HIV初筛实验室工作制度及操作规范.doc

HIV快速检测实验室操作规范及工作制度一、抽血标准操作规程 1、适 用 范 围 需做血液检测的对象。 2、试 剂 与 材 料 碘酒 、酒精棉 、棉签 、橡皮止血带 、注射器 （一次性采血器）、试管 、止血棉。 3、操 作 步 骤 3.1 核对被检者姓名并标价试管； 3.2 请被检者入座，伸出手臂放在采血垫上； 3.3 用橡皮止血带扎紧并请被检者握紧拳头； 3.4 选择静脉，用碘酒棉在采血部位由里向外擦拭（直径约6cm左右）消毒； 3.5 用酒精棉脱碘； 3.6 把一次性注射器（一次性采血器）打开，在采血部位穿刺静脉，抽取血液； 3.7 放松橡皮止血带，拔出针头，同时请被检者用止血棉压迫止血。 二、酒精棉球的制备1. 试剂与材料 无水乙醇（分析纯） 、消毒蒸馏水若干 、消毒量筒（1000ml） 、消毒盛器2. 操作步骤2.1 把消毒棉放入消毒盛器中待用。2.2 取165ml消毒蒸馏水到入消毒好的量筒中，再加入一瓶500ml无水乙醇充分混匀。2.3 把配好的75酒精到入放有消毒棉的盛器中 三、样品的采集和处理 1 .范围 本章规定了用于艾滋病病毒（HIV）检测的血清、浆和全血样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定和HIV分离培养。2 .操作步骤2 .1样品的采集和处理 艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下：2.1.1血清样品采集和处理2.1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置12小时，待血液凝固、血块收缩后再用3、000r/min离心15min，吸出血请备用。2.1.1.2如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。2.1.2抗凝血样品采集和处理2.1.2.1用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽去静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 2.1.2.2应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或柠檬酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。2.1.2.3用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在48h内分离PBMC和血浆，否则应在2448h内分离血浆和血细胞。(病毒载量测定不同方法对样品的要求见第四章4.1中表2；CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品采集要求见第五章4.1。)2.1.3 采集样品注意事项2.1.3.1采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒有特殊要求）。2.1.3.2采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作，应带双层手套。2.2样品的保存2.2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20度以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8度。2.2.2用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80度。2.2.3 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。2.3样品的运送2.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。2.3.2应采用WHO提出的三级包装系统2.3.2.1 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。2.3.2.2 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。2.3.2.3 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。2.3.3血清和血浆样品应在28度条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下1823度运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。2.3.4运送感染性材料必须有记录。