课件：革兰阳性球菌ppt课件.ppt

第八章 病 原 性 球 菌,李迎丽,2019,-,1,球菌（coccus）： 指个体形状呈球形或椭圆形的一大类细菌。 病原性球菌（pathogenic coccus）： 球菌中对人类有致病性的球菌。,2019,-,2,革兰 阳性 球菌,葡萄球菌属,链球菌属,肺炎链球菌,革兰 阴性 球菌,脑膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌,2019,-,3,第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus),分类,生物学特性,细菌学检验,细菌鉴别,4,1,2,3,5,流行病学与防治原则,革兰阳性球菌,2019,-,4,(1)根据色素生化反应,金黄色 葡萄球菌,表皮 葡萄球菌,腐生 葡萄球菌,1.1 分类,(2)根据凝固酶的有无,凝固酶阳性 菌株,凝固酶阴性 菌株,金黄色葡萄球菌,多为 致病菌,偶尔致病,一般不致病,2019,-,5,(3)根据核酸分析的遗传学分型： DNA脉冲电泳分型、PCR分型等方法。 依16S rRNA不同，葡萄球菌属分48个种和亚种。 (4)根据噬菌体分型：分为4个噬菌体群，23个噬菌体型。,2019,-,6,1.2 生 物 学 特 性 -形态染色,葡萄球菌属模式种：金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureas）,革兰染色阳性,电镜照片,球形，呈葡萄状排列，无鞭毛，无芽孢,2019,-,7,1.2 生 物 学 特 性 -培养特点,1.营养要求不高 2.需氧或兼性厌氧 3.最适生长温度28-38 4.某些菌株耐盐(含10-15%NaCl培养基 ),致病菌37 ,普通培养基即可生长，血平板生长更好,2019,-,8,1.2 生 物 学 特 性 -菌落观察,在普通琼脂平板上，35孵育18-20h后三种葡萄球菌均形成中等大小、圆形凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明菌落，并可产生不同的脂溶性色素，使菌落呈现不同的颜色，如金黄色葡萄球菌呈金黄色、表皮葡萄球菌大多呈白色、腐生葡萄球菌大多呈柠檬色。 在血琼脂平板上，三种葡萄球菌的菌落特点与它们在普通琼脂平板上的菌落相同，但金黄色葡萄球菌菌落周围有完全溶血环(溶血)，而腐生葡萄球菌和大多数表皮葡萄球菌菌落周围无溶血环。,2019,-,9,金黄色葡萄球菌（黄色菌落） 与表皮葡萄球菌（白色菌落）,血平板上葡萄球菌菌落,2019,-,10,1.2 生 物 学 特 性 -特别之处,葡萄球菌分布最广泛； 是最容易发生耐药性变异（对青霉素耐药株高达90%以上；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌之一）； 是无芽孢菌中抵抗力最强； 是最常见的化脓性感染病原菌。,2019,-,11,1.2 生 物 学 特 性 -生化反应,触酶试验阳性。 多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，致病株分解甘露醇。 金黄色葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性。 金葡菌血浆凝固酶阳性。,2019,-,12,1.2 生 物 学 特 性 -抗原构造,2019,-,13,A 葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A，SPA),存在于细胞壁的一种表面蛋白，为完全抗原，具属特异性。 90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。 本质为单链多肽，与肽聚糖形成共价键结合，SPA可与IgG1、IgG2、IgG4分子的Fc段发生非特异性结合，IgG的Fab段与特异性抗原结合，可用于协同凝集试验(coagglutination)用于抗原检测。 SPA与IgG结合后复合物具有抗吞噬，促细胞分裂，超敏反应等多种生物学活性。,2019,-,14,B 多糖抗原 具有群特异性，是存在于细胞壁上的一种半抗原。 分为A型、B型和C型三种。 C 荚膜多糖 有利于细菌粘附。