课件：幽门螺杆菌疫苗.pptx

幽门螺杆菌疫苗,杜薇 2017.08.31,目录,01,背景,02,03,04,检索方法,文献内容,总结,第 1 部分,背景,幽门螺杆菌,“,背景,是一种螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性杆菌。 1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃粘膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。 幽门螺旋杆菌病包括由幽门螺旋杆菌感染引起的胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。幽门螺旋杆菌病的不良预后是胃癌,【陈述】有效的幽门螺杆菌疫苗将是预防感染的最佳措施。 证据质量：低。推荐强度：强。共识水平：100。,第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告 2017,第 2 部分,检索方法,PubMed 中国知网,英文、中文各800+,Helicobacter pylori vaccine 幽门螺杆菌疫苗,检索方法,检索工具,检索结果,关键词,第 3 部分,文献内容,第一篇,知识拓展,与抗原同时或预先应用，能够增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型的制剂,01,免疫佐剂定义,02,使用免疫佐剂的原因,可溶性纯化蛋白质疫苗或蛋白质亚单位疫苗的免疫激活作用通常较弱，不足以刺激机体产生足够的抗体，因此通常在疫苗制剂中加入佐剂。 与单独应用抗原相比，抗原与佐剂联合应用所需的抗原量较少，机体产生的抗体量较多，并且还可以减轻免疫耐受,佐剂的作用机理,03,1、改变抗原物理性状，延缓抗原降解和排除，延长体内存留的时间，从而更有效的刺激免疫系统。 2、 刺激单核巨噬细胞增强其对抗原的处理和递呈能力。 3、 刺激淋巴细胞增生和分化，从而增强和扩大免疫应答的效应。 4、改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应。,04,理想佐剂的必备条件,1、安全，且无短期及长期的毒副作用。 2、佐剂的化学成分和生物学形状清楚，制备批间差异小且易于生产。 3、与单独使用抗原相比，佐剂与抗原联用能刺激机体产生较强的免疫反应。 4、用较少的免疫剂量即可产生效力。 5、保证液体剂型疫苗在较低的浓度下即可刺激机体产生较强的免疫应答。进入体内的佐剂可自行降解且易于从体内清除。 6、价格低廉。,佐剂的分类,颗粒性佐剂 如氢氧化铝佐剂 非颗粒性佐剂 如细胞因子 本身具有免疫原性 如如百日咳杆菌、抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等 本身不具有免疫原性 如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等 来源于植物的佐剂，如皂甙和多糖类提取物等 来源于病原微生物的佐剂，如单磷脂、霍乱毒素以及CpG寡聚脱氧核苷酸等,05,2019,-,12,常用佐剂,铝盐佐剂是一类含Al离子的无机盐佐剂，主要有氢氧化铝胶和明矾。氢氧化铝胶，又称为铝胶，由于其生产成本低廉，使用方便，毒性极低。铝盐佐剂是第一个被批准可用于人的佐剂。,1 铝盐佐剂,06,2 油性佐剂,弗氏佐剂( FA)、佐剂-65、白油Span佐剂 弗氏完全佐剂(FCA)是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成的一种贮藏性佐剂。弗氏不完全佐剂( FIA)是在不完全佐剂的基础上加一定量的分枝杆菌而成。,2019,-,13,3 微生物佐剂,短小棒状杆菌(CP) 由CP经加热或甲醛灭活制成,为非特异性免疫增强剂,对机体毒性低,没有明显的副作用。 卡介苗(BCG) 最常用的微生物佐剂之一原是用来预防结核病的疫苗,在预防儿童结核病方面功效显著。 