2.3.5如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20度以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。2.3.6特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。2.4 样品的接收2.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。2.4.2核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。2.4.3检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。2.4.4打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。2.4.5因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。2.4.6 接受样品时应填写样品接受单。 四、电 热 恒 温 水 浴 箱 操 作 规 程1.概 述： 本电热恒温水浴箱主要用于科研单位、医疗单位及化验所检查化验病理血清等用。2.技术性能： 工作环境：常温常压条件下正常工作。 技术指标：温度调节范围：3765 温度波动： 1 温度均匀性： 13.使用方法：3.1使用是必须加入温水，可缩短加热时间和节约用电。3.2打开电源开关，电源指示灯亮表示电源接通。3.3旋转恒温控制器旋钮，加热指示灯亮表示电源接通，当温度表上的温度达到所需使用的温度时，将恒温控制器的旋钮调整在恒温指示灯忽亮忽熄点，待数分钟后即能自动恒温控制。3.4恒温控制器的刻度，仅可作温度对照指示，并非温度指示刻度。4. 点检程序：4.1 为保证水浴箱温度的 准确性必须每日使用温度计测量水浴箱内水温，并做好日温度记录。4.2每半年由设备科检测校正一次，且附有原始记录。5. 注意事项：5.1箱外壳必须有效接地。5.2在未加水前，切勿开电源，以防止电热管内的电热丝烧坏。5.3非必要时，请勿拆开右册盖板，以利安全。 五、生物安全防护实验室操作规程 (一)、 适用范围： 生物安全防护实验室分为 四个等级（本文涉及一、二级），上一级实验室操作规程除了必须遵守 一级实验室的所有操作规程外还必须遵守本级所特有的操作规程。(二)、 操作步骤：一级生物安全防护要点 1、 常规微生物安全操作要点 1） 禁止非工作人员进入实验室，参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。 2） 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套离开实验室前要洗手。 3） 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼睛、化妆及储存食物。 4） 用移液器吸取液体，禁止口吸。 5） 应制定尖锐器具的安全操作规程。 6） 按照实验室安全操作规程操作，以降低溅出和汽溶胶的产生。 7） 每天工作前后至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要及时消毒。 8） 所有培养物、储存物及规定的废弃物在运出实验室之前必须进行消毒，如高压消毒。需运出实验室灭活的物品必须放在 专用密闭容器内。 9） 制定有效的防鼠防虫措施。 2、特殊的安全操作规程 无特殊的安全操作规程 二级生物安全防护实验室 1、常规微生物安全操作要点 与一级生物安全防护实验室（一）相同。 2、特殊的安全操作规程 1） 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。 2） 实验室主任有权决定进入实验室工作人员的名单，并负有最终责任。进入实验室的工作人员应了解潜在风险并符合进入实验室的特殊要求（如，经过免疫接种）。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室内工作。 3） 实验室入口必须贴上国际通用的生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、需要的免疫、负责姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。 4）工作人员应接受必须的免疫接种和相应的抗体检测（如乙型肝炎疫苗、卡介苗等）。 5）收集保留从事危险性工作人员的基础血清并定期检测，如有问题及时处理。 六、移液器的使用与校准的标准操作程序 一、移液器是生物实验室常用工具，它以使用方便、安全性好的性能适宜于各种实验，保养好移液器是 保证实验准确、可靠的重要条件。