课件：中国药科大学细菌学.ppt

细菌学概论,王莹 微生物学教研室,2019,-,1,掌握： 细菌的概念，大小和基本形态。 细菌的基本结构、特殊结构。 细菌形态检查法。 细菌的营养和繁殖，营养物质的吸收。 细菌的人工培养。 熟悉： 细菌的化学组成、营养物质、营养类型，细菌的生长繁殖。 细菌的致病性及常见病原性细菌。（chap13） 放线菌概念。 了解： 细菌的不规则形态，细菌的物理性质，细菌的新陈代谢，细菌分类。 链霉菌属的生物学特性。,主要内容,2019,-,2,微生物的命名,国际命名法则双名法 1753年瑞典科学家林奈(Carl von Linne)提出，用两个拉丁文字连在一起，表示一个物种的学名 第一个拉丁词是属名，第一个字母大写 第二个拉丁词是种名加词，第一个字母小写 命名人的姓氏,枯草芽胞杆菌：Bacillus subtilis Cohn 苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种：Bacillus thuringiensis subsp. aizawai,2019,-,3,细胞生物的三原界,分类等级：界门纲目科属种,2019,-,4,原核微生物的类群,细菌（真细菌）,细菌的形态和大小,细菌细胞的构造,细菌的繁殖,细菌的新陈代谢,放线菌,放线菌的形态、大小和结构,放线菌的繁殖,放线菌的菌落,古生菌,蓝细菌,其它几种原核微生物,立克次体,衣原体,支原体,螺旋体,细菌的感染,细菌的营养物质运送方式,2019,-,5,第一节 细菌的形态和大小,2019,-,6,细菌（bacteria）,是一类具有细胞壁，以无性二分裂方式进行繁殖的原核细胞型微生物。,2019,-,7,使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测量,1. 细菌的大小,球菌：直径； 杆菌：宽 长 螺旋菌：宽 长,2019,-,8,细菌细胞的大小,2019,-,9,球状：球菌 杆状：杆菌 螺旋状：螺形菌,2. 细菌的形态,2019,-,10,2019,-,11,(1). 球菌(coccus）,菌体呈球形或近似球形,以典型的二均分裂方式繁殖,分裂后产生的新细胞常保持一定的空间排列方式.根据细胞分裂的方向及分裂后的各子细胞的空间排列状态不同,可将球菌分为以下几种: 单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等。,2019,-,12,2019,-,13,a.单球菌（single coccus) 分裂后的细胞分散而单独存在的球菌. 如尿素微球菌(Micrococcus ureae),2019,-,14,b.双球菌(Diplococcus) 分裂后两个球菌成对排列的为双球菌. 如肺炎双球菌 (Diplococcus pneumoniae),2019,-,15,c.链球菌(Streptococcus) 分裂是沿一个平面进行，分裂后细胞排列成链状. 如乳链球菌 （Streptococcus lactis）,2019,-,16,d.四联球菌 分裂是沿两个相垂直的平面进行，分裂，分裂后每四个细胞在一起呈田字形. 如四联微球菌 （Micrococcus tetragenus）,2019,-,17,e.八叠球菌 按三个互相垂直的平面进行分裂后，每八个球菌在一起成立方体形. 如藤黄八叠球菌 （Sarcina ureae),2019,-,18,f.葡萄球菌(staphylococcus) 分裂面不规则，多个球菌聚在一起，像一串串葡萄。 如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus),2019,-,19,(2). 杆菌（bacillus）,杆菌是细菌中种类最多的类型，因菌种不同，菌体细胞的长短、粗细等都有所差异。 短杆菌、长杆菌、棒杆菌、梭状、梭杆状、月亮状、分支状、竹节状等。