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重庆光大（集团）有限公司 化验员作业指导书重庆光大(集团)有限公司编号：q/gd-pk/gz-01-2010化验员作业指导书2010年12月1日发布 2010年12月1日实施 重 庆 光 大( 集 团) 有 限 公 司 发布51目 录1 目的12 适用范围13 规范性引用文件14 原辅材料检验24.1 生鲜牛奶24.2 白砂糖34.3 稳定剂34.4 香精44.5其他原辅料45 包装材料检验45.1 屋顶盒45.2 纸杯55.3 奶膜55.4杯盖膜55.5 吸管65.6 纸箱66 半成品检验67 成品检验7附录 检验方法9附件1 酒精试验9附件2 煮沸试验10附件3 相对密度的测定11附件4 酸度的测定12附件5 脂肪的测定13附件6 蛋白质的测定14附件7 非脂乳固体的测定17附件8 总固体含量的测定18附件9 乳糖和蔗糖的测定19附件10 杂质度的测定23附件11 双氧水的检测24附件12 乳房炎乳的检查25附件13 掺碱的检验26附件14 掺豆浆、豆饼水的检出28附件15 掺尿素的检测29附件16 掺淀粉的检出30附件17 掺过氧化氢的测定31附件18 菌落总数的测定32附件19 嗜冷菌的测定34附件20 芽孢总数的测定35附件21 耐热芽孢总数测定37附件22 大肠菌群的测定39附件23 美兰还原试验40附件24 抗生素残留的检测41附件25 涂抹检验42附件26 空气净度检验（空曝法和擦拭法）44附表 其他检验方法汇总48化验员作业指导书1 目的为了规范实验室原辅材料的检验，避免因方法繁多混乱造成检验结果不统一、不准确，避免因方法使用不一致给公司产品带来较大的质量隐患，特制订本指导书。2 适用范围本指导书适用于光大（集团）有限公司乳品分公司原辅材料的理化、微生物指标的检测。3 规范性引用文件本指导书中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本指导书。gb 1616-2003 过氧化氢gb/t 5009.46-2003 乳与乳制品卫生标准分析方法gb/t 4789.14-2003 蜡样芽孢杆菌检测gb/t 5009.8-2008 品中蔗糖的测定gb/t 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标gb/t 5750.4-2006 生活饮用水标准检验方法感官性状和物理指标gb/t 5750.5-2006 生活饮用水标准检验方法 无机非金属指标gb19301-2010 生乳gb5413.33-2010生乳相对密度的测定 gb5413.30-2010乳和乳制品杂质度的测定 gb5413.34-2010乳和乳制品酸度的测定 gb5413.3-2010婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定 gb5413.29-2010婴幼儿食品和乳品溶解性的测定 gb5413.5-2010婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定 gb5413.37-2010乳和乳制品中黄曲霉毒素m1的测定 gb5009.5-2010食品中蛋白质的测定 gb5009.3-2010食品中水分的测定 gb5009.4-2010食品中灰分的测定 gb/t 5009.11-2003 食品中总砷及无机砷的测定gb5009.12-2010食品中铅的测定 gb/t 5009.17-2003 食品中总汞及有机汞的测定gb5009.33-2010食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 gb5009.93-2010食品中硒的测定gb/t 5009.123-2003 食品中铬的测定gb21703-2010乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定 gb5413.38-2010生乳冰点的测定 gb5413.39-2010乳和乳制品中非脂乳固体的测定 gb4789.1-2010食品微生物学检验总则 gb4789.2-2010食品微生物学检验菌落总数测定 gb4789.3-2010食品微生物学检验大肠菌群计数 gb4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验 gb4789.10-2010食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 gb4789.15-2010食品微生物学检验霉菌和酵母计数 gb4789.18-2010食品微生物学检验乳与乳制品检验 gb4789.35-2010食品微生物学检验乳酸菌检验 4 原辅材料检验凡是由其他供应商提供的原辅料，必须具备该供应商的营业执照、生产许可证、卫生许可证、官方检验报告、自检报告，并要保证这些证件的有效性。