,2019,-,15,1.2 生 物 学 特 性 -致病性 -致病物质,致病物质,凝固酶,杀白细胞素,肠毒素,表皮剥脱毒素,毒性休克 综合征毒素-1,葡萄球菌溶血素,毒素,酶类,超抗原,葡激酶,耐热核酸酶,分子量22-66KD的蛋白质，除具有毒性作用外，还有与免疫抑制和自身免疫疾病有关的多种生物学意义。,透明质酸酶,脂酶,触酶,2019,-,16,（1）葡萄球菌溶血素(staphyloysin),金黄色葡萄球菌产生4种溶血素，分别称为、和。 除对多种哺乳动物红细胞有溶血作用外，对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌等均有毒性作用，可引起组织坏死。 其作用机制可能是毒素分子插入细胞膜疏水区，从而破坏膜完整性造成细胞溶解。,2019,-,17,（2）杀白细胞素(leukocidin),杀白细胞素由大多数致病性葡萄球菌产生，又称Panton-Valentine(PV)杀白细胞素。 能杀伤人和动物的中性粒细胞和巨噬细胞。 其机制是改变细胞膜的结构，使细胞对阳离子的通透性增加，最终导致细胞死亡。 PV杀白细胞素的抗吞噬能力，增强了细菌的侵袭力。,2019,-,18,（3）肠毒素(enterotoxin),金葡菌：1/3 的临床分离株产生；由噬菌体群金黄色葡萄球菌产生蛋白质;有A、B、C、D、E 5种型别。 特点：热稳定，于l00加热30 min不被破坏。能抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用。 刺激呕吐中枢导致以呕吐为主要症状的食物中毒。 近来研究发现，葡萄球菌肠毒素是超抗原，与普通抗原相比，可激活更多的T细胞，释放过量的细胞因子(如TNF，IL-I，IFN-)而致病。,2019,-,19,（4）表皮剥脱毒素 (exfoliative toxin, exfoliatin),由噬菌体群金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质； 引起烫伤样皮肤综合征(staphylococcal scalded skin syndrome, SSSS)又称剥脱性皮炎； 多见于新生儿、幼儿和免疫功能下的成人。,2019,-,20,（5）毒性休克综合征毒素-1 (toxic shock syndrome toxin 1, TSST-1),由噬菌体群金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质。 引起机体发热，增加对内毒素的敏感性。 可引起多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征（TSS）。,2019,-,21,1.2 生 物 学 特 性 -致病物质 -酶类,凝固酶：血浆纤维蛋白原转为纤维蛋白，使血浆凝固。 耐热核酸酶：水解DNA。 纤维蛋白溶酶：水解纤维素（纤维蛋白溶酶、葡激酶）。 透明质酸酶：降解结缔组织（扩散因子）。 脂酶：分解脂肪。 触酶：分解H2O2。,2019,-,22,凝固酶（coagulase）,概念：使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类，分为结合凝固酶和游离凝固酶。 致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶。作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变为凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。 意义：鉴别有无致病性的重要指标。 致病机理：抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏；使感染局限化和形成血栓。,2019,-,23,1.2 生 物 学 特 性 -致病性 -所致疾病,所致疾病,化脓性感染,毒素性疾病,食物中毒,假膜性肠炎,烫伤样皮肤综合症,毒性休克综合症,化脓性感染：疮、痈,败血症,2019,-,24,葡萄球菌引起的食物中毒,葡萄球菌食物中毒，是由葡萄球菌在繁殖过程中分泌到菌细胞外的肠毒素引起，故仅摄入葡萄球菌并不会发生中毒。 引起中毒的食品：国内报道以奶及其制品如奶油糕点（奶油花蛋糕等）、冰淇淋最为常见。 传播途径：带菌的食品加工人员的鼻咽部黏膜或手指污染食物是造成食源性疾病的主要原因。 