,短杆菌,长杆菌,梭状芽胞杆菌,2019,-,20,一般情况下,同一种杆菌的宽度比较稳定,但它的长度经常随培养时间、培养条件的不同而有较大的变化。 杆菌举例： 大肠杆菌（Escherichia coli） 枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis） 北京棒杆菌（Corynebacteriun Pekinensis） 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）,2019,-,21,2019,-,22,Rod shape is called Bacillus. Two bacilli together - Diplobacilli Chains of bacilli are called Streptobacilli Palisades - Rods side by side or in X, V or Y figures,杆菌排列状态,2019,-,23,杆菌端部特征,2019,-,24,螺旋状的细菌称为螺旋菌。 根据其弯曲情况分为： 弧菌（vibrio)：螺旋不满一圈，菌体呈弧形或逗号形; 例：霍乱弧菌、逗号弧菌 螺旋菌(spirillum)：螺旋满26环，螺旋状; 例：干酪螺菌 螺旋体(spirochaeta)：旋转周数在6环以上，菌体柔软。 例：梅毒密螺旋体,(3). 螺旋菌（spirillum）,2019,-,25,螺旋菌,弧菌,螺旋体,2019,-,26,柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细菌、贝日阿托氏菌(丝状)、具有子实体的粘细菌等是特殊形态的细菌。,细菌特殊形态,2019,-,27,丝状的亮发菌,长有附属丝的红微菌,2019,-,28,第二节 细菌细胞的结构,基本结构 （所有细菌细胞 都具有） 特殊结构 （部分细菌细胞 所特有）,细胞壁 细胞膜 细胞质及内含物 核物质,荚膜 芽孢 鞭毛 菌毛,原生质体,2019,-,29,2019,-,30,1.细胞壁（cell wall）,除支原体外，所有原核生物都有细胞壁，是细胞膜外具有一定硬度和韧性的壁套。 (1)作用 维持菌体固有形态，对细胞起保护作用。 作为细胞内外物质交换的第一屏障。 能阻止胞外大分子物质或颗粒状物质的通过，而不妨碍溶液和小分子或小颗粒的进入。 决定细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的特异敏感性。 对具有鞭毛的细菌来说，细胞壁的存在是鞭毛运动的 必要条件，即细胞壁对鞭毛的运动起着力学支点的作用。 正常的细胞分裂所必需。,2019,-,31,(2)基本结构 细胞壁主要是由肽聚糖（peptidoglycan）组成，此外还含有磷壁酸、脂多糖等特殊成分。 依据细胞壁的结构与化学组成不同，革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）,2019,-,32,2019,-,33,（1） 双糖单位： GM重复交联构成骨架 （2） 短肽侧链： 4个aa组成 L-丙氨酸(Ala) D-谷氨酸(Glu) L-赖氨酸(Lys) 二氨基庚二酸 D-丙氨酸(Ala) 短肽连接在N-乙酰胞壁酸上 （3） 肽桥： 金黄色葡萄球菌(S.aureus)：5个甘氨酸(Gly)构成的短肽 大肠杆菌(E.coli): 无，短肽直接相联,2019,-,34,革兰氏阳性细菌肽聚糖单体,革兰氏阴性细菌肽聚糖单体,2019,-,35,肽聚糖网格状结构,细胞壁的基本骨架肽聚糖,2019,-,36,G+和G-肽聚糖,2019,-,37,青霉素对细胞壁的作用,与转肽酶结合，使该酶失活，抑制了侧链末端的丙氨酸与五肽桥的连接，破坏了细菌细胞壁的完整性（即抑制肽聚糖合成最后阶段的交联作用转肽反应，对G+和G-都一样），故仅对生长着的菌有效，主要是G+菌。