2015最新肠杆菌肽在母猪生产中的应用

欢迎各位嘉宾莅临指导！,4,肠杆菌肽在母猪生产中的应用,中农颖泰集团技术部 张江 博士,目 录,我国母猪生产现状抗菌肽概念及研究进展肠杆菌肽简介肠杆菌肽在母猪生产中的应用,目 录,我国母猪生产现状抗菌肽概念及研究进展肠杆菌肽简介肠杆菌肽在母猪生长中的案例,一、存栏数高二、生产性能低下产活仔数低；年产窝数低 ；仔猪成活率低,我国母猪现状,三、药物用量大四、疾病多,免疫抑制，亚健康,控制或减少病原菌,环境控制、消毒、管理,增强群体免疫力，提高机体对疾病的抗病能力,哺乳仔猪问题的根源是母猪问题 ！,1. 母猪带毒（病毒、细菌）2. 母猪泌乳不足3. 母猪化药保健导致保健失效1.减少母猪身体病原菌2. 提高泌乳量3.减少抗生素的大量使用新型保健方案,莆田嘉兴北京对照,莆田嘉兴北京莆田嘉兴北京对照,粪便 粪便肥料 土壤,抗药性基因种类,氨基糖苷类内酰胺类喹诺酮-氨基糖苷类-氯霉素-内酰胺类多重抗药性大环内酯类-链霉素类-内酰胺类等多重耐药四环素类万古霉素其他,数据来源：美国科学院院报, 2012 , 110(9): 34353440,母猪减少带毒（细菌） 新型抗菌肽-肠杆菌肽妊娠料哺乳料保健方案有效减少由于大肠杆菌、沙门氏菌造成的仔猪产房腹泻,目 录,我国母猪生产现状抗菌肽概念及研究进展肠杆菌肽简介肠杆菌肽在母猪生长中的案例,抗菌肽的概念,抗菌肽又名宿主防御肽，是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽。,抗菌肽,抗菌肽,食品防腐保鲜-乳链菌肽（nisin）医药-消炎、抗感染、抗真菌保健品-国内已有抗菌肽概念的“食字号”保健品上市，其中大部分为技术含量较低的昆虫蛋白日化-日用化工产品主要集中在化妆品上，以创伤疤痕修复为主，兼具温和杀菌、抗感染和消除红肿等功效,目 录,我国母猪生产现状抗菌肽概念及研究进展肠杆菌肽简介肠杆菌肽在母猪生长中的案例,肠杆菌肽简介,颖泰二号TM主要成分是植物乳杆菌及其代谢产物。其核心代谢产物肠杆菌肽是利用蛋白质工程技术在植物乳杆菌中高效生产的一种抗菌肽，对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等革兰氏阴性菌具有强力杀灭作用。,肠杆菌肽,肠杆菌肽是由21个氨基酸组成的索套肽，分子量为2.1kDa，其中N端的8个氨基酸形成一个圆形的环状结构，9-21氨基酸形成发夹结构，贯穿圆环，故其性质非常稳定，对高温、酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶有良好抵抗力。,图1 肠杆菌肽空间结构,1、破坏病原菌细胞膜的完整性。,肠杆菌肽的作用机理,图2 膜穿孔示意图,2 、与病原细菌的RNA聚合酶集合后，抑制病原菌RNA聚合酶的活性。,肠杆菌肽的作用机理,数据来源： 美国分子细胞，2004年14卷6期,颖泰二号四大独特优势,（一）针对性强 可杀灭大部分致病性大肠杆菌和沙门氏菌等革兰氏阴性病原菌。