胞壁酰二酞(MDP)及其衍生物 MDP的成分是N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺,有很强的佐剂活性。被认为是最有发展前途的佐剂之一。 细菌脂多糖(LPS) LPS可起到多克隆B细胞有丝分裂原的作用,也可促进巨噬细胞分泌单核因子。LPS由于具有毒性,所以不能直接成为人用疫苗的佐剂 单磷酰脂质A(MLA) MLA是一种毒性较低的具有佐剂活性的脂多糖衍生物。 霍乱毒素(CT) 霍乱毒素是由霍乱弧菌分泌的分子量为84KD的一种不耐热肠毒素,增强弱免疫原的免疫原性。,2019,-,14,4 表面活性剂类佐剂,4-1免疫刺激复合物（ISCOM） 1 组成 抗原物质与由皂树皮提取的一种糖苷Quil A及胆固醇按 1：1：1 混合后自发形成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡。每个小泡直径40 nm，约含1012个分子的蛋白质 2 作用方式 ISCOM 能够与抗原的疏水部分结合，从而将其亲水部位暴露于免疫细胞，将抗原有效地递呈给抗原提呈细胞，由于抗原递呈细胞的内体小泡和胞质溶胶的双重作用，含 ISCOM 的疫苗可以通过 MHC-和 MHC-两种途径将抗原递呈给免疫系统，同时激活CD4+T细胞和CD8+T细胞 4-2 脂质体 1 结构 ：类似生物膜，一般由磷脂和胆固醇形成的双分子层包被目标物形成的超微球状制剂。 2 特点： 脂质体注入体内后能自然聚集到某些组织； 脂质体可以通过接触、吸附、吞噬、融合和脂质交换等方式与细胞相互作用； 脂质体可以增加所携带药物对淋巴系统的指向性和靶组织的滞留性，延缓药物释放，提高疗效； 无毒并且还可以降低药物对正常细胞的毒性,2019,-,15,5 分子佐剂,5-1 细胞因子 化学组成 多属小分子多肽或糖蛋白，是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质。 特点 对Th细胞的分化起重要作用,能增强自然杀伤细胞细胞毒性T淋巴细胞的功能,还有诱导其它细胞因子的产生,对机体的免疫应答具有广泛的上调作用。 分类： IL-2 一种重要的T细胞生长因子 IL-12 由单核细胞和B细胞产生,具有多种生物活性, 是迄今所知诱导Th1型免疫应答的最主要的细胞因子。 IL-18 是最近发现的鼠和人的细胞因子,可诱导Th1细胞和NK细胞高效分泌IFN-,促进T细胞增生,与IL-12产生协同作用等。 IL-15 主要由单核巨噬细胞产生,在哺乳动物一个主要的功能为调节NK细胞的发育与增殖,通过NK细胞产生IL-15共刺激细胞因子从而调节巨噬细胞和NK细胞间的相互作用。 IFN- 是一种有效的免疫佐剂,它能协同IL-2诱导LAK活性、增强抗原呈递,2019,-,16,5-2 CpG序列(CpG）,CpG序列 一类其序列大部分以非甲基化的胞嘧啶核苷酸和鸟嘌呤核苷酸(CpG)为基元的寡聚体,由于这种特征性序列可激活多种免疫效应细胞,故又被称作免疫刺激DNA序列 作用特点 可激活T细胞、B细胞、NK细胞等免疫活性细胞, 产生大量的多种细胞因子, 增强机体的特异性和非特异性免疫效应。 优点 CpG引起的免疫反应以Th1型为主,因此可以很好的激发粘膜免疫反应虽然CpG-DNA具有安全、有效等优点。,6 化学物质,左旋咪唑 主要作用于T淋巴细胞。此外它还有恢复周围效应细胞的功能,既是免疫扶正剂又是免疫调节剂,2019,-,17,不同免疫方法对重组幽门螺杆菌多靶点疫苗的免疫效果研究,重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌,口服重组幽门螺杆菌疫苗、期临床研究,邹全明, 毛旭虎, 郭刚,等.,第二篇,题目,作者,杂志,中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册). 2007,方法,血清检验结果,唾液检验结果,粪便检验结果,结论,该疫苗在所试验三种剂量下对人体均具有良好的安全性，未见明显的毒副反应。试验各组疫苗均能刺激人体产生较高的血清特异性IgG抗体、血清特异性总Ig抗体且持续时间较长，在全程免疫后两月仍处于较高的水平。 