其次，不同原辅材料其检测内容及检测方法主要依据下述内容进行检测。4.1 生鲜牛奶对生鲜牛奶的检验要求批批检验，质量应符合gb19301-2010，检验项目包括感官指标(色泽、气味、组织状态)、蛋白质、脂肪、比重、酸度、杂质、酒精试验、煮沸试验、抗生素试验、三聚氰胺、内酰胺酶、菌落总数、黄曲霉毒素、铅、汞、砷、硒、铬、亚硝酸盐。取样时，取综合样奶样300ml搅匀备用。表1 生鲜奶的检验内容与检验方法（每100ml样品）检验项目标准检验方法感官指标色泽乳白色、无异色按gb19301-2010中4.1检验气味具有新鲜的乳香味、无异味组织状态均匀流体、无肉眼可见异物酒精试验酒精试验：阴性参考附件1进行检验煮沸试验煮沸试验：阴性参考附件2进行检验相对密度/ (20/4)相对密度1.028按gb5413.33-2010进行检验酸度/ (ot)酸度1218参考附件4进行检验脂肪/ (g/100g)脂肪3.1参考附件5进行检验蛋白质/ (g/100g)蛋白质2.8参考附件6进行检验非脂乳固体/ (g/100g)非脂乳固体8.1参考附件7进行检验杂质/ (mg/kg)杂质4参考附件10进行检验掺碱试验掺碱试验：阴性参考附件13进行检验菌落总数/(cfu/g)菌落总数2106参考附件18进行检验抗生素试验抗生素：阴性参考附件24进行检验三聚氰胺三聚氰胺：阴性（2.5mg/kg）按gb22388进行检验内酰胺酶内酰胺酶：阴性参考附件进行检验黄曲霉毒素m1黄曲霉毒素m1：阴性参考附件进行检验铅/ (mg/kg)0.05按gb5009.12-2010进行检验汞/ (mg/kg)0.01按gb/t 5009.17-2003进行检验砷/ (mg/kg)0.03按gb/t 5009.11-2003进行检验硒/ (mg/kg)0.1按gb5009.93-2010进行检验铬/ (mg/kg)0.3按gb/t 5009.123-2003进行检验亚硝酸盐/ (mg/kg)0.4按gb5009.33-2010进行检验4.2 白砂糖表2 白砂糖的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法产品包装符合卫生标准，无破损。查看官方检验报告，对其破损与否可直接进行观察即可感官指标色泽洁白，晶粒均匀，水溶性好，味甜，无异味将适量试样散放在白色平盘中，在自然光下观察色泽和组织结构。再取适量试样置于平盘中，闻气味。再取20g放入150g烧杯中加100ml50的温水，用玻璃棒搅拌均匀，闻其气味来判断是否有异味。然后观察其透明性。微生物特性大肠菌群35个/100g细菌总数350个/100g致病菌不得检出查看官方检验报告并进行抽检杂质度黑渣15个/kg取1kg砂糖放在塘瓷盘中，在明亮处检查其黑点的个数。对原料白砂糖的检验同样采取批批检验，检验方法依据国标gb 317进行检测。保证用于乳品生产白砂糖符合gb 317要求的一级产品。对样品的包装、感官指标(色泽、气味)、杂质度等(见表2)进行检验后，方可入厂。取样方法是抽取样品1.52公斤混匀，取出1公斤留做检查黑点用，另外部分做其他项目的检验。4.3 稳定剂对稳定剂的检测也采取批批检验，每次检验取样品100g或100ml混匀后进行各项目的检测。检验方法依据相应国标进行检测。检测项目包括供应商三证、检验报告，其次对样品的包装、感官指标(色泽、气味)、杂质度等(见下表)进行检验后，检测合格后方可入厂使用。表3 稳定剂的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法包装符合卫生标准，无破损。查看官方检验报告，对其破损与否可直接进行观察即可微生物特性大肠菌群30个/100g细菌总数10000个/100g查看官方检验报告并进行抽检感官指标色泽、组织状态、气味无异常。色泽：将适量试样放在白色平盘或烧杯中，在自然光下观察色泽和组织结构。气味：取适量试样置于平盘或烧杯中，闻气味。4.4 香精对香精的检测采取批批检验。检测项目包括供应商三证、检验报告，其次对样品的包装、感官指标(色泽、气味)、杂质度等(见下表)进行检验后，检验合格后方可入厂使用。表4 香精的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法包装符合卫生标准，无破损。查看官方检验报告，对其破损与否可直接进行观察即可微生物特性大肠菌群30个/100ml细菌总数100个/100ml查看官方检验报告并进行抽检感官指标无色或有色液体，组织状态、气味无异常。