,青霉素作用位点,2019,-,38,溶菌酶对细胞壁的作用,可切断NAM和NAG之间 的-1，4-糖苷键，引 起细菌裂解。 对G菌，在EDTA存 在下，受溶菌酶作用。 溶菌酶处理后的菌细 胞应保存在弱高渗 （0.1-0.2M）蔗糖液中。,2019,-,39,细菌细胞壁的结构,革兰氏阳性菌细胞壁：由肽聚糖和磷壁酸组成,磷壁酸：占40%。G+菌所特有,其主链由数十个磷酸甘油或磷酸核糖醇组成,有的还有由DAla和还原糖组成的侧链。,肽聚糖: 占30-70% ,不同菌种中肽聚糖(肽链)组分不同。,2019,-,40,G+细胞壁特有成分,磷壁酸（teichoic acid） 结合环境中的某些阳离子，如Mg+，Ca+，提高细胞膜表面酶活性 构成细胞壁的表面抗原成分 噬菌体吸附的特异性受体 调节细胞自溶 与细菌致病性有关：黏附性,2019,-,41,细菌细胞壁的结构,革兰氏阴性菌细胞壁：分内壁层和外壁层。,内壁层：紧贴胞膜,仅由12层肽聚糖分子构成,占细胞壁干重5-10%,无磷壁酸。,外壁层：位于肽聚糖层的外部。 脂多糖; 脂蛋白、 包括: 蛋白质层: 基质蛋白、 外壁蛋白; 磷脂.,2019,-,42,G-细胞壁特有成分,脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）： 多糖部分:核心多糖 O-多糖(抗原成分,O抗原) 类脂部分:类脂A(内毒素成分) 结合环境中的某些阳离子，如Mg+，Ca+，提高细胞膜表面酶活性 与细菌致病性有关（内毒素）：类脂A的致热作用 o-抗原构成细胞壁的表面抗原成分 噬菌体吸附的特异性受体,2019,-,43,细菌的染色法,活菌染色,简单染色法,抗酸染色,普通染色,特殊染色,正染色,负染色,死菌染色,细菌染色,复杂染色法,芽孢染色法,细胞壁染色法,鞭毛染色法,革兰氏染色,2019,-,44,丹麦学者C.Gram（革兰） 于1884年发明了一种鉴别 不同类型细菌的染色方法。,革兰氏染色,2019,-,45,革兰氏染色与细胞壁：,1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染,2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。,3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。,4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色,2019,-,46,G+菌和 G-菌细胞壁的结构和化学组成 结构 化学组成 G+菌 厚(3080nm)、 肽聚糖，占胞壁重量的60-90% 结构致密均匀 磷壁酸 细胞壁与细胞膜外层紧密相连 G-菌 薄(1520nm)，结构复杂 分为两层 外膜 双层类脂 脂多糖(LPS) 、多糖、蛋白质 内层 肽聚糖，无磷壁酸 细胞壁的外膜与细胞膜 水解酶；结合蛋白；化学受体 之间存在明显的壁膜间隙,2019,-,47,革兰氏染色的机制 细菌的不同显色反应是由于细菌细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要在于细胞壁的结构和特殊化学组成。 G+菌 G-菌 结晶紫(CV) 初染 紫色 紫色 碘液(I) 媒染 紫色 紫色 形成不溶性复合物 (CV-I复合物） (CV-I复合物） 酒精 脱色 保持紫色 脱去紫色 （乙醇使厚的肽聚糖层脱水， （乙醇处理不但破坏了胞壁外 导致孔径变小，由于 CV-I 膜，还可能损伤肽聚糖层和 复合物分子太大，不能通过 溶解脂质，被乙醇溶解 CV-I 细胞壁。） 复合物从细胞中渗漏出来，） 番红 复染 紫色 红色,2019,-,48,Gram Stain,2019,-,49,细胞壁缺陷型细菌,实验室或宿主体内形成,在自然界长期进化中形成支原体,缺壁突变L型细菌,人工去壁,基本去尽原生质体 (G),部分去除圆球体(G),共同点：细菌呈球形、对渗透压敏感、对噬菌体不敏感、即使有鞭毛，也不能运动。