中毒的原因主要是在较高温度下保存时间过长，如在25-30环境中放置5-l0h，产生足以引起中毒的大量肠毒素所致。,2019,-,25,葡萄球菌引起的食物中毒-中毒特点,引起葡萄球菌肠毒素中毒的食品必须具以下条件： （1）食物中污染大量产肠毒素的葡萄球菌。 （2）污染后的食品放置于适合产毒的温度下。 （3）有足够的潜伏期。 （4）食物的成分和性质适于细菌生长繁殖和产毒。,2019,-,26,产毒条件： （1）pH 68，温度在20以上。 （2）含水分、淀粉、蛋白质丰富的食品。 （3）实验室在10%CO2，半固体培养基培养易产生肠毒素。 （4）细菌在生长对数期毒素合成活跃。,2019,-,27,葡萄球菌引起的食物中毒-流行特点及临床症状,流行特点：多见于夏秋季节。 潜伏期：一般24小时，最短1小时，最长为6小时。 临床症状：主要症状为恶心、剧烈而频繁呕吐，吐物中常有胆汁、粘液和血，同时伴有上腹部剧烈地疼痛。腹泻为水样便。体温一般正常。,2019,-,28,1.2 生 物 学 特 性 -免疫性,人对金黄色葡萄球菌有一定的天然免疫力。当皮肤粘膜发生损伤或机体免疫力降低时才易引起感染。病后能获得一定的免疫力，但作用不强，一般认为不足以预防再次感染。,2019,-,29,凝固酶阴性葡萄球菌，(coagulase-negative staphylococci，CNS）,存在于健康人的皮肤、口腔及肠道中，因其不产生血浆凝固酶、-溶血毒素等毒性物质，原以为无致病作用。当机体免疫功能低下或细菌进入非正常寄居部位时，CNS可引起多种感染，各类感染中仅次于大肠埃希菌，居病原菌的第2位，造成诊治困难，引起临床微生物学工作者关注。,2019,-,30,CNS是医院感染的重要病原菌，是引起创伤、尿道、中枢神经系统和血管感染的常见病原菌，泌尿系感染、细菌性心内膜炎、败血症、术后及植入医用器械引起的感染。 而且耐药菌株日益增多，比金黄色葡萄球菌更高。,CNS引起的常见疾病,泌尿系感染,败血症,术后感染,2019,-,31,目前已发现的CNS有： 表皮葡萄球菌(S. epidermidis)、腐生葡萄球菌(Ssaprophyticus)、人葡萄球菌(S. huminis)、溶血葡萄球菌(S. hemolyticus)、头葡萄球菌(S. capitis)、华纳葡萄球菌(S. warneri)、模仿葡萄球菌(S. simulans)、木糖葡萄球菌(S. xylosus)、猿类葡萄球菌(S. simians)等十余种。 从感染标本中分离最多的CNS是表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。,2019,-,32,三种葡萄球菌鉴别的主要性状,2019,-,33,金黄色葡萄球菌的鉴别要点,金黄色色素 溶血 凝固酶阳性 耐热核酸酶阳性 分解甘露醇 SPA,2019,-,34,1.3 细 菌 学 检 验,2019,-,35,1.3.1 标本采集,临床标本,食物中毒标本,一般食物标本,标本采集,脓汁，血液，脑脊液，渗出液，穿刺液，咽拭子,剩余食物，涂抹物，分泌物，呕吐物,具有代表性的样品25g,2019,-,36,脓汁、咽拭,渗出物、脑脊液,血液,增菌培养,分离培养（血平板）,取可疑菌落（性状、色素、溶血）,纯培养,报告,直接 涂片染色,初步印象,分离培养 （高盐甘露醇平板）,分解 甘露醇,涂片染色,血浆凝固酶 试验,耐热核酸酶 试验,其他 鉴定试验,1.3.2 检测程序,2019,-,37,1.3.3 检查方法-直接涂片检查,直接涂片检查-可作初步报告,2019,-,38,1.3.3 检查方法-培养,（1）增菌培养脑脊液、血液等标本接种增菌培养基增菌。 7.5%NaCl肉汤，胰酪大豆肉汤 （2）分离培养： 普通平板、血平板、Baird-Parker平板、高盐甘露醇平板、卵磷脂高盐平板等。 35-37，18-24h培养，形成小菌落，48h形成典型菌落：圆形、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐。金黄色葡萄球菌分解甘露醇，耐高盐，菌落淡黄色；又因该菌产生卵磷脂酶，在卵黄琼脂培养基上菌落周围有乳白色沉淀。高盐甘露醇平板、卵磷脂高盐平板可抑制粪便、呕吐物等标本中杂菌的作用。,2019,-,39,葡萄球菌（革兰染色1000）,2019,-,40,普通平板上金黄色葡萄球菌的菌落,2019,-,41,腐生葡萄球菌大多呈柠檬色（左），表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色（右），不溶血。