将适量试样放在白色平盘或烧杯中，在自然光下观察色泽和组织结构。其次，取适量试样置于平盘或烧杯中，闻气味。对产品的头香、体香、尾香及留香的持久性进行感官体验，测试香精感官的质量。4.5其他原辅料其他原辅料的检测也采取批批检验，抽样方法根据产品的不同而稍作调整。检验方法依据相应国标进行检测。检测项目包括供应商三证、检验报告，其次对样品的包装、感官指标(色泽、气味)及理化指标等进行检验后，合格后方可入厂使用。5 包装材料检验5.1 屋顶盒对屋顶盒的检测采取批批检验，每次检验取样品20。各项目的检测标准与方法参考gb/t 18706-2008、gb/t 12904-2003、gb/t 4789.2-94。检测项目出供应商三证及检测报告外，还需对样品的包装、外观、尺寸规格等(见表5)进行检验，合格后方可入厂使用。表5 纸盒的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。查验检验报告结合肉眼观察包材外观无污染无尘埃无边毛，印刷图案清晰完整无明显变形和色差，无残缺和错印，内外面平整，无皱褶无孔洞无气泡。压痕线平直，无破裂。查验检验报告结合肉眼观察尺寸符合特定要求。查验检验报告并进行抽检微生物特性大肠杆菌：不得检出食品接触面菌落总数1个/cm2查验检验报告并进行抽检5.2 纸杯对屋顶盒的检测采取批批检验，每次检验取样品40个。检测项目包括供应商三证、检验报告，其次对样品的包装、外观、尺寸规格等(见表6)进行检验后，合格后方可入厂使用。表6 纸杯的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。查验检验报告结合肉眼观察包材外观印刷均匀、无色斑，图案与文字清晰、完整。成型杯杯口无凹陷且不起皱，卷口360，印刷油墨不得粘连或污染纸杯内侧，无油污及异物。杯与杯之间不应卡的过紧。查验检验报告结合肉眼观察尺寸符合特定要求。查验检验报告并进行抽检5.3 奶膜对屋顶盒的检测采取批批检验，每次检验取样品取样40cm长。检测项目包括供应商三证、检验报告，其次对样品的包装、外观、尺寸规格等(见表7)进行检验后，合格后方可入厂使用。表7 奶模的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。查验检验报告结合肉眼观察薄膜外观水纹、云雾、条纹状不明显，无气泡、穿孔破裂、膜卷暴筋、杂质、鱼眼及僵块，黑百度、珠光度、亚光度基本一致。查验检验报告结合肉眼观察印刷质量文字、图案清晰完整，同批同色，墨层结合牢固、不脱落查验检验报告结合肉眼观察5.4杯盖膜5.4.1 检测内容 核查供应商三证及检验报告的有效性和有效期限。 对样品的包装、外观、尺寸等项目进行检验，检验标准和方法见表 。检验合格后方可入厂使用。5.4.2 抽样方法 采取批批抽检，每次随机抽取40cm的盖膜进行检测。表8 杯盖膜的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。直接进行观察盖膜外观无穿孔、异物、异味、粘连、涂层不均、复合层分离及明显气泡、皱纹、脏污等查验检验报告结合肉眼观察印刷质量文字、图案清晰、完整、色彩均匀，文字内容印刷无误。与封样接近，无明显色差查验检验报告结合肉眼观察尺寸符合特定要求。查验检验报告并进行抽检5.5 吸管5.5.1 检测内容 核查供应商三证及检验报告的有效性和有效期限。 对样品的包装、外观、尺寸等项目进行检验，检验标准和方法见表 。检验合格后方可入厂使用。5.5.2 抽样方法 采取批批抽检，每次随机抽取50支吸管进行检测。表9 吸管的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。直接进行观察包材外观透明吸管、无杂质、无油污、无破损、封口牢实查验检验报告结合肉眼观察尖头斜度45查验检验报告并进行抽检尺寸符合特定要求。查验检验报告并进行抽检5.6 纸箱5.6.1 检测内容 核查供应商三证及检验报告的有效性和有效期限。 对样品的包装、外观、规格等项目进行检验后，检验标准和方法见表 。检验合格后方可入厂使用。5.6.2 抽样方法采取批批抽检，每次随机取样10个做外观、尺寸等方面的检测。表10 纸箱的检测内容及检测方法检验项目检验标准检验方法外包装符合卫生标准，无破损。查验检验报告结合肉眼观察包材外观无明显色差，印刷清析，文字内容无误查验检验报告结合肉眼观察尺寸符合特定要求装箱试验尺寸是否合乎要求。6 半成品检验 半成品检验内容及检验方法见表11.