显微制片中一些实用的小技巧

显微制片中一些实用的小技巧,周建理,工具：美工刀、木工锉、小锯、钢丝刷。,在基层，显微鉴定面临两大难题，一是如何制作一个特征明显方便观察的制片，二是如何在显微镜下找到药材的鉴别点。今天我是想重点讲前一个问题，在这里给大家介绍一下我个人的一些小的技巧。虽然是一些雕虫小技，但也许比较实用。在显微鉴定这个已经十分成熟的技术面前，成败的决定因素也许就是细节。我将分讲的几个 小技术,1.如何对硬药材进行徒手切片刮片法2.如何将软的小的药材夹着切片用泡沫塑料3.如何做出更容易找到特征的粉末刀锯锉法4.如何进行叶表面制片磨片法5.无火加热水合氯醛烫片法6.景深合成法在显微拍摄和照片后处理上的应用,一、如何在硬药材上刮出一片好切片 水浸快刮,黄芪切片,方法：把药材切面做平，手指蘸一点清水抹在切面上，稍等片刻，用刀在切面上连切带刮地刮下一片薄片来。原理：硬药材可以用水浸软，当把水蘸到切面时，水会朝下浸润，形成上软下硬的一个介面，如果下刀，只要朝下使点劲，你的刀自然就会在这介面上行走。你会有连切带刮的手感，刮下一切片来。如何切得薄？关键是抢在合适的时候几秒到半分钟，各药材不一样，自己体会。如果你保持刀是潮的，你可以继续切下去。,锯出切面,锉刀做平,整出个平的切面,用水将其切面浸润，13秒钟后，用刀连切带刎切出薄片。可以用硬泡沫塑料挡在一侧，以保护安全。,入水，刀蘸水，可接着切。切出满意的为止。,一组地骨皮的切片,地骨皮,地骨皮,地骨皮,黄芪,黄芪,桑寄生,桑寄生,菟丝子的徒手切片,二、如何将软的小的药材夹着切片 巧用泡沫塑料,把泡沫塑料切一口子，把泡软的药材放在中间，可多放几个 。,用刀切出平面。,把刀架在前面的泡沫上，轻轻下压，平切。每一刀压力加大一点，连续切。会有几刀切空，只要稍加压又能切到。最后前泡沫会明显高于后面。再切平，可继续切。,原理就是利用泡沫的弹性，造成切片时只能切出薄片或切不到，很难切出厚片的情况。只要反复切，就一定能切到薄的片子。,最后一点的泡沫可不切下，让切片积在其中和刀片上。,叶子先泡软，切成条，卷叠起来夹着切。,如果叶子小或窄，可片叠在一起夹着切。,用一稍粗一点的棍扎一个洞，把植物的茎塞进去（也可把花、叶子等卷成个棍形），可多塞几根。,也可用打洞法夹片,酸枣仁可塞可夹,怕切到手的同仁们，硬的材料可以夹着刮。,北五味子这样切方便,细小的种子类可粘在胶布条子上，或粘在胶水纸条上。剪下,剪成以上的样子，折叠过来，两面都粘上，再卷成小条，塞入泡沫塑料中，,最后就是切,切下的片放入水中，选薄的用。,枳壳种子的横切,实例照片,垂盆草茎横切,垂盆草茎横切,金钱草茎横切,荷叶的横切,决明子的横切,益智仁种子横切局部,三、如何做出容易找到特征的粉末 刀锯锉法,先用钢丝刷清理木工锉。,把药材放在锉上轻轻的磨，劲使大了粉末会变粗的。溅出的粉末多比较大，可以不要。磨好后，在纸下敲几下，粉末就出来了。,最后，再用钢丝刷将木工锉清理干净。,也可用细齿钢锯轻轻地锯，取特定部位（如节）处的粉末,甘草木栓细胞的专门制片,只要轻轻地对甘草表面进行摩擦，并轻轻转动。粉末中的大部分将都是甘草的木栓细胞。,甘草韧皮部的专门制片,再对清理掉栓皮的甘草锉粉，粉末绝大部分都是韧皮部了，集中见到的是晶纤维。