,2019,-,42,血平板上金黄色葡萄球菌菌落,宽大透明溶血环（溶血）,2019,-,43,Baird-Parker平板,主要成分：丙酮酸钠、甘氨酸、氯化锂、亚碲酸钾、卵黄乳液。 原理： l.氯化锂和亚碲酸钾可以抑制绝大多数细菌的生长。 2.丙酮酸钠可以修复受损细胞。 3. 金葡能还原碲，使菌落呈灰黑色。 4.大部分金葡能产生卵磷脂酶，分解卵黄乳液使其菌 落周围形成白色沉淀环。,2019,-,44,金黄色葡萄球菌在BairdParker 平板上的典型菌落。,2019,-,45,Baird-Parker琼脂+兔血浆 (Baird Parker agar+RPF),2019,-,46,灰绿色菌落为金葡球菌,金葡球菌鉴定培养基 S. aureus ID,金黄色葡萄球菌,2019,-,47,法国科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基（CHROMagar Staph aureus）： 金黄色葡萄球菌：紫色； 其他：蓝色、无色。,2019,-,48,1.3.3 检查方法-鉴定试验,（1）血浆凝固酶试验 原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性纤维蛋白变为不溶性纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。 被广泛用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌，常作为鉴定葡萄球菌致病性的主要依据之一。金黄色葡萄球菌的凝固酶阳性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的凝固酶阴性。,2019,-,49,玻片法：取未稀释的新鲜兔血浆和生理盐水各1滴分别滴加于载玻片上，挑取待检葡萄球菌菌落少许，分别与生理盐水和血浆混合，立即观察结果，此法测结合型凝固酶。 试管法：取3支1010mm试管，各加入0.5ml 1:4稀释的新鲜兔血浆，在其中1支试管中加3-5个待检菌落，充分研磨混匀，另2支试管中分别加凝固酶阳性株和阴性株作对照，37C水浴3-4h，观察结果。此法用于测定游离型凝固酶。,2019,-,50,结果判断、解释和报告： 玻片法：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性；反之，细菌在血浆中呈均匀混浊则为阴性。 试管法：细菌使试管内血浆凝固呈胶冻状，为血浆凝固酶试验阳性；反之，试管内血浆不凝固仍流动的，则为阴性。,2019,-,51,血浆凝固酶试验,试验所用的血浆为EDTA抗凝兔血浆。,2019,-,52,左：测定管(阴性)， 右：标准金葡菌株(阳性),2019,-,53,1.3.3 检查方法-鉴定试验,（2）甘露醇发酵试验 原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，使培养基由紫色变为黄色。 方法：将三种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管，35C，1824h 观察结果。 结果判断、解释和报告：培养基呈混浊、由紫色变为黄色为甘露醇发酵试验阳性，仍为紫色者为阴性。金黄色葡萄球菌甘露醇发酵试验为阳性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌为阴性。,2019,-,54,1.3.3 检查方法-鉴定试验,（3）触酶试验 原理：葡萄球菌产生的触酶，能将对细菌有害的H2O2分解成无害的水和氧气。 方法：用接种环挑取普通琼脂平板上的葡萄球菌，置于洁净玻片上，滴加3% H2O2溶液1-2滴，观察结果。 结果判断、解释和报告：半分钟内产生大量气泡，为触酶试验阳性，而不产生气泡者为阴性。本试验用于鉴别葡萄球菌和链球菌，前者为阳性，后者为阴性。,2019,-,55,1.3.3 检查方法-鉴定试验,（4）新生霉素敏感试验 原理：表皮葡萄球菌对新生霉素敏感，而腐生葡萄球菌则对新生霉素耐药。故该试验可用于表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的鉴别。 