表11 半成品内控指标及检验方法产品名称比重酸度ot脂肪%蛋白质%非脂乳固体%纯牛奶标化样1.02820ot3.12.98.1花色奶标化样20ot2.52.3巴氏奶标化样1.02820ot3.13.38.3娟珊王鲜奶标化样1.02920ot3.53.58.3低乳糖鲜奶标化样1.02820ot3.33.08.1原味酸奶标化样2.72.5低乳糖酸奶标化样3.12.9娟珊王酸奶标化样2.72.5绿豆酸奶标化样2.72.5红枣酸奶标化样2.72.5蓝莓酸奶标化样2.72.5谷物酸牛奶标化样2.72.5检验方法见附件3见附件4见附件5见附件6见附件77 成品检验成品检验内容及检验方法见表11。表11 产品内控指标产品名称规格包装类型标准总重允许灌装范围fat%pro%三聚氰胺mg/kg非脂乳固体%备注纯牛奶200ml百利包208.4g208212g3.12.92.58.1其他指标执行gb25190花生奶200ml百利包210.9g211214g2.52.32.5其他指标执行gb25191麦香奶200ml百利包209.4g209213g2.52.32.5蜜桃奶200ml百利包209.4g209213g2.52.32.5巴氏杯奶180ml杯装193.6 g194198g3.33.02.58.1其他指标执行gb19645巴氏盒奶200ml盒装216.0g216220g3.13.32.58.1巴氏盒奶260ml盒装280.5 g280284g3.13.32.58.1娟珊王鲜奶180ml杯装194.2 g194198g3.53.52.58.3娟珊王鲜奶260ml盒装280.8 g281285g3.53.52.58.3低乳糖鲜奶260ml盒装281.4 g281285g3.33.02.58.1原味酸奶100g杯装105.7g106109g2.72.52.5其他指标执行gb19302原味酸奶120g杯装126.2g126129g2.72.52.5原味酸奶150g杯装157.5g157160g2.72.52.5原味酸奶220g盒装231.8g232235g2.72.52.5低乳糖酸奶150g杯装157.3g157160g3.12.92.5娟珊王酸奶120g杯装126.3g126129g2.72.52.5娟珊王酸奶220g盒装232.2g232235g2.72.52.5检验方法直接称量见附件5见附件6gb/t 22388见附件7附录 检验方法附件1 酒精试验1 原理(1) 乳中酪蛋白胶粒带有负电荷，酪蛋白胶粒具有亲水性，在胶粒周围形成了结合水层，所以，酪蛋白在乳中以稳定的胶体状态存在；(2) 酒精具有脱水作用；(3) 当乳的酸度增高时，酪蛋白胶粒带有的负电荷被h+中和；(4) 酪蛋白胶粒周围的结合水易被酒精脱去，中和负电荷造成凝集。用一定浓度的酒精与等量牛乳混合，根据蛋白质的凝聚，判定牛乳的酸度(试验的标准温度是20左右)。2 试剂72%和75%酒精溶液3 操作方法用10ml吸管吸取2ml待检乳样，置于干燥、干净的培养皿中。吸取等量酒精（72%或75%，v/v)加入皿内，边加边转动平皿，使酒精与乳样充分混合。在光线充足的白色背景下观察，培养皿内出现絮片的牛乳酒精试验呈阳性 (勿使局部酒精浓度过高而发生凝聚) 。4 注意事项(1) 取样(采样)要具有代表性；(2) 样品中(待检样)勿混入水分及其它离子，以免造成检验误差；(3) 所用吸管与平皿必须干燥、干净(4) 配制酒精时，所加的水必须是煮沸过的，且水温保持室温；(5) 配制酒精时，酒精与水必须充分混匀。备注：酒精实验使用浓度为75%和72%，酒精最好由专人配置，可减小偏差。附件2 煮沸试验1 原理乳的酸度愈高，乳中蛋白质对热的稳定性愈低，愈易凝固。根据乳中蛋白质在不同温度时凝固的特征，可判断乳的新鲜度。2 仪器20ml吸管、水浴箱。3 操作方法(1) 取10ml乳，放入试管中，用酒精灯加热至沸腾，观察管壁有无絮片出现或发生凝固现象。(2) 判定标准：如果产生絮片或发生凝固，则表示不新鲜，酸度大于26t(表1)。表1煮沸试验判定标准表乳的酸度(ot)凝固条件乳的酸度(t)凝固条件18煮沸时不凝固40加热63以上凝固20煮沸时不凝固50加热40以上凝固26煮沸时不凝固6022时自行凝固28煮沸时不凝固6516时自行凝固30加热77以上凝固附件3 相对密度的测定1 乳稠计法（参考gb5413.33-2010）1.1 仪器乳稠计、温度计、量筒1.2 操作方法将1025的牛乳样品小心地注入容积为250ml量筒的3/4处，注意避免泡沫产生。用手拿住乳稠计上部，小心地将它沉入牛乳中，放手让其在乳中自由浮动，但不能与筒壁接触，待静止12min后读取乳稠计度数，如温度不是20，需对读数进行校正。计算公式如下：相对密度=1+乳稠计读数/1000(温度每上升1相对密度下降0.0002)注：本标准规定牛乳相对密度为20的牛乳与同体积4水的质量比值。