个带纹就是一种单纯蛋白质。() (3)在电泳时，应先将稳压稳流电泳仪调到2030 mA，再使样品进入分离胶。() (4)分离操作正确的前提下，如果带纹均匀、狭窄、平整，则说明分离效果比较好。(),四、其他蛋白质的提取与分离 1.牛奶中酪蛋白的提取与检测 (1)当pH_时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用_除去酪蛋白沉淀中的_后，即得到纯的酪蛋白。 (2)酪蛋白中含有酪氨酸，能与_试剂起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成红色。,4.8,酒精,脂肪,米伦,2.卵清蛋白质的分离 选取鸡、鸭、鹅、鹌鹑等动物的新鲜_做实验材料。采用_法分离卵清蛋白质。,卵清,电泳,想一想 可否利用蛋白质的提取与分离技术快速诊断早期癌变？ 【提示】 可以。只需从早期患者的尿液、血液或细胞裂解液中提取少量蛋白质样品,采用蛋白质指纹图谱技术，就可以更加快速、简便、准确地对细胞癌变作出诊断。,要点一 电泳的常用方法 1.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子的带电性质差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。,2.聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1)凝胶形成：,(2)加入SDS作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链；与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。,3.结果分析 (1)不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹，每一种带纹可能就是一种蛋白质。 (2)如果要对每一条带纹作进一步的研究，只需将带纹剪下，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步分离。,特别提醒 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理。 琼脂糖凝胶电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 测定蛋白质相对分子质量通常用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，原因是在一定浓度范围内聚丙烯酰胺的热稳定性强，可用检测仪直接测定。,关于电泳的说法不正确的是( ) A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小,【解析】 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 【答案】 C,变式训练 在蛋白质的分离提纯技术中，最为简捷灵敏的是( ) A离心技术 B层析技术 C电泳技术 D盐析 解析：选C。常用的蛋白质分离提纯技术，包括离心技术、层析技术和电泳技术等，其中电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。盐析可用来提取蛋白质，而不能分离蛋白质。,要点二 实验中应注意的一些问题 1.由于制备凝胶的丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并且容易被皮肤吸收，因此操作必须在通风橱内或通风处进行。 2.将电泳凝胶片放在考马斯亮蓝R250染色液中染包30 min后,多次更换脱色液至背景清晰。脱色后，可将凝胶浸于保存液中，长期封装在塑料袋内使其不会降低染色强度。为保存永久性记录，可对凝胶进行拍照，或将凝胶干燥成胶片。,有A、B、C三种蛋白质，在pH为7的条件下进行电泳，结果如图所示：,请据图回答： (1)在pH为7时，带电荷数最多的是_，最少的是_。原因是_ _。,(2)带相同电荷数的C蛋白质和另一种D蛋白质在电泳时，常常稍能分开，请分析原因。 _,【思路点拨】 本题考查蛋白质电泳技术的原理及应用，解答本题的关键有以下两点： 关键点 电泳时蛋白质所带电荷数影响蛋白质的移动速率。 蛋白质的相对分子质量也影响蛋白质的移动速率。,【解析】 蛋白质所带电荷数越多，移动越快，A蛋白质距离原点最远，C最近，所以A带电荷数最多，C带电荷数最少。电荷数相同时，相对分子质量越小，则移动越快。C和D两种蛋白质带电荷数相同，移动速度接近，说明两者相对分子质量大小相近，所以电泳时稍能分开。,【答案】 (1)A C 在一定pH条件下，蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快，A蛋白质距离原点最远，C蛋白质距离原点最近 (2)在进行电泳时，若蛋白质带相同的电荷数,相对分子质量越小,则移动越快。应该是由于C蛋白质和D蛋白质相对分