,2019,-,50,（1）L型细菌（L-form bacteria）,细菌在某些环境条件下（实验室或宿主体内）通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷变异型。1935年，因英国李斯德（Lister）预防研究所首先发现而得名。 最早发现的L型细菌是念珠状链杆菌（Streptobacillus moniliformis），随后，在大肠杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、链球菌、分枝杆菌和霍乱弧菌等20多种细菌中均有发现。 一般认为L型细菌可能与针对细胞壁的抗菌治疗有关。 J Int Med Res 2005;33 (1):1-20,对渗透压敏感，在固体培养基上形成“油煎蛋”似的小菌落（直径在0.1mm左右）。,2019,-,51,（2）原生质体（protoplast）,用溶菌酶处理或在含青霉素的培养基中培养细菌，抑制新生细胞壁合成而形成的仅由一层细胞膜包裹的、圆球形、对渗透压变化敏感的细胞，一般由G细菌形成。,对环境条件变化敏感，低渗透压、振荡、离心甚至通气等都易引起其破裂；,有的原生质体具有鞭毛，但不能运动，也不被相应噬菌体所感染；,在适宜条件（如高渗培养基）可生长繁殖、形成菌落，形成芽胞及恢复成有细胞壁的正常结构；,比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，是研究遗传育种及细胞融合的良好实验材料。,特点,2019,-,52,（3）圆球体（spheroplast）,又称原生质球。采用上述同样方法，对G细菌处理后而获得的残留部分细胞壁（外膜层）的球形体。与原生质体相比，它对外界环境具有一定的抗性，可在普通培养基上生长。,lysozyme,Cell membrane,spheroplast,protoplast,特点,同原生质体，对环境因素敏感。 不同于原生质体，溶菌酶加EDTA处理后残留部分细胞壁，因而对环境有一定抗性。 不同于原生质体，一般是G细菌在高渗环境中形成。,2019,-,53,2.细胞质膜（cytoplasmic membrane）,紧贴在细胞壁内侧，包围着细胞质的柔软且具一定弹性的半透性薄膜。,2019,-,54,（1）作用 细胞内外物质交换和运送 在原核微生物中,参与生物氧化和能量产生 与细胞壁及荚膜的合成有关 鞭毛着生的位点 维持细胞内正常渗透压的屏障作用 （2）化学构成 磷脂双分子层，脂肪酸和甘油通过酯键相连 蛋白质（约60-70%） 磷脂（骨架，约20-30%） 少量糖,2019,-,55,1972年Singer和Nicolson提出的细胞膜液态镶嵌模型。,认为：膜是由球形蛋白与磷脂按照二维排列方式构成的流体镶嵌式，流动的脂类双分子层构成了膜的连续体，而蛋白质象孤岛一样无规则地漂流在磷脂类的海洋当中。,2019,-,56,内膜系统,中介体，间体（ mesosome）： 由细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状物，一般位于细胞分裂的部位或附近。,功能: 参与隔膜形成 与核分裂有关 类线粒体功能：参与呼吸、提供能量,2019,-,57,3.细胞质及内含物(cytoplasm),细胞膜内除核质体外的一切半透明、胶状、颗粒状 物质可总称为细胞质。 细胞质主要成分：水、蛋白质、核酸、脂类，少量糖和无机盐。 细胞质功能：含丰富的酶类，是细菌合成和分解代谢的主要场所。 核糖体 颗粒状内含物 其它,2019,-,58,核糖体是分散在细胞质中的颗粒状结构，由核糖体核酸（占60%）和蛋白质（占40%）组成。,细菌的核糖体 沉降系数为：70 s，由50 s大亚基和 30 s 小亚基构成。 功能：是细胞合成蛋白质的机构。