2 快速乳成分分析仪检测（ft120检测） 附件4 酸度的测定（参考gb5413.34-2010）1 液态乳酸度测定取250ml干净三角瓶，用煮沸冷蒸馏水涮洗干净；用10ml吸管准确吸取10ml乳样注入上述三角瓶中，再加入20ml中性蒸馏水(煮沸后冷却的蒸馏水)，3滴0.5%酚酞试液，摇匀；用0.1mol/l的标准氢氧化钠溶液滴定，边滴定边转动三角瓶，牛奶混合液呈微红色且30秒内不褪色；把滴定时所消耗的0.1mol/l氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以10即得鲜奶的滴定酸度(ot)。整个滴定过程需在45秒内完成。2 酸奶酸度的测定称10g酸奶置于250ml三角瓶中，加入20ml蒸馏水，再加入3滴0.5%酚酞试液，摇匀，用0.1n氢氧化钠标准溶液滴定至牛奶混合液呈微红色且30秒内不褪色。将消耗0.1n氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以10即得酸奶的滴定酸度(ot)。整个滴定过程需在45秒内完成。3 标准色的配制吸取10ml 牛乳，加入20ml 蒸馏水，再加入0.005%的碱性品红溶液(0.005g碱性品红+100ml95%的乙醇)3滴(如不能正确判定牛乳滴定终点，必须制备标准色)。附件5 脂肪的测定1 方法一(盖勃氏法)/（参考gb5413.3-2010）1.1 原理利用硫酸破坏乳品中的非脂成分，使脂肪游离出来，加入异戊醇可利于脂肪的析出，有助于脂肪层的结合；用离心机使脂肪层与溶液分离，根据乳脂计中脂肪柱读数，计算乳品中脂肪的含量。1.2 仪器乳脂计、乳脂肪离心机、移液管1.3 试剂(1) 90%浓硫酸(100ml浓硫酸加6ml蒸馏水)：用于纯牛奶、巴氏奶及其半成品脂肪的测定。(2) 80%浓硫酸：用于含糖量较高产品及其半成品脂肪的测定。(3) 异戊醇1.4 操作方法(1) 液体乳脂肪的测定量取一定浓度浓硫酸10ml注入牛乳乳脂计内，用定量移液管吸取11ml乳样加入乳脂计内，再加入异戊醇1ml，塞紧橡皮塞，包上毛巾，充分振摇使牛乳凝块溶解。然后将乳脂计放入离心机中，离心5min(要求打开恒温开关)，取出立即读数，读数时要将乳脂肪柱下弯月面放在与眼睛同一水平面上，以弯月面下限为准，所得数值即为脂肪的百分数。(2) 酸奶脂肪的测定吸取10ml 80%的浓硫酸于牛乳乳脂计中，小心沿壁加入5ml样品，在此吸管不移开乳脂计的情况下，再通过此吸管用另一只吸管加入6ml水，之后再加入1ml异戊醇， 塞紧橡皮塞，包上毛巾，充分振摇使牛乳凝块溶解。然后将乳脂计放入离心机中，离心5min(要求打开恒温开关)。取出读取乳脂计上的相关数值即为牛奶的脂肪百分数。乳脂计读数乘以2.2，即得被检样品的脂肪含量(结果以体积与重量的百分数表示)。1.5 允许差:两次平行测定误差不应超过乳脂计最小刻度值的一半。注：参考gb/t 5009.46-2003 乳与乳制品卫生标准分析方法。2 方法二(快速乳成分分析仪ft120检测)附件6 蛋白质的测定1 方法一（凯氏定氮法）/（参考 gb5009.5-2010）1.1 原理蛋白质是含氮的有机化合物。牛乳与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。测定步骤：消化蒸馏滴定。1.2 试剂与仪器(1) 消化试剂：硫酸铜(催化剂)、硫酸钾(提高硫酸沸点由330升至400)、浓硫酸。(2) 硼酸溶液(30g/l)：30g酸(分析纯)溶于1000ml热蒸馏水中，混匀备用。(3) 混合指示液：1份甲基红乙醇溶液(1g/l)与5 份溴甲酚绿乙醇溶液(1g/l)临用时混合。(4) 氢氧化钠溶液(40%)：400g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。(5) 硫酸标准溶液c(1/2h2so4)=0.0500mol/l或盐酸标准溶液c(hci)=0.0500mol/l。1.3 操作步骤1.3.1 消化在干燥的250ml定氮瓶中，加入3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合催化剂，之后加入1015g乳样（精确到0.0001），再加入20ml浓硫酸使样品全部浸泡在消化液中，防止样品粘附瓶颈上部，摇匀后将瓶以45角斜支在电炉上，先微火加热，以防瓶内泡沫冲出而影响结果，当泡沫完全停止、消化液均匀沸腾后，加大火力，直至瓶内容物的颜色逐渐成透明的淡绿色后继续消化0.51h，若凯氏烧瓶壁上粘有炭化粒时应进行摇动，或待瓶内容物冷却数分钟后，用少量、多次过氧化氢溶液冲下，继续消化0.5h直至完全透明为止，稍冷，沿瓶壁吹入少许蒸馏水，混合，再沿瓶壁吹入少许水(防止剧烈沸腾，水冲出烧瓶)，至烧瓶内溶液体积达到约60ml。将澄清的消化液放冷后，小心移入100ml容量瓶中，以水冲洗消化瓶数次，洗涤液一起并入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用，同时作空白试验(除不加样品外其余与消化步骤一致)。