课件原料中非蛋白氮的检测.PPT

,原料中非蛋白氮的检测,1. 器皿和设备 1.1 立体显微镜 1.2 实验室用粉碎机 1.3 PH计 1.4 漩涡混合器 1.5 45 目筛 1.6 试管 1.7 培养皿 1.8 滴管 1.9 点滴板 1.10 常规化验设备和玻璃器皿,2. 化学试剂 2.1 尿素酶，Merck # 1.08489.00005(或等效) 2.2 溴百里香酚兰，分析纯 2.3 氢氧化钠，分析纯 2.4 盐酸 37%，分析纯 2.5 二苯胺，分析纯 2.6 Chromotropic acid(C10H6O8S2Na2)，分析纯 2.7 硫酸 98%，分析纯 2.8 碘化钾，分析纯 2.9 氯化汞，分析纯 2.10 石油醚，分析纯 2.11 无水乙醇，分析纯 2.12 三聚氰酸，分析纯 2.13 尿素，分析纯 2.14 硝酸钾，分析纯 2.15 氯化铵，分析纯 2.16 三聚氰胺，分析纯 2.17 生物蛋白精 ESB 2.18 尿醛聚合物 2.19 蒸馏水,3. 试剂准备 3.1 0.4尿素酶 取 0.4g 尿素酶溶于 100ml 蒸馏水中，放在冰箱里保存。 3.2 0.1的溴百里酚蓝 取 0.1g 溴百里酚蓝溶于1.6ml 0.1N NaOH(NaOH 0.4g 溶于 100ml 水)，混匀，用蒸馏水定容到 100 ml，用 0.1N HCL(量取 0.88ml HCL加入到 100ml 蒸馏水中)标定PH 2.32.4，之后将溶液转入棕色玻璃试剂瓶，放在冰箱里保存。 3.3 0.5二苯胺 取 0.5g 二苯胺，倒入 20ml 蒸馏水，再慢慢加入 80ml 硫酸混匀即可。 3.4 0.5的变色酸 取 0.5g 变色酸，倒入 100ml 硫酸中，搅匀即可。 3.5 20% NaOH 取 20g NaOH溶于蒸馏水里，然后定容到 100 毫升，混匀，室温保存。 3.6 奈斯勒试剂 3.5g KI加入 1.25g HgCl2 加入 80ml 蒸馏水，搅拌，加 12g NaOH ，用蒸馏水定容到 100ml，用滤纸过滤溶液，将滤液保存到棕色玻璃试剂瓶中。,3.7 75% H2SO4 缓慢将 25ml 浓硫酸注入 25ml 蒸馏水中，混匀，室温保存。 3.8 40% 乙醇 将 40ml 乙醇与 60ml 蒸馏水混匀，室温保存。 3.9 饱和三聚氰酸溶液 取 1g 三聚氰酸溶于 100ml 80蒸馏水中，混匀，室温保存。 3.10 参照物准备,3.10 参照物准备 通过将几种非蛋白氮化学药品混合到原料中制备非蛋白氮的参照物，按参照物样品重量为100克计算。,为了使样品结果有效，NPN参照样品必须和待测样品一起检测。,4. 检测步骤 检测方法包括对尿素、铵盐、硝酸盐/亚硝酸盐、尿醛聚合物、生物蛋白精和三聚氰胺的检测。如果样品在检测前需要脱脂，下面有两种脱脂方法。 常规脱脂 快速脱脂 样品放在滤纸里包裹好 将样品放在大烧杯中 加入石油醚没过样品 用石油醚浸泡 搅动15分钟 用滤纸过滤收集脱脂样品 等待2-3小时 取出滤纸包放到通风橱风干 样品放到通风橱风干,称取2克样品+10ml蒸馏水,静置10分钟,尿素检测,铵盐检测,硝酸盐检测,搅拌、混匀10-15秒,取上清液检测非蛋白氮,4.1 尿素/铵盐/硝酸盐,取上清液检测非蛋白氮,静置10分钟,取上清液 6-8 滴在点滴板,尿素检测,加0.1%溴百里香酚兰 2-3滴，0.4%尿素酶4-5滴。,结果：蓝色,铵盐检测,硝酸盐检测,加2-3滴奈氏勒试剂,结果：深橘红色变灰,加0.5%二苯胺2-3滴,结果：中间出现兰黑色,取上清液 6-8 滴在点滴板,取上清液6-8滴在点滴板,4.2 尿醛聚合物 有两种方法判断尿醛聚合物。 4.2.1 方法1 范围：适合于动物类产品和植物类产品。 脱脂后的动物类产品(植物类产品不必脱脂) 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取6-8滴0.5%变色酸于点滴板上 取少量筛得的细粉于0.5%变色酸的点滴板上 结果：5-10分钟内出现紫罗兰色,判定最低限 0.15%,4.2.2 方法2 范围：仅适用于动物类产品。 取3g样品于50ml具塞离心管里 加35ml煮沸的20%NaOH溶液 漩涡混匀后，放置5分钟 将上清液倒掉，留取下沉物 加35ml蒸馏水 混匀，放置5分钟 倒掉上清液 用蒸馏水洗涤下沉物3-4次，直至洗涤液透明 下沉物用蒸馏水转移到10ml试管中 加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色 如果颜色不明显可以再加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色 结果：呈现紫罗兰色,判定最低限 0.25%,4.3 ESB生物蛋白精检测 范围：适用于动物类产品和植物类产品 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察结果 结果：表面漂浮灰白色或浅蓝色小点,判定最低限0.1%,4.4 三聚氰胺检测 有两种方法判定三聚氰胺。 4.4.1 方法1 (0.5%二苯胺/奈斯勒方法) 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察三聚氰胺为明显的晶体 确认结果后继续下面操作 从脱脂后的筛下细粉里挑出怀疑部分 加2滴75%硫酸，等待1分钟 加5滴奈斯勒试剂，等待3-5分钟 显微镜下观察 结果：白色部分呈橘红色,判定最低限 0.05%,4.4.2 方法2 (三聚氰酸法) 适合于动物类产品 适合于植物类产品 取 4g 脱脂样品 取 5g 样品 用45目筛筛得细粉部分放到具塞离心管 用45目筛筛得细粉部分放到试管里 加 40ml 40%乙醇 用三氯甲烷