方法：取待检菌均匀涂布于血琼脂平板上，再贴上含5pg/片的新生霉素纸片，35孵育1620h，观察抑菌圈大小。试验时应以金黄色葡萄球菌ATCC 25923作为阳性对照，以确认纸片是否失效。 结果判断、解释和报告：抑菌圈直径16mm为耐药，16mm为敏感。此试验是用于鉴别表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌，前者敏感(S)，后者耐药(R) 。,2019,-,56,1.3.3 检查方法-鉴定试验,（5）肠毒素检测-动物试验 是测定食物中肠毒素较早采用的一种方法。 方法：标本（呕吐物、粪便、残余食物）接种高盐肉汤，37，24h，分离纯种，培养48h后，肉汤煮沸30min，离心，取上清液2ml注入体重500g左右的幼猫静脉或腹腔。 结果判断：4h内观察幼猫是否有呕吐、腹泻、体温升高、或死亡现象，提示有肠毒素存在的可能。,2019,-,57,肠毒素检测-免疫学方法 主要有免疫扩散法、反向间接凝血试验(RPHA)、反向被动乳胶凝集试验(RPLA)、放射免疫法(RIA)、荧光免疫技术、酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹法(immuunoblotting)。 肠毒素检测-聚合酶链反应、生物传感技术,2019,-,58,双向琼脂扩散法：,肠毒素抗血清,肠毒素提取液,2019,-,59,1.4 细 菌 鉴 别,2019,-,60,1.4.1 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别,2019,-,61,1.4.2 致病性葡萄球菌的鉴定依据,1. 产生脂溶性金黄色色素 2. 血平板上菌落周围产生透明溶血环 3. 发酵甘露醇 4. 血浆凝固酶阳性 5. 耐热核酸酶阳性 6. 涂片镜检为革兰阳性葡萄状排列的球菌 7. G+Cmol%为30mol %38mol %,2019,-,62,1.4.3 注意事项,1. 污染的脓汁及粪便标本应接种高盐甘露醇琼脂平板，取分解甘露醇呈淡黄色的菌落进行鉴定。 2. 如为脑脊液或深部闭合性伤口标本，当常规培养阴性时，应考虑厌氧培养。 3. 药物治疗后，金黄色葡萄球菌易产生耐药性变异，同时也可出现生化反应、菌落特征、致病力、色素、溶血性等的变异。 4. 注意与粪链球菌及小球菌科其他菌的鉴别。,2019,-,63,1.5 防治原则,治,抗菌素 药敏试验,自身菌苗 疗法,防,注意 消毒隔离,防止医源 性感染,防止耐药 性产生,注意 个人卫生,2019,-,64,第二节 链球菌属,2019,-,65,2.1 分类,链球菌属（Streptococcus）：仅次于葡萄球菌的另一大类化脓性感染病原菌。模式种为化脓性溶血性链球菌。 根据在血平板上溶血状况分为： （1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm的草绿色溶血环，因此亦称为草绿色链球菌，多为条件致病菌。 （2）乙型溶血性链球菌：菌落周围有2-4mm的完全透明的溶血环，亦称为溶血性链球菌。在链球菌中该型致病性最强，常引起人和动物的多种疾病。 （3）丙型链球菌：菌落周围无溶血环，亦称不溶血性链球菌。一般不致病，常存在于乳类及动物的粪便中。,2019,-,66,根据抗原构造分为A、B、C、D、E等，共20群。 对人有致病性菌株90%属于A群。 根据对氧的需要分为需氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌，前两者对人有致病性，后者在特定条件下可引起人的疾病。,2019,-,67,2.2 生物学特性-形态染色,链球菌固体培养物的镜下形态（革兰染色） 革兰阳性球菌，成双或短链排列。,2019,-,68,链球菌在肉汤培养基中的镜下形态（革兰染色） 链球菌在含有血液、血清的肉汤培养基中呈链状排列,2019,-,69,2.2 生物学特性-培养,营养要求较高，必须在含有血液、血清、葡萄糖、腹水的培养基中才能较好的生长。 最适生长温度37，最适pH7.4-7.6。 血清肉汤培养基中易形成长链，试管底部出现絮状沉淀。 在血平板上形成灰白色、光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的菌落，根据溶血现象分为甲、乙、丙三型。