,2019,-,59,肝糖粒和淀粉粒：大肠杆菌、芽胞杆菌和蓝细菌等 碳源及能源类 脂肪粒：聚-羟丁酸（PHB）：固氮菌、肠杆菌等 硫粒：紫硫细菌、丝硫细菌、贝氏硫杆菌等 内含物 藻青素：蓝细菌 藻青蛋白：蓝细菌 磷源 异染粒：迂回螺菌、白喉棒杆菌、结核分枝杆菌,颗粒状内含物,2019,-,60,肝糖粒和淀粉粒:葡萄糖聚合物,较均匀地分布在细胞质内，颗粒较小。 若这类贮藏物大量存在时，用碘使对其染色，肝糖粒能被碘液染成红色，淀粉粒被碘成蓝色。,2019,-,61,脂肪粒：类脂性碳源贮藏体,聚羟丁酸颗粒是许多细菌细胞质内常含有的碳源类储藏物.PHB不溶于水,易被脂溶性染料(如苏丹黑)着色。 功能:贮存碳源、能源和降低渗透压。 许多好氧菌和光合厌氧菌都含有聚羟丁酸颗粒。,2019,-,62,硫粒：硫元素的贮藏体,形成： 取决于环境硫化物含量,当环境中S含量高时，在体内积累；当缺S时,氧化成硫酸被菌利用。 功能： a.好氧硫细菌的能源 b.厌氧硫细菌的电子供体,2019,-,63,异染粒： 是普遍存在的贮藏物，主要成分是多聚偏磷酸盐。 异染粒大小和结构:大小为0.51m ，是多聚偏磷酸盐的聚合物，分子呈线状。 功能：贮存磷元素和能量，降低渗透压。 多聚偏磷酸盐对某些染料有特殊反应,产生与所用染料不同的颜色,因此得名异染颗粒。 例:异染粒遇甲基胺蓝变紫红色.,2019,-,64,气泡,由蛋白质膜构成的充满气体的泡状物。 有些细菌细胞质中含有几个或多个气泡。 功能： a.调节细胞比重，使其漂浮在合适的水层中。 b.吸收空气，空气中的氧气可供代谢需要。 例：许多光合细菌和水生细菌、盐杆菌常含有气泡。,2019,-,65,液泡：许多活细菌细胞内有液泡，液泡主要成分是水和可溶性盐类，被一层脂蛋白的膜包围。可用中性红染色使之显现出来。液泡具有调节渗透压的功能，还可与细胞质进行物质交换。 羧酶体：含有固定CO2所需的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶和5-磷酸核酮糖激酶，可能是合成CO2的场所。 磁小体：趋磁细菌细胞中含有的大小均匀、数目不等的Fe3O4颗粒，外有一层磷脂、蛋白或糖蛋白膜包裹。功能是导向作用，即借鞭毛游向对该菌最有利的泥、水界面微氧环境处生活。,2019,-,66,4.核质(nuclear material)，拟核 核质体：由大型环状双链DNA纤丝不规则地折叠或缠绕而构成的无核膜、核仁的区域。,细菌DNA 长度：一般为：13mm 例：大肠杆菌的DNA长约1mm。 生长迅速的细菌在核分裂之后细胞往往来不及分裂,所以细胞中常有24个核，而生长缓慢的细菌细胞中一般只有12个核，不在染色体复制时期一般是单倍体。 功能：负载遗传信息。,2019,-,67,质粒（Plasmids）：细菌染色体外的遗传物质，由共价闭合环状双链DNA分子组成。分子量约为2-100 10 D。携带1-100个基因, 一个菌细胞可有一至数个质粒。,6,种类：接合质粒、抗性质粒、降解质粒、细菌素质粒、致瘤质粒 例：细菌抗药性因子、大肠杆菌的F因子。 质粒应用:基因工程，体外重组.,2019,-,68,1.荚膜（capsule）,某些细菌细胞壁外的一层粘液性物质。,2019,-,69,根据荚膜的形状和厚度的不同，将荚膜分为四类： 荚膜或大荚膜：粘液状物质具有一定外形，相对稳定地附着在细胞壁外，厚度：0.2m。 微荚膜：粘液状物质较薄，厚度：0.2m ， 与细胞表面牢固结合。 粘液层：粘液物质没有明显的边缘，比荚膜松散,可向周围环境中扩散,增大黏性。 菌胶团： 多个细菌共有一个荚膜。,2019,-,70,荚膜的组成：因种而异，除水外，主要是多糖（包括同型多糖和异型多糖），此外还有多肽，蛋白质，糖蛋白等。 荚膜的生理功能： 1.保护细胞，抗干燥。 2.贮藏养料，是细胞外碳源和能源的储备物质。 3.荚膜可以抵御外界细胞对菌体的吞噬作用。 4.荚膜具有抗原性(M抗原)；与致病力有关。 5.堆积代谢废物。