1.3.2 蒸馏和吸收连接定氮蒸馏装置，检查各连接部分不漏气。在冷凝器的下端放置一个盛有10 ml硼酸溶液23混合指示剂的250ml锥型瓶(接收瓶)，使冷凝器下端的玻璃管，在液面以下。吸取10ml消化液于定氮蒸馏瓶中，将10ml氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中，一切准备好后，点火进行蒸馏，蒸馏至锥形瓶内液体变成蓝色，继续蒸馏1min后用蒸馏水冲洗出液管口，将洗液一并收集于锥形瓶内，蒸馏途中不得停火断气，否则发生倒吸(若意外情况发生倒吸时，应及时破除真空)。注：(1)蒸馏时要注意蒸馏情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接收瓶。火力太弱，蒸馏瓶内压力减低，则接收瓶内液体会倒流，造成实验失败。(2)必须保证nh3全部被回收，可以采用ph试纸验证蒸馏物是否呈碱性。1.3.3 滴定使用微量滴定管以0.05n的硫酸溶液滴定锥形瓶中的溶液，使之由蓝绿色滴定至酒红色为止，同时做空白试验。1.4 计算（v1v0）c0.0140f100c0.0140f100m（v/100）pro 含量%=式中：v1样品消耗酸体积，ml；v0空白消耗酸的体积，ml；c酸标准溶液的浓度，mol/l；m称取样品的质量，g；v从容量瓶中吸取消化液的体积，ml；0.0140氮原子的摩尔质量，kg/mol；f氮换算成蛋白的系数(6.38)。1.5 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。1.6 注意事项(1) 消化开始温度不宜过高，以防泡沫冲出；(2) 消化必须在专门的消化室进行，以利于废气导出；(3) 消化完毕不得用冷水冷却，应自然冷却；(4) 若需用h2o2 水冲，必须在冷却后；(5) 蒸馏时要打开水阀，作冷却水用；(6) 吸收时必须伸入液面以下。1.7 备注加入硫酸钾的作用是提高硫酸的沸点(338)，增进反应速度。加入定量的硫酸钾将硫酸沸点提高到400，但过多的硫酸钾会造成沸点太高。生成的硫酸铵在513会分解，故此加入硫酸钾量一定要准确。加入硫酸铜的是起催化作用，使氧化作用加速。2 方法二(快速乳成分分析仪-ft120检测)附件7 非脂乳固体的测定1 方法一（gb5413.39-2010乳和乳制品中非脂乳固体的测定)非脂乳固体%=干物质%-脂肪%2 方法二（快速乳成分分析仪ft120检测）附件8 总固体含量的测定1 方法一(校准仪器、手工检测)1.1 原理将样品放入(1002)的烘箱中加热，直至恒重，所剩余的样品质量即为总固体含量。对于纯乳制品，总固体含量即为全乳固体含量。1.2 仪器称量皿；干燥器；分析天平；烘箱；移液管1.3 操作方法将皿和海砂置于100105烘箱中烘2h后至恒重取出，放入干燥器中冷却30min后先称皿重量w1。再将5ml牛乳注入到皿中称重w，然后放在水浴上烘干，再放在100105烘箱中烘34h取出，放入干燥容器中冷却0.5h后取出称重w2，计算公式如下：全乳固体(%)= (w2 - w1)/( w - w1)式中：w2 烘干后皿和海砂及牛乳的重量gw1空皿和海砂的重量gw-w1 牛乳的重量g2 方法二（快速乳成分分析仪测定）附件9 乳糖和蔗糖的测定/(参考gb5413.5-2010)1 蔗糖含量的测定1.1 仪器分析天平；50ml烧杯；10ml刻度吸管；250ml三角烧瓶；5ml，10ml碱式滴定管5ml，10ml移液管；25ml，50ml碱式滴定管；0-100 温度计；752水浴锅；1000w可调电炉；90nm玻璃漏斗；180nm定性滤纸1.2 试剂(1) 200g/l乙酸铅溶液：取20g乙酸铅，溶解于100ml水中。(2) 草酸钾：磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3g，磷酸氢二钠7g，溶解于100ml中。(3) 费林试液甲液：取34.639g硫酸铜，溶于水中，加入0.5ml浓硫酸，加水至500ml。(4) 费林试液乙液：取173g酒石酸钾钠及50g氢氧化溶于水中，稀释至500ml，静止两天后过滤。(5) 1g/l次甲基蓝溶液；体积比1:1的盐酸溶液；300g/l氢氧化钠溶液。(6) 5g/l酚酞溶液：将0.5g酚酞用75ml体积分数为95%的乙醇溶解，加入20ml水，再加入氢氧化钠标准溶液直至出现淡粉色，加水至100ml。1.3 操作步骤1.3.1 费林试液的标定方法：(1) 用乳糖标定称取预先在9294烘箱中干燥2h纯乳糖约0.75g(准确至0.2mg)用水溶解并稀释至250ml。