,2019,-,70,（甲）溶血性链球菌菌落周围有狭窄的草绿色溶血环,2019,-,71,（乙）溶血性链球菌菌落周围有明显宽广的完全透明环,2019,-,72,（丙）溶血性链球菌菌落周围无溶血环,2019,-,73,2.2 生物学特性-生化反应,分解葡萄糖产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖的分解，因菌株而异。不被胆汁溶解，不分解菊糖和明胶。 97%A群链球菌可被1U/ml的杆菌肽抑制，其他链球菌一般不被抑制。,2019,-,74,2.2 生物学特性-抵抗力,一般链球菌55可被杀死， 对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、磺胺药都很敏感；特别对青霉素，极少有耐药菌株。,2019,-,75,2.2 生物学特性-致病性 -致病物质,（1）细胞壁成分： 脂磷壁酸（LTA）、纤维粘连蛋白，是决定细菌能否造成感染的第一步。 M蛋白、肽聚糖，除能直接发挥抗吞噬和增强在体内的生存能力之外，还可产生对组织、器官、细胞的直接损伤。,2019,-,76,（2）外毒素： 致热外毒素（红疹毒素）：对兔有致热性和致死性，对培养的脾细胞和巨噬细胞有毒性作用，有免疫抑制作用。球菌溶血素：溶解红细胞、杀死白细胞、侵犯心肌。分为O、S、D及细胞内溶血素。溶血素O抗原性强，风湿病患者血清中抗链球菌溶血素O的抗体水平较高，测定溶血素O抗体可辅助诊断风湿性关节炎和急性肾小球肾炎。,2019,-,77,（3）侵袭性酶类： 透明质酸酶：分解间质透明质酸； 链激酶：使血浆蛋白酶原变成血浆蛋白酶，可溶解血块和阻止血浆凝固； 链道酶、脱氧核糖核酸酶等； 它们决定了链球菌所致化脓性感染的特点：易扩散，脓液稀薄，灰白色并混有血丝。,2019,-,78,2.3 细菌学检验,2019,-,79,脓汁,血液,脑脊液,渗出液,尿液,咽拭子,临床标本,标 本 采 集,风湿病患者血清,疫情标本,咽拭子,污染环境和衣物涂抹标本,食物标本,2019,-,80,链 球 菌检验程序,2019,-,81,2.4 检测方法,脓汁、咽拭、痰液和渗出物可直接涂片检查。 增菌培养接种肉浸液葡萄糖肉汤或匹克肉汤。 分离培养接种血平板做需氧和厌氧培养，观察菌落形态。,2019,-,82,2.4 检测方法,杆菌肽敏感试验：A群链球菌对0.04U杆菌肽敏感，可用作筛选试验。敏感者为A群链球菌，耐药者做胆汁-七叶苷试验（阳性为黑色反应），阳性者为B群链球菌，同时做CAMP试验也应为阳性；阴性者为A、B、C群以外的其他链球菌。 Optochin(奥普托欣)试验：抑菌环直径15mm为肺炎链球菌。,2019,-,83,CAMP试验：在血平板上先以产生-溶血的金黄色葡萄球菌菌株划线接种一横线，再将待鉴定的链球菌与之垂直接种，两线相距约1cm，将平皿放烛缸37 24h培养后观察结果。B群链球菌产生CAMP因子促进葡萄球菌-溶血，因而在两菌连接处显示增加溶血区为阳性。,CAMP试验阳性的链球菌,2019,-,84,链激酶试验：取草酸钠血浆0.2ml，用生理盐水稀释，再加入链球菌培养物0.5ml和0.25%氯化钙溶液0.25ml混合，放37水浴，观察血浆凝固。从血浆凝固起记录溶化时间，溶化时间越短，链激酶越多。 马尿酸钠水解试验：B群链球菌阳性，阳性产紫色或深紫色。,2019,-,85,2.5 细菌鉴别,链球菌属种的鉴别 鉴定依据 链球菌的鉴别 （1）在血平板上培养，观察菌落特征和溶血现象。 （2）做菊糖发酵试验、胆汁溶菌试验和Optochin试验。 报告,2019,-,86,第三节 肺炎链球菌,2019,-,87,3.1 分类,肺炎链球菌俗称肺炎双球菌。该菌广泛分布于自然界，主要寄生在人类上呼吸道，大多数人鼻咽炎腔中有本菌存在。 根据荚膜抗原不同，可分为84个血清型，多数菌株不致病，少部分强致病菌株，主要引起人类化脓性感染和大叶性肺炎。,2019,-,88,3.2 主要生物学特性-形态染色,革兰阳性，呈矛头状，成双或链状排列，有荚膜；在痰标本中大多数成双排列。,肺炎链球菌纯培养的镜下形态（革兰染色）,2019,-,89,3.2 主要生物学特性-培养,营养要求较高，需血清、葡萄糖生长较好。 兼性厌氧，在10% CO2环境中生长更好。 最适温度35-37。,2019,-,90,肺炎链球菌在血琼脂平板上形成细小、圆形、中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