,2019,-,71,粗糙型菌落,荚膜与菌落形态,光滑（Smooth,S-)型菌落产荚膜的细菌在固体培养基上形成的菌落表面湿润、有光泽、呈粘液状，称S-型菌落。 粗糙（Rough,R-)型菌落不产荚膜的细菌形成的菌落表面干燥、粗糙、称R-型菌落。,光滑型菌落,2019,-,72,2.芽孢（spore）,某些细菌，特别是G+杆菌，生长到稳定期后，在细胞内形成一个圆形或椭圆形的、由多层壁膜包围、对不良环境具有抗性的特殊结构称为芽胞 注意：芽胞是休眠体不是繁殖体（一个细菌只有一个芽胞，一个芽胞只能萌发成一个细菌细胞）,2019,-,73,芽孢形态及结构,细菌分类鉴定重要指标,形状：圆形、椭圆形 大小：直径菌体横径 直径菌体横径 位置：一端、中央,2019,-,74,芽胞的组成和结构，主要包括胞外壁、芽胞衣、皮层和核心.,芽胞的结构,芽胞的外壁层厚而致密，主要成分为脂蛋白，通透性差,不易着色。 核心含有大量的DNA、RNA、蛋白质酶等物质，还含有2,6吡啶二羧酸（DPA）,DPA是芽胞特有的成分。一般以 DPACa的形式存在 皮层主要含芽胞肽聚糖、 DPACa，皮层体积大，比较致密。 芽胞平均含水量低,约40%.,2019,-,75,芽胞的特性: 1.具有很强的抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能力。 2.含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易着色。 3.新陈代谢几乎停止，处于休眠状态。 4.一个芽胞萌发产生一个个体。 芽胞的抗热机制： 可能与以下因素有关，如含水量低、壁厚而致密，芽胞中的酶分子量小，比较耐热。过去认为芽胞抗热与DPA有关，现在已否认了这种假设。,伴孢晶体（Sporecompanioned crystal）：生物农药 苏云金芽胞杆菌属中的细菌在形成芽胞时，一个细胞内只能形成一个菱形、方形或不规则形的蛋白毒性晶体。,2019,-,76,3.鞭毛（flagellum）,某些细菌表面一根或数根细长波状弯曲的丝状物，是细菌的运动器官。 鞭毛的化学组成： 主要：鞭毛蛋白，还有少量的多糖、脂类和核酸等。 鞭毛起源于细胞质膜内侧的基粒。 细胞质区内有一个颗粒状小体（基粒），鞭毛自基粒长出穿过细胞壁延伸到细胞外部。 鞭毛的观察： 1)从固体培养基上的菌落形态判断 2)光学显微镜 悬滴法、暗视野映光法 3)光学显微镜 特殊鞭毛染色 4)电镜 5)半固体穿刺培养,2019,-,77,鞭毛着生方式,周 生,2019,-,78,鞭毛结构与功能,鞭毛的结构： 鞭毛丝 鞭毛 鞭毛钩 基础小体 功能： a. 细菌的运动器官； b. 细菌鉴定的指标； c. 鞭毛蛋白具有很强的抗原性。,2019,-,79,4.菌毛（pilus）,某些细菌表面纤细中空、短而多的丝状物 纤毛比鞭毛更短、更细，且又直又硬。数量很多，不具有运动功能，但与菌的致病性吸附等有关。,2019,-,80,一、生长繁殖条件： 充足的营养物质（碳源、氮源、无机盐、生长因子、水） 适宜的酸碱度：大多数pH6.8-7.4 适宜的温度：25-37 气体条件：需氧、微需氧、耐氧、专性厌氧、兼性厌氧,第三节 细菌的繁殖,2019,-,81,繁殖方式：裂殖为主，少数有性接合 过程：染色体复制-细胞质膜内陷-横隔/壁的形成-同时染色体分裂-子细胞分裂（成子代细胞）,2019,-,82,二、人工培养,培养基（medium）：人工配制的满足细菌及其他微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养物质。 配置4点原则：适宜营养物质、适宜浓度和比例、适宜pH、灭菌 分类： 1）按组成成分分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 2）按物理状态分：液体、固体、半固体培养基 3）按功能分：基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基,2019,-,83,1.