此疫苗具有良好的安全性和免疫原性，3次免疫优于2次免疫,Efficacy, safety, and immunogenicity of an oral recombinant Helicobacter pylori vaccine in children in China: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial,Zeng M, Mao X H, Li J X, et al.,Lancet, 2015，影响因子：47.831,第三篇,题目,作者,杂志,实验设计及方法,江苏省 4464名健康儿童 接受3次口服疫苗/安慰剂（随机双盲） 随访三年,药品信息：疫苗是通过DNA重组技术开发的。每剂包含15mg尿素酶B亚单位和热敏肠毒素B亚单位组成的融合蛋白 接种时间：在第0、14和28天进行了口服疫苗接种 接种方法：参与者禁食至少2小时，并在口服疫苗2分钟前，喝80毫升的缓冲溶液，含2.8克碳酸氢钠和1.1g的柠檬酸钠。溶解在30毫升的25 - 30C蒸馏水 采集标本：血样、唾液 采集时间：服药前、第三次服药后1个月、6个月、12个月（免疫分析） 不良反应监测：我们监测参与者在每次服用后至少有30分钟的不良反应。在接下来的3天里，参与者或他们的监护人在日记中记录了包括发烧、头痛、眩晕和一些胃肠疾病在内的反应。记录严重的不良反应。 后期随访：我们在4、8、12个月的时间里拜访了参与者，然后在第3次注射后的几个月24和36个月，来评估幽门螺杆菌感染事件的发生。 主要疗效终点是接种疫苗后的12个月内发生幽门螺杆菌感染。继发疗效终点为随访期间幽门螺杆菌感染的发生。 免疫原性终点：抗体几何平均滴度(GMT)，增长率(四倍的抗体滴度)，以及血清IgG和唾液IgA对尿素的几何平均滴度增加。 安全终点：在每组中被请求的不良反应和严重不良事件的发生率。,实验设计及方法,结果,疫苗组,对照组,疫苗组,安慰剂组,事件发生率 每年每百人,免疫效果,尽管免疫效果在第一年后减弱,但幽门螺杆疫苗显著降低了感染事件的发生在整个研究期间。,(A)抗尿素酶B亚单位特异性的血清IgG四倍增长率 (B)唾液IgA四倍增长率,与安慰剂相比，幽门螺杆菌疫苗可明显提高免疫应答 特异性抗体浓度很高，第一年内没有明显减弱,安全性,腹胀,腹泄,胃痛,呕吐,第四篇,幽门螺杆菌疫苗的研究进展,1 Hp 疫苗的实验研究 Hp 疫苗有预防和控制感染的潜能，具有良好的开发前景，吸引国内外研究者致力于疫苗的研究。从早期的全菌疫苗到后来的基因工程疫苗，研究较多的应用于Hp 感染的疫苗主要有全菌疫苗、亚单位疫苗( 基因工程疫苗) 、核酸疫苗、联合疫苗等。目前Hp 疫苗的研究大多处于临床前阶段，已进入临床试验的相对较少，实验研究在寻求有效疫苗中发挥重要作用，为临床试验打下良好基础。,1. 1 全菌疫苗全菌疫苗 是以全菌体作为免疫原接种 机体，产生高效的局部黏膜 免疫应答。 1.2 亚单位疫苗 亚单位疫苗可由培养Hp 并分离的抗原蛋白或利用基因工程生产重组的抗原蛋白制成。分离Hp 抗原蛋白操作复杂，费时费力，不易获取，但通过基因工程获得的抗原蛋白结构简单、成分清楚、安全性好和便于工业化大量生产，因而成为目前研究的重点。国内外学者已先后通过各种实验证实尿素酶是一种有效的保护性抗原，因其表达于所有Hp 中，是Hp 定植于胃黏膜必需的物质，且具有高度保守序列，因此是研究最多、最理想的候选抗原; 尿素酶有A、B 两个亚单位，其中尿素酶B 抗原性最强且有保护作用，是目前公认的首选抗原分子6-7此外，也有研究发现，Hp热激蛋白9、空泡毒素与细胞毒素相关基因A 蛋白10、过氧化氢酶11等蛋白抗原对小鼠动物模型有保护性免疫作用。,内容简介,1.3 核酸疫苗 核酸疫苗是指外源抗原基因直接转移到真核表达载体内，通过宿主合成抗原蛋白，并诱导针对该抗原蛋白的免疫反应。核酸疫苗主要包括保护性抗原和真核表达载体，为一种新形式的疫苗，其在体内不复制、不整合。研究结果表明，Hp 核酸疫苗同样具有较强的免疫原性和免疫保护性。然而，核酸疫苗经黏膜呈递时易被核酸酶降解而失活，如何解决这个问题是核酸疫苗的一个重要问题。目前，常采用带正电的生物可降解材料包裹核酸疫苗来解决这一问题。