用10ml费林试液(甲、乙液各5ml)，按后面的乳糖测定方法进行操作，用乳糖液滴定至终点，按下列公式计算出费林试液乳糖校正值f1 。4v1m1al1f1=式中：a1实测乳糖数，mg v1滴定时消耗的乳糖液量，ml m1称取的乳糖量，gf1费林试液乳糖校正值al1-由乳糖液滴定毫升数查表所得得乳糖数，mg(2) 用蔗糖标定 称取在烘箱中干燥2h的蔗糖约0.2g(准确到0.2mg)，用50ml水溶解并洗入100ml的容量瓶中，按样液的转化先把蔗糖转化，再按乳糖滴定法操作，得出滴10ml费林试液(甲乙液各5ml)所消耗的转化糖量，按下列公式得出蔗糖校正值f2。10.5263v2m2al2f2=式中：v2滴定消耗转化糖数，ml m2称取的蔗糖数，g f2费林试液蔗糖校正值 al2蔗糖液滴定毫升数查表所得的转化糖数，mg1.3.2 乳糖的测定步骤(1) 样品的准备称取20-25g液体样品，准确到0.2mg(酸乳：10-12g)，置250ml容量瓶中，加4ml乙酸铅、4ml草酸甲磷酸氢二钠溶液，每次加入试剂时都要徐徐加入，别摇别加，用水稀释到刻度，混匀。静止数分钟后用干燥滤纸过滤，弃去最初的25ml滤液，所得滤液用作测定用。(2) 预备滴定取费林试液10ml(甲、乙液各5ml)于250ml三角烧瓶中，再加入20ml水。在三角烧瓶中放入15ml滤液，把烧瓶至于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入次甲基蓝指示剂3滴，混匀，接着徐徐加入滤液至兰色完全退尽，读取所用滤液的毫升数 。(3) 精密滴定取费林试液10ml(甲乙液各5ml)于250ml三角烧瓶中，再加入水20ml，在三角烧瓶中放入比预备滴定少0.5-1.0ml的滤液，把烧瓶至于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态2min，加入次甲基蓝指示剂3滴，混匀，接着一滴一滴的继续滴入滤液至兰色完全，读取所有滤液的毫升数。以此精密滴定的滴定量作为计算的依据(同时测定蔗糖时，此及为转化前的滴定量)。1.3.3 蔗糖的测定步骤(1) 样品的准备：同乳糖测定样品准备(2) 转化前样液(即滤液)的预备滴定：同乳糖测定的预备滴定(3) 转化前样液的精密滴定：同乳糖测定的精密滴定。1.3.4 样液的转化取50ml滤液于容量瓶中，加入10ml水，再加10ml 1:1盐酸，混匀，插入温度计，置于75水浴锅中，时时摇动，在2min，30s至2min45s之间使容量瓶内升温至67。至达到67后，继续在水域浴中保持5min于此时间内使洋液温度升至69.5，取出，用冷水冷却，当瓶内温度降至时35，加入2滴酚酞指示剂，混匀。用300g/l氢氧化钠中和至中性，冷却至约20，稀释至刻度，混匀，获得滤液的转化液。半小时后再滴定。1.3.5 转化液的预备滴定同转化前样液的预备滴定。1.3.6 转化液精密滴定同转化前样液的精密滴定。1.4 结果表述1.4.1 乳糖结果表述f1f125v1mw(lactose)=式中：w样品乳糖的质量 分数，% f1由消耗滤液的毫升数查表所得的乳糖数， f1费林试液的乳糖校正值 v1消耗滤液的毫升数 m称取的样品质量1.4.2 蔗糖结果表述(1) 转化前的转化糖量f2f225v1mw2=式中: w2转化前转化糖的质量分数，%f2由转化前样液的消耗量查表所得的转化糖数，mgf2费林试液的蔗糖校正值v1消耗滤液的毫升数，mgm称取的样品的质量，g(2) 转化后转化糖量f3f250v2mw1=式中：w1转化后转化糖的质量分数，% f3由转化液的消耗量查表所得的转化糖数，mg v2转化液的消耗量，ml f2费林试液的蔗糖校正值 m称取的样品的质量，g1.4.3 蔗糖量w(sucrose)=(w1-w2) 0.95式中：w样品中蔗糖的质量分数，% w1转化后转化糖的质量分数，% w2转化前转化糖的质量分数，% 0.95蔗糖的转化系数1.4.4 总糖 总糖(%)=乳糖(%)+蔗糖(%)附件10 杂质度的测定（参考gb5413.30-2010）1 原理试样经过滤板过滤、冲洗，根据残留于过滤板上的可见带色杂质的数量确定杂质量。2 仪器和设备2.1 过滤设备：杂质度过滤机或配有可安放过滤板漏斗的 2000 ml2500 ml 抽滤瓶。2.2 过滤板：直径32 mm，单位面积质量为135g/m2，符合附录a 的要求，过滤时通过面积的直径为28.6 mm。2.3 杂质度标准板。2.4 杂质度标准板的制作方法见附录 b。2.5 天平：感量为 0.1 g。3 分析步骤液体乳样量取500 ml；乳粉样称取62.5 g（精确至0.1 g），用8 倍水充分调和溶解，加热至60 ；于过滤板上过滤，为使过滤迅速，可用真空泵抽滤，用水冲洗过滤板，取下过滤板，置烘箱中烘干，将其上杂质与标准杂质板比较即得杂质度。