固体斜面培养 2. 液体培养基 3. 半固体培养,2019,-,84,固体培养,菌落colony：在固体培养基上,由单个细胞繁殖形成的肉眼可见的子细胞群体。 菌苔Lawn:大量细胞密集生长,结果长成的各“菌落”连接成一片。,2019,-,85,不同的微生物种类，其菌落特征不同。同一种菌在不同培养条件下菌落特征也不尽相同。 菌落的特征： 包括大小、形状、颜色、边缘、质地、透明度、光泽、表面、湿润度等。,2019,-,86,纯培养方法,三区划线法,稀释平板法,2019,-,87,涂布平板法,倾注平板法,2019,-,88,2019,-,89,三、生长曲线,定义：少量菌种接种到一恒定容积的液体培养基中，提供最适培养条件培养，定时测定培养液中的细胞数，以培养时间为横座标，以细胞数的对数或生长速率为纵座标作图。,2019,-,90,活菌计数比较麻烦，操作要求严格。 准确的结果，重复性也差，因此在实际工作中多采用分光光度计测定OD值的方法绘制细菌的生长曲线。,2019,-,91,生长曲线运用,1、用合适的菌种、菌龄、接种量和培养条件，缩短迟缓期。 2、在迟缓期灭菌，保证制剂质量及减少热原质污染。 3、对数期细菌广泛用作生产种子和科研材料。 4、稳定期采取补加营养物质、移去代谢产物等延长该期，收获更多次级代谢产物。 5、芽胞于对数生长期末期开始形成、稳定期大量形成、衰亡期释放，有利于菌种保藏。,2019,-,92,第四节 细菌的新陈代谢,IMViC试验 I吲哚试验 M甲基红试验 VVP试验 C枸橼酸盐利用试验 大肠杆菌 + + 产气杆菌 + +,H2S试验 培养基中含铅或铁 分解含硫氨基酸产生H2S,生理生化实验,2019,-,93,第五节 细菌的感染,侵袭力病原菌突破宿主防线，并能于宿主体内定居、繁殖、扩散的能力。借助于表面结构（菌毛、鞭毛、荚膜）、侵袭性酶类。 毒素按其来源、性质和作用的不同分为外毒素（exotoxin）和内毒素（endotoxin）。 外毒素是细菌在生长繁殖过程中分泌到胞外的毒性蛋白，主要由G+细菌产生，毒性作用强。白喉杆菌产生的白喉毒素，破伤风梭菌产生的破伤风毒素等。 内毒素是G-细菌细胞壁成分中的脂多糖（LPS），引起机体发热、白细胞增多、血压下降及微循环障碍等，相对毒性较弱。,类毒素：由于外毒素对热和某些化学物质敏感，用 0.3 -0.4%甲醛处理，使其毒性完全丧失，保持抗原性。常用来预防注射。 抗毒素：用类毒素注射动物，以制备外毒素的抗体，作治疗用。,2019,-,94,2019,-,95,1.病原菌毒力 侵袭力： 粘附和侵入能力 繁殖与扩散能力 对宿主防御功能的抵抗能力 毒素： 外毒素 内毒素 2.病原菌侵入数量：与致病能力成正比； 与毒力成反比。 3.侵入途径：呼吸道 消化道 泌尿生殖道 伤口,荚膜 黏附素 侵袭性物质 细菌生物膜,细菌的致病性（病原菌）,2012,7,13 Science Steven Chu 新成像技术破坏生物膜杀死耐药菌,2019,-,96,感染的分类,按感染来源分：外源性、内源性 按临床表现分（细菌致病力和机体抵抗力的博弈）：隐性、潜伏、显性、带菌状态 “伤寒玛丽”（真名：Mary Mallon）： 一个健康带菌者，被证实在美国有7个地区多达1500个伤寒患者都是她传染的。 按病情轻重分：急性、慢性 按疾病发生部位分（显性）：局部、全身（毒血症、菌血症、败血症、脓毒血症）,2019,-,97,营养物质运送方式,2019,-,98,第一节 放线菌的形态、大小和结构,定义：大部分放线菌由分枝状的菌丝组成，菌丝大多无隔膜，属单细胞。革兰氏阳性 。 菌丝直径与细菌相仿：m级 原核结构：无核膜，核仁 细胞壁主要成分为肽聚糖，并含有二氨基庚二酸 核糖体为70s 最适生长pH与多数细菌相近，呈微碱性 对溶菌酶和抑制细菌类抗生素敏感 繁殖方式与细菌相同，无性繁殖 DNA重组方式与细菌