包裹后形成的粒子在保护质粒不被核酸酶等降解的同时，还能更有效地促进免疫应答的发生。已有研究表明，壳聚糖纳米粒作为基因呈递载体显示出良好的应用前景。 1.4 联合疫苗 目前技术分离的抗原的抗原性较弱，单一抗原疫苗产生的效果较低，而多价疫苗效果明显高于单价疫苗。故目前认为应用Hp 多个亚单位或者功能肽段构建联合疫苗，比单一成分构建疫苗具有更强的免疫保护性。,内容简介,内容简介,2 Hp 疫苗的免疫机制研究,Hp 自然感染会诱导机体产生免疫应答，却不能清除Hp，而导致患者的Hp 感染慢性化，其原因是Hp 可通过多种机制逃避宿主免疫应答，同时形成对Hp 感染的免疫耐受。研究证实，接种疫苗亦能够诱导机体产生免疫应答，不仅可减少细菌负荷量，还能够预防感染9， 20。目前认为Hp 自然感染诱导的免疫应答与接种疫苗诱导的免疫应答不同，疫苗有望根除Hp，但疫苗的免疫机制目前仍存在很多争议，普遍认为体液免疫和细胞免疫均参与抗Hp 反应。,内容简介,3 免疫佐剂与呈递系统,3. 1 免疫佐剂 抗Hp 感染中，黏膜免疫是令人满意的，但由于食物与共生微生物的存在，人体的免疫系统可以耐受大部分蛋白质，同时Hp 抗原的免疫原性较低，单纯用Hp 抗原免疫不能诱发足够的抗Hp 感染的免疫应答，故需应用合适的佐剂来增强抗原的免疫原性，获得理想的免疫效应。Hp 免疫佐剂最常用的是大肠埃希菌不耐热肠毒素和霍乱毒素，这些佐剂在动物实验中显示良好的耐受性，但在人体不良反应大，有学者应用Hp 溶菌产物与大肠埃希菌不耐热肠毒素双突变体( 192G/L211A) 免疫小鼠，获得与霍乱毒素作为佐剂相似的保护性免疫，近年来，也有一些学者应用IL-2 为佐剂，发现其可提高免疫保护率33-34。也有研究发现，以氧化铝为基础的疫苗诱导小鼠可产生明显的保护性免疫35-36。由于明矾已经批准用于人类，将此改进为可注射疫苗可能是抗Hp 感染的一个可行途径。,3. 2 呈递系统 呈递系统的主要作用是保护抗原，使之免受胃肠道或其他部位的酶降解，从而增强机体对抗原的免疫应答; 另外，呈递系统还具有缓释作用，能通过延长抗原的释放时间来加强机体免疫应答37。 常用的呈递系统有微粒、脂质体、冻干粉、复乳及凝胶、纳米疫苗、减毒活菌、病毒体或病毒样颗粒、壳聚糖及其衍生物等，但目前很少应用于非人类灵长类动物或临床试验。减毒活疫苗载体是目前研究比较多的一种，其不仅能发挥佐剂效应，还能作为呈递系统呈递抗原，具有良好的免疫及预防Hp 的作用，其中减毒沙门菌较常见，但活的减毒沙门菌在动物和人体内仍有一定的毒性，这限制了它的使用。菌蜕作为一种较为新颖的药物递送系统，日益受到人们的关注。 目前Hp 疫苗的呈递系统仍存在很多问题，如吸收率低、残留溶剂毒性大、制造工艺复杂、难以长期保存等问题，仍需寻求高效、安全、易推广的递送物质。,内容简介,内容简介,4 临床应用研究,Hp 疫苗在动物实验中取得了令人满意的结果，但在许多临床试验中却面临着许多问题，效果往往不尽人意。目前临床试验中，主要是佐剂的不良反应及抗原的免疫原性弱等问题。Malfertheiner 等41将含空泡毒素、细胞毒素相关基因A 蛋白、中性粒细胞激活蛋白的联合疫苗加氢氧化铝佐剂免疫57 例Hp 阴性志愿者，接种疫苗18 24 个月后检测到记忆性抗体与细胞免疫反应，且不良反应轻微，提示氢氧化铝在佐剂方面有较好的前景。然而，应用这种疫苗于期临床试验中的结果却不尽如人意，约50% 的志愿者接种该疫苗12 周后，Hp 检测阴性，与安慰剂组相比，其保护率相似2。国内邹全明教授等建立的“基因重组Hp 疫苗”已顺利完成了世界第一个Hp 疫苗的期临床研究，该疫苗是具有自主知识产权的一类新药。,第 4 部分,总结,药品进展：关于幽门螺杆菌疫苗的研究一直在进行，历时15年后，在2009年获国家一类新药证书，2015年完成了三期临床试验，免疫效果可达70%以上。2016年公司披露因资金紧张和技术不足遇到瓶颈，迟迟不能通过国家食药总局补充注册申请，仍无法获批。 接种时间：在第0、14和28天进行了口服疫苗接种 接种方法：禁食至少2小时，并在口服疫苗2分钟前，喝80毫升的缓冲溶液（含2.8克碳酸氢钠和1.1g的柠檬酸钠）。溶解在30毫