(好资料)9_旁分泌调节在缺氧性肺血管收缩(hpv)反应中的作用

九、旁分泌调节在缺氧性肺血管收缩（HPV）反应中的作用【实验目的】1学习研究离体器官张力变化的实验方法。2探讨血管内皮在HPV中的作用。3探讨环加氧酶代谢产物在离体肺动脉缺氧性收缩反应中的作用。【实验原理】肺泡缺氧引起肺小动脉收缩，可以使缺氧的肺泡血流量减少，有利于维持肺泡通气与血流的适当比例，维持较高的动脉血氧分压。但广泛而持久的肺血管收缩可引起肺动脉高压，甚至右心肥大和衰竭。缺氧性肺血管收缩（HPV）的机制与肺血管平滑肌细胞旁的内皮细胞、肥大细胞等释放一些血管活性物质有关，如前列腺素、内皮素、一氧化氮等参与介导或调节缺氧性肺血管收缩反应。本实验通过比较有内皮和去内皮的血管环在使用环氧合酶抑制剂吲哚美辛前后缺氧时肺动脉条张力变化的差异，观察内皮细胞分泌的血管活性物质前列腺素类物质（PGS），以及平滑肌细胞自分泌的PGS在缺氧性肺血管收缩反应中的作用。【实验动物】大白鼠，体重250克/只左右【实验药品与器材】20%氨基甲酸乙酯，10-3mol/L苯肾上腺素，10-5mol/L乙酰胆碱，5mg/ml吲哚美辛，K-H液；手术器械一套，张力换能器，微调器，四道生理记录仪，超级恒温器，微量进样器，常氧气（95%O2+5%CO2），缺氧气（95%N2+5%CO2），减压阀（带流量表）二个，蜡盘五个，大头针若干，银丝若干，三通接头二个，浴槽二个。【实验方法与步骤】1实验装置与调试如图9-16安装灌流记录系统；图9-16 肺血管环灌流记录系统打开恒温器、四道生理记录仪、将K氏液放在恒温器中预温；调零：将换能器空载，平衡后，将四道生理记录仪刻度所在处定为0；定标：在换能器上置重为1克的标准砝码，将四道生理记录仪刻度所在处定为1克。2离体肺动脉环的制备：大白鼠称重后，腹腔注射20%氨基甲酸乙酯1g/kg麻醉；迅速打开胸腔，游离出完整心肺，将心肺迅速浸入预冷的K氏液中；在肺门处剪下一片完整的肺叶，将它置入盛有10ml预冷K氏液的蜡盘中，用大头针在肺边缘将肺舒展固定；在肺门处仔细辨认肺动脉分支，沿其走行逐级分离，取两段约34mm长无分支同级肺内动脉环，其中一段内穿两根银丝，分别作钩栓线，下端固定在盛满K氏液的恒温浴槽里，上端悬挂在张力换能器上；另一段在穿银丝前作去内皮处理：用一表面光滑的细竹签插入血管腔，轻轻旋转和前后移动数次即可，然后同样穿银丝、作钩栓线、悬挂在张力换能器上；5打开常氧气，使流量维持在2ml/min；6通过微调器，调节动脉环基础张力在0.5克左右，使整个系统平衡60分钟，其间每20分钟换等量新鲜K氏液一次。7去内皮的鉴定 加入苯肾上腺素10l,待张力上升稳定后再加入乙酰胆碱10l，待张力变化稳定后，再加入乙酰胆碱20l，观察张力变化，当张力变化稳定后，再加入乙酰胆碱70l,观察张力变化，以判断血管环有无内皮剂量依赖性舒张反应。8缺氧反应换液,重新平衡3060分钟后加入苯肾上腺素10l，待张力上升稳定后改通缺氧气体10分钟，观察张力变化情况；改通常氧气体，换液，平衡3060分钟后重复步骤1一次；改通常氧气体，换液，平衡3060分钟后加入苯肾上腺素10l，待张力上升稳定后改通缺氧气体10分钟，分别记录张力变化情况；重新通常氧气体，平衡3060分钟，按时换液；最后一次换液时，定容10ml，用微量进样器加入吲哚美辛40l，待基线稳定后加入苯肾上腺素10l，待张力上升稳定后，改通缺氧气体10分钟，记录张力变化情况。9分析实验结果：不同处理依次引起的肺动脉张力变化PE0 Ach1 Ach2 Ach3 PE1 Hypo1 PE2 Hypo2 PE3 Hypo3 indomecin PE4 Hypo4有内皮环去内皮环 分别比较Hypo3/PE3、Hypo4/PE4 之变化。【注意事项】1要辨认清楚肺动脉及其分支，分离动作要轻柔，血管环两端用镊子夹过的部位要剪去。2固定血管环的线一定要竖直向下，不能倾斜，否则影响实验结果。附：K-H液的配制先配母液A、B、C：A： NaCl 69g KCl 3.5g 配成500ml液体 MgSO4 2.87g B： KH2PO4 1.62g NaHCO3 21g 配成400ml液体C： CaCl2 2.8g 配成100ml液体 1000mlK-H液的配制方法：依次加入A液50ml+B液40ml+H2O900ml，摇匀后加入C液10ml，加入C液时注意缓慢加入，边加边摇匀，防止沉淀,最后在溶液中加入Glucose2.18g，4冰箱保存。最后用稀盐酸或者1mol