,甘草木质部的专门制片,用刀削去形成层之外的部分，下余的再磨粉，粉末的绝大部分将是木质部，集中见到的是具缘纹孔导管和网纹导管。,这样的方法，有助于对药材显微的科学研究，也十分有助于我们在检定工作中迅速找到我们需要看到的特征。,如果想要细粉，可用这一类细钢锉。最后强调一下，清理锉的锈和残渣，最好用钢丝刷。,四、如何进行叶表面制片磨片法,在叶、花、果实的表面显微观察时，往往最困难的是如何获得足够薄的表面制片。,可以把大叶子剪成小片，小叶子直接上去磨。如果叶片过于皱缩，可先润后压平，干燥后再磨。,如果要看下表面，就把下表面朝上，如果要看上表面，就把上表面朝上。,拇指按下，在细钢锉上轻轻摩擦，一直把叶面的一小部分磨到通透。用剪刀剪下磨薄的部分透化观察。,磨后留下上表面的效果,磨后留下下表面的效果,这是磨后的柔毛淫羊藿的下表皮,紫苏叶下表皮,五、不用酒精灯加热透化制片烫板法：,这是一个滴定用的加热保温烫板，也可用薄层板的加热显色用的烫板,把温度调到水合氯醛-甘油溶液的沸点以下一点。根据浓度比不一样，沸点也稍有别，约100105度，自己一试就知道了。将材料加水合氯醛-甘油溶液，盖上盖玻片，放在烫板上，加热，约1分钟为轻度透化。约3分钟为中度透化。约5分钟为重度透化。,最后用镊子把玻片推到另一块板上，冷却一下，就可以看显微了。,如果发现片子上气泡特多。可以把温度调高一点，保持微沸，让气泡慢慢地从盖玻片边缘逸出，几十秒到两分钟时间，可去掉大部分的气泡。,黄柏,六、如何克服显微摄影不清楚的问题 景深合成法的应用,做好制片后，现在大都有电脑显微镜可在观察中随时拍摄。,由于光学显微镜有一个景深特别小的问题。各特征又很难得会在一个平面上，这样拍的显微图很难得有大面积清楚的地方。,连单目的学生用生物显微镜,普通显微镜加一个电子目镜也一样用。,比如这个理枣仁照片，它就是不清楚的。,我们用微调不同焦距下拍摄的，22个，没有一个清楚。,目前世面已经出现多家景深合成的软件，这是合成后的。,黄柏纤维（未合成）,合成后的黄柏纤维（示纹孔）,拍摄显微拍摄最大的问题是景深太小，无法获得清楚的照片。我们采用固定样品，动微调，拍摄不同焦距的照片。,最近，景深合成技术日趋成熟，现在许多显微镜厂家都已经使用或正在开发这一技术。转用PHOTOSHOP合成逐渐成为过去。,可以拍摄到一组图片这是繁缕种子，共拍摄24张。但没有一张是完全清楚的,启动Bridge 向PHOTOSHOP中导入需要制作的图片,过去是用PHOTOSHOP,合成后目前的软件有称Z轴合成,对大面积的显微材料的多照片拼接合成,目前的软件有称“X、Y轴合成”,北五味子的合成,这是槲寄生茎横切面间苯三酚盐酸染色，再进行微性状景深合成和拼接合成的图。,中药微性状观察方法的一些新的进展：一、放大倍数更大从100倍到500倍，主要是利用金相显微镜的内置光源的功能。二、景深合成不用转到PHOTOSHOP，可以在显微镜观察的过程中一步合成。,这是某型号的金相显微镜(包括普通和偏光),这个“在Z轴的延伸”就是指景深合成,速度明显加快了,不同批次的鸡冠花子,青箱子种皮表皮细胞,鸡冠花子种皮表皮细胞,同等条件下拍摄，大小明显有区别。但不是十分稳定。,青葙子 鸡冠花子,在金相显微镜下放大到500倍,青葙子 鸡