因此特制定此标准操作程序： (一)、移液器的体积类别：可分为5种 0.510.0 l（分刻度为0.1 l） 540 l（分刻度为0.5 l） 40200 l（分刻度为1.0 l） 2001000 l（分刻度为5.0 l） 15 m l （分刻度为50 l） (二)、移液器的使用方法 首先应选择或按说明书要求调节好所需要的体积，装上配套的加样头，以下所有操作都必须将移液器保持垂直状态。 1、 前进法 （！）将移液器按钮压到第一定点位置。 （2）将移液器加样头插到所需要移液样品液面下23mm，慢慢松开。 （3）将加样头伸入需要样品的容器，尽量将按钮推至最后档。 （4）松开按钮，回到起点，退掉加样头。 2、倒退法 本方法适用于高黏度或易起泡沫的样品加样，也推荐用于极小量液体的加样。 （1）将按钮下压至第二定点位置。 （2）将移液器的加样头插入所需要移液样品液面下23mm，慢慢松开吸入液体。 （3）将加样头伸入需要样品的容器，贴在容器内壁，轻轻压下操作按钮至第一定点位置，待加样头中液体流净后，撤出移液器。 （4）遗留在加样头内的液体可随头子弃去。 3、 重复操作法 可快速、简单地重复进行相同样品，相同体积的加样动作： （1）前面的3个步骤和倒退法的前3个步骤完全相同，完成第一次加样动作。 （2）此时，移液器的按钮保持在第一定点位置，重复第2、3步骤。 4、全血加样：由于全血很粘稠 （1）按前进法的第1和第2步操作，取出所需血样。 （2）将移液器加样头伸入含有稀释液的试管内。 （3）用稀释液反复数次，直到加样头内液体清晰。七、酶标仪洗板机的使用维护和校准 设立常用仪器的维护及校准制度，以保证仪器正常运行。 1、每天 核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏夜现象。 2、每周 清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。 3、每月 检查洗涤时各孔是否有相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。 4、每年 检查清洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换，根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。 实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要部件。每天实验后，做好使用记录。八、废弃物处理标准程序 为了避免实验室污染，HIV抗体实验室所废弃物品必须按特定程序进行清洁和消毒。 (一)、HIV抗体实验室所废弃的物品 1、使用过的一次性注射器； 2、使用过的一次性试管； 3、使用过的一次性隔离服、口罩、帽子、乳胶手套、塑料手套； 4、使用过的一次性加样头； 5、实验过程所用过的滤纸、棉球及实验用的塑料制品（如加样反应板等固体物质）； 6、实验过程所废弃的液体（血清、全血及尿液等）。 (二)、废弃物的处理原则： 1、所有液体（血清、尿液、反应液等）必须消毒。 2、所有废弃的固体物质，必须消毒后焚烧。对上述污染或可能造成污染的材料，在带出HIV抗体实验室前应进行消毒后弃掉或焚烧。 (三)、废弃物的消毒： 1、弃物缸内要装有10%（V/V）次氯酸钠，（含10.000ppm有效氯）对废弃的固体物进行浸泡消毒。 2、生物安全柜、超净台、实验台等台面和仪器表面要用70%乙醇、4%甲醛水溶液或过氧乙酸等擦拭消毒。 3、溢出物用10%次氯酸钠浸泡、擦拭。 4、HIV抗体实验室每次做完试验后，紫外线灯消毒1520分钟。 5、实验废弃的固体物质，经消毒后装于塑料袋或防漏器中。 6、实验室废弃液体样品（尿液、唾液、血清、血浆）100ml加漂白粉5g或二氯异氰尿酸钠2g，1%次氯酸钠溶液，作用6h-24h或煮沸100C20分钟后弃入下水。 (四)、HIV抗体检测实验室必备药品与试剂： 1、次氯酸钠 2、过氧乙酸 3、医用酒精 4、碘氟 5、其它氯制剂 6、紫外线 7、废弃物储存、运输及消毒灭菌防漏的容器。九、HIV抗体检测操作及报告撰写注意事项1、收到样品时应该对样品标记送检单中的内容是否一致，尤其是编号并及时冷藏，登记科内的标本登记薄；2、实验前将所有试剂从冰箱中取出，登记室内温度、湿度，恒温培养箱及冰箱温度，清空洗板机废液瓶，准备需要的移液器与移液头，排列所需要检测的样品；3、实验过程中严格按照试剂说明书操作；4、实验结束后及时处理废弃物；5、做好实验原始记录（包括日期，样品编号，实验结果，试剂名称、批号、有效期、温湿度，冰箱、培养箱温度，仪器设备型号、仪器使用记录等）；6、核对实验结果，撰写报告，测试人，复核人，编制（主检）人，校核人栏里签名，检品卡上部门负责人栏里签名，送收样室打印；7、取回报告，校对，在检品卡校对栏中签字（1人）；8、再送收样事打印三份正式报告，取回三级签发编制（主检）审核 ，批准栏签名，日期一致，复印送检化验单；9、装订：9.1 一份质管科存档：委托单，检品卡，原始的样品检测原始记录，原始的检验报告底稿，检验报告；9.2一份发送送检单位：化验单复印件和检验报告；9.3一份科室存档：化验单复印件和检验报告； 三份报告送收样室盖章；10、登记报告编号存档；11、客户取报告并签收。