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文档简介

植物组织培养实验,【实验目的】,熟悉植物组织培养流程 了解培养基的配制方法 掌握无菌操作技术,【实验原理】,植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或 细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养 物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使 其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依 据是植物细胞具有全能性。,【实验材料及仪器】,实验材料：野生虎杖植株的幼芽、叶片、茎段 实验器材：高压灭菌锅，超净工作台，电子天 平，酒精灯， 三角瓶，镊子，剪刀， 烧杯 实验药品：MS培养基，蔗糖，琼脂，0.1%升 汞，NAA，6-BA，NaOH，HCl， CPPU，TDZ,【实验步骤】,1.MS培养基母液的配制 按照表1配制MS培养基母液,表1. MS基本培养基的配制,MS培养基的配制,取1000ml烧杯，分别取各种成分的母液100ml， 加入烧杯，称取蔗糖30g，琼脂6.5g，按照需要的浓 度分别加入各种植物生长调节剂，加水至800ml。加 热使琼脂溶解，定容至1000ml，用10NaOH调节 pH至5.65.8。,培养基的灭菌,将配好的培养基迅速分装至50ml三角瓶中，用 棉花塞好，用牛皮纸或报纸包扎。放入高压灭菌锅 中，121、灭菌20min。,植物材料的消毒,选取野生虎杖材料，用水洗净，用70酒精浸泡15-30s，然后放入0.1的升汞溶液中浸泡20min，进行材料消毒，然后用无菌水反复冲洗多次。,接种,将消毒好的外植体材料在超净工作台中用镊子接 种于已灭菌的培养基中，光照下进行培养。,【注意事项】,1、实验所使用的器材要严格灭菌，注意无菌操作，避免因 染菌导致实验失败； 2、配制贮存母液时，要计算好各种成分扩大倍数后逐次加入，在第一种成分完全溶解后再加入第二种成分，切忌“一锅煮”。有机成分配好后要装入棕色瓶中在冰箱内保存，其它三种母液可在常温下保存，但最多不能超过一个月； 3、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值； 4、材料消毒时不要在酒精中停留过长时间； 5、接种后进行培养时，为确保实验成功，可以首先进行7- 10d的暗培养，然后再进
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