X小体的检测和多倍体诱发实验.ppt

,遗传学实验,Genetic Experiment,人类X小体的检测,一、 X小体检测,实验目的： 掌握X小体玻片标片制作方法， 绘制X小体形态特征及所在部位。 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床诊断提供参考。,实验原理：,1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。,Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。,实验材料： 口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。 实验器具和药品： 1.器具：普通显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红。,实验步骤：,1.取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。 2.固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定2030min，空气干燥。,3. 染色制片：滴加12滴改良品红于室温下染色1020min（勿使干燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。 4. 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细胞；并在高倍或油镜下观察。 若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。,人口腔X小体,X小体的形状,油镜下可见X小体为一致密的浓染小体。轮廓清晰，约1um，常附着于核膜边缘或靠边内侧，其形态有三角形、卵形、扁平形等。 正常女性间期细胞核中X小体比例约30%50%，男性中则偶尔可见（2%），且不典型。,植物多倍体的诱发和鉴定,一、实验目的,1、了解人工诱导多倍体的原理 2、学习用秋水仙碱诱发多倍体植物的方法 3、学习识别多倍体植物的形态特征及其细胞学特点。,二、实验原理,秋水仙碱是细胞有丝分裂的抑制剂，它的主要作用是抑制纺锤丝微管的形成，因而抑制了染色体移向两极的运动，使细胞停滞在中期状态而不能分裂成二个新的子细胞，而秋水仙碱对染色体结构并无明显的影响，对细胞也不产生严重毒害，细胞解除秋水仙碱环境后仍可正常生长分裂，因而出现细胞含有多个染色体组的情况，亦即构成了多倍体细胞。如果用秋水仙素处理植物的根尖，则在根尖分生区内可检测到大量染色体加倍的细胞，若处理植物幼苗的芽，则可以得到染色体加倍的植株。,三、实验材料 洋葱(Allium cepa,2n=16)、蚕豆(Vicia faba,2n=12)、西瓜(Citrullus vulgaris ,2n=22)等作物的种子、根尖、花蕾或幼苗 。 四、实验用具药品 1.用具：显微镜、烧杯、培养皿、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子、刀片、解剖针、纱布、吸水纸等。 2.药品试剂：秋水仙碱、改良品红染色液、无水酒精、冰醋酸、1N盐酸。,五、实验步骤 1.多倍体的诱发,可处理萌动种子，幼苗或植株生长点，浓度以0.010.4%为宜；在以实验室观察为目的的情况下，可以处理根尖。,2.植株形态特征的观察,整个植株、或组织、器官、细胞都可以看到增大，其中气孔，保卫细胞表现尤为明显。,3.细胞学观察,用根尖压片法制成染色体玻片