十、艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度实验室为防止阳性材料造成的可能性污染，制定以下消毒制度，请以认真执行。 1、检测可疑样品时，充分准备好废弃物消毒具及消毒药、液如：次氯酸钠含有效氯20005000mg/L，75%乙醇和2%戊二醛。 2、实验室用的吸头及时打入消毒器皿中。 3、一次性手套，隔离服更换后，应丢弃在一次性垃圾袋内。 4、常用消毒方法 4、1物理消毒方法 4、1、1高压蒸汽消毒，121C，保持1520min； 4、1、2干燥空气烘箱消毒（干烤法），140C，保持23h。 4、2化学消毒方法 4、2、1废弃物缸：5000mg/L次氯酸钠 4、2、2工作台面及仪器表面：75%乙醇 4、2、3溢出物：5000mg/L次氯酸钠 4、2、4污染的台面和器具：2000mg/L次氯酸钠也可用过氧化氢或过氧化乙酸，器械可用2%戊二醛消毒 5、实验室中发生可疑样品溢出时，应及时用消毒剂浸泡的吸水物质覆盖，10-15分钟，用消毒剂清洗该地方。 6、全部实验工作结束后，应对实验台、仪器、设备（接触部位）地面进行彻底消毒处理。 7、废弃物处理 从HIV实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品，培养物和其他物品，均应视为感染性废弃物，处理应符合实验室生物安全通用要求（GB194892004）和消毒技术规范（2002年版）十一、艾滋病筛查实验室资料保密制度为确保实验室所有资料严格保密，应遵守以下制度：1、与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料均应严格保密，包括送检单与检测记录的保管，报告单的发放和工作人员年度采血检测等。2、HIV 初筛实验室所有人员应具有高度的保密意识，严格遵守国家规定的保密制度的各项要求。3、工作人员不得向无关人员提供检验结果，要妥善保存各种实验记录。4、对初筛疑似阳性感染者不能告诉受检者本人，更不能到处乱讲。5、对初筛证实的阳性结果要以机密程序上报主管领导机构，并对本人做好保密教育。6、初筛实验室的有关检验资料，档案、结果记录其他人不得翻录查阅，修改和销毁。7、实验室工作人员，不能在非正式场合对外提供任何结果、数据。8、保密制度纳入年度考核，发现问题及时处理，并根据情况修订保密制度。 十二、艾滋病筛查实验室安全防护制度为确保实验室人员的工作安全，防止交叉感染，请严格遵守安全防护制度1、工作人员要完成与工作有关的充足有效的技术培训，要了解HIV危害，提高全员安全意识，实验室安全负责人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。2、实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度。3、对有放试剂、样品血清的冰箱应上锁，专人管理。 4、实验人员应熟练掌握操作知识和消毒技术。5、进入实验室应穿隔离衣，戴手套，传染性危险大时应戴双层手套，戴防护镜，口罩，如防护用具破损应及时更换，不用戴手套的手触摸暴露的皮肤等部位。 6、实验期间尽量避免使用利器，易碎器皿，禁止采用口腔吸液管。 7、送检样品应视为有潜在传染性，由专人接管，登记，存放，提取。 8、对带入和带出实验室的物品都应进行检查，包裹必须在下列情况下打开；人员在处理感染源方面受过训练；具有处理感染源设备的实验室；穿防护服的工作人员；用后置可消毒的容器。 9、实验用吸头、手套、隔离服、污染物、废弃物均放在指定垃圾袋中统一进行消毒，焚烧到无害化处理。 10、不得在实验室中吃食物，化妆打扮等，不得在实验室会客。 11、实验室用品（包括工作服）不得用于其他用途，不可将私人和无关的物品带入实验室。 12、工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作服，用肥皂和流动水洗手，洗手后离开实验室。 13、实验结束后，要对工作平台、仪器、地面进行消毒处理。 14、遇有意外事故，应立即口头和书面报告上级部门，并进行局部处理，如含氯消毒剂浸泡伤口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除进行局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括对其随访，HIV检测，休息并暂离岗位二个月，按医嘱服用HIV药物等。十三、HIV实验室进入情况登记表18HIV实验室进入情况登记表姓 名事 由进入时间离开时间批准人备注 2011年大番坡镇卫生院检验科艾滋病/HIV初筛实验室年度工作总结为促进艾滋病筛查实验室规范化管理，提高实验室检测技术水平， 根据HIV筛查实验室的各项