当过滤板上杂质的含量介于两个级别之间时，判定为杂质含量较多的级别。6 分析结果的表述与杂质度标准比较得出的过滤板上的杂质量，即为该样品的杂质度。7 精密度按本标准所述方法对同一样品所作的两次重复测定，其结果应一致，否则应重复再测定两次。附件11 双氧水的检测1 滴定法(依据gb 1616-2003 工业过氧化氢)1.1 药品的配制(1) 1:15的硫酸：量取1体积的硫酸与15体积的水混合。(2) 0.1mol/l的高锰酸钾配制与标定：依据国标gb/t601-2002。1.2 操作步骤准确称取0.120.16g(精确到0.0002g)样液于一盛有100ml硫酸的250 ml三角瓶中，用高锰酸钾标准溶液滴定至溶液呈粉红色，并在30s内不消失即为终点。1.3 计算c1=1.701vc/m式中： c1所求双氧水浓度，%；v滴定时消耗高锰酸钾溶液的体积，ml；c高锰酸钾溶液的实际浓度，mol/l；m称取双氧水的质量，g。1.4 允许差：取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，平行测定结果的绝对差值不大于0.10%。2 波美计测定法2.1 操作步骤将双氧水样品小心地注入容积为250 ml 的量筒中，加到量筒容积的3/4，勿使发生泡沫，用手拿住波美计上部小心地将它沉入到相当刻度1 处，放手让它在液体中自由浮动，但不能与筒壁接触。待静止12min 后读取波美计读数，以液体表面层与波美计的接触点，即新月形表面的顶点为准。根据双氧水温度和波美计读数，查表求得双氧水的百分浓度。2.2 注意事项(1) 勿使液体产生泡沫，否则影响检验结果；(2) 液体温度不易太高，否则影响检验结果；(3) 手不要接触双氧水液体。附件12 乳房炎乳的检查1仪器与药品1ml、2ml、20ml吸管各1支，10ml吸管2支，200ml容量瓶1个，250三角瓶1个，50ml滴定管1支，滴定台架1个，量筒1个，石蕊试纸，20%硫酸铝溶液，2mol/l氢氧化钠溶液，10%酪酸钾溶液，0.02817mol/l硝酸银溶液(每升水溶入4.788g硝酸银，标定后备用)，硝酸银溶液(1.3415g硝酸银溶于1000ml蒸馏水)，大试管2支，5ml吸管2支2检查方法2.1 氯糖数测定先测定乳糖量(本试验可按经验数值4.65%计算)。然后测“氯化物”测定时吸取20ml牛乳，注入200ml容量瓶中，加入10ml 20%硫酸铝溶液和8ml2mol/l的氢氧化钠溶液，混合后，加蒸馏水至刻度，摇和均匀过滤。取100ml滤液注入250ml三角瓶中，加入1ml 10%的酪酸钾溶液，以石蕊试纸试其ph，调到中性，用0.02817mol/l硝酸银滴定之，呈砖红色为终点，最后读数计算。健康牛乳的氯糖数不超过4，患乳房炎时乳中氯化物增加，乳糖减少，氯糖数大于4。2.1 氯化物简易测定取5ml硝酸银溶液注入试管中，加入2滴10%铬酸钾溶液。再注入样乳1ml，摇和后观察颜色变化，如出现黄色，说明乳中氯化物超过0.14%(因全部银已被沉淀成氯化银)。若乳中氯化物少于0.14%则出现微红至微棕色(随铬在、酸银当沉淀量而改变)。一般氯化物正常含量为0.090.14%。此法变可作为乳中掺盐的定性检查。 cl- +agno3 agcl （白色沉淀） 2ag+ + k2cr2o4 ag2cro4 （红色沉淀）附件13 掺碱的检验为了掩蔽牛乳的酸败作用，降低牛乳的酸度，防止牛乳因变酸而发生凝结，因而在牛乳中加入少量的碱，常用的碱为na2co3及nahco3。但是加碱后的牛乳不但滋味不佳，而且易使腐败菌生长，同时有些维生素也被破坏，对饮用者健康不利，固而对鲜乳加碱的检出有一定的意义。1 方法一（玫瑰红酸法）1.1 原理玫瑰红酸的ph 变色范围为6.9-8.0，遇到加碱的乳，其颜色由棕黄色变为玫瑰红色，故可借此检出加碱乳和乳房炎乳；1.2 药品的配制玫红酸(0.5g/l)：准确称取0.5 g 玫红酸，加入1000ml 95%的乙醇溶解。1.3 方法于干燥干净试管中加入2ml 乳样，加2ml 玫红酸，摇匀观察颜色变化，有碱时呈玫瑰红色，不含碱的纯牛奶为棕黄色。根据碱含量的不同，可判定为微量、中量、大量。2 方法二（溴麝香酚蓝法）2.1 仪器与药品5ml吸管2支、试管2个、试管架1个、0.04%的溴麝香酚蓝酒精溶液。2.2 操作方法取被检乳样3ml注入试管中，然后用滴管吸取0.04%溴麝香酚蓝溶液，小心地沿试管壁滴加5滴，使两液面轻轻地互相接触，切勿使两溶液混合，放置在试管架上，静置2min，根据接触面出现的色环特征进行判定，同时以正常乳作对照。2.3 判定标准见表1。表1 碳酸钠检出判定标准表乳中碳酸钠的浓度（%） 色环的颜色特征0黄色0黄绿色0.05淡绿色0.1绿色0.3深绿色0.5青绿色0.7淡青色0.7青色1.5深青色注：溴麝