,各索套肽对致泻型大肠杆菌菌株的抑制作用,结论：肠杆菌肽能抑制大部分所评价的DEC菌株，而且其抑制效果优于多种细菌素 数据来源：美国应用环境微生物，2000年66卷10期（IF=3.8）,（二）抗菌能力强,颖泰二号四大独特优势,图3 对各大肠杆菌抑菌作用,图4 对各沙门氏菌抑菌作用,肠杆菌肽对大肠杆菌的抑制作用,数据来源：国家饲料工程技术研究中心,2017/11/9,a:纯化后的抑菌活性（在20ul的灭菌盐水中稀释）用抑菌圈的平均宽度来表达，以毫米计 b:没有抑菌圈 数据来源：美国应用环境微生物，2000年66卷10期（IF=3.8）,纯化后的肠杆菌肽对致泻型大肠杆菌菌株的抑制作用,肠杆菌肽与硫酸黏杆菌素对大肠杆菌MIC（最低抑菌浓度）的比较,数据来源：国家饲料工程技术研究中心,肠杆菌肽对沙门氏菌的抑制作用,数据来源：国家饲料工程技术研究中心,肠杆菌肽与硫酸黏杆菌素对沙门氏菌MIC（最低抑菌浓度）的比较,数据来源：中农颖泰集团技术研发部,图2. 肠杆菌肽在不同培养基中抗菌活性将106CFU的新港沙门氏菌接种到LB,全血 (WB), 血浆 (P) 和灭活血浆(IS) 中。血浆中接种量为108。通过在时间点为0时定量培养验证接种物（黑色柱）。菌株在没有肠杆菌肽（对照组），两种不同剂量的肠杆菌肽，以及氨苄青霉素存在的条件下孵育2h。结论：肠杆菌肽可能比传统抗生素的杀菌活力高出许多。,数据来源：英国抗菌药物治疗杂志2007年，59卷，4期 （IF=5.31）,（三）结构稳定，耐酸、耐热、耐胃蛋白酶、耐胰蛋酶 肠杆菌肽用胰蛋白酶、胃蛋白酶处理5.5小时后，活性不降。,颖泰二号四大独特优势,A,B,图6 胃蛋白酶和胰蛋白酶处理结果，A图为处理30分钟，B图为处理5.5小时结果,颖泰二号四大独特优势,（三）结构稳定，耐酸、耐热、耐胃蛋白酶、耐胰蛋白酶模拟胃酸环境下肠杆菌肽对大肠杆菌25922菌株的抑菌效果,PH为2的胃酸，以不同时间处理肠杆菌肽，其对大肠杆菌25922菌株的生物活性没有影响,颖泰二号四大独特优势,（三）结构稳定，耐酸、耐热、耐胃蛋白酶、耐胰蛋白酶0.3%胆盐处理肠杆菌肽对大肠杆菌25922菌株的抑菌效果,0.3%胆盐以不同时间处理肠杆菌肽，其对大肠杆菌25922菌株的生物活性没有影响。,颖泰二号四大独特优势,（三）结构稳定，耐酸、耐热、耐胃蛋白酶、耐胰蛋白酶不同温度处理肠杆菌肽对大肠杆菌25922菌株的抑菌效果,以不同温度处理肠杆菌肽，其对大肠杆菌25922菌株的生物活性没有影响。,34,（三）结构稳定，耐酸、耐热、耐胃蛋白酶、耐胰蛋白酶 肠杆菌肽在121，0.1MPa处理1.5小时，仍有活性。,34,颖泰二号四大独特优势,A,B,图7 高热高压处理结果（1、1、1”为三批产品稀释液 2、2、2”为只加氨苄青霉素的培养基 3. 为产品稀释液调pH为中性），其中，A图为100处理30分钟抑菌活性，B为121，0.1MPa处理90分钟抑菌活性。,图1. 肠杆菌肽在LB和不同生物培养基中的稳定性肠杆菌肽(1 mg/mL)在37时在LB培养基（1）、血浆（2）、全血(3)、灭活血清(4)和血清(5)中孵育24h，通过spot-on-lawn法测定肠杆菌肽生物活性。作为对比，图中为稀释了1024倍的培养液在孵育时间点为0和孵育24h后产生的抑菌圈。结论：肠杆菌肽的活性不受血液中任何成分的影响。此外，肠杆菌肽对人体红细胞不存在溶血性。,数据来源：英国抗菌药物治疗杂志2007年，59卷，4期 （IF=5.31）,颖泰二号四大独特优势,（四）膜穿孔作用，不易产生耐药性,目 录,我国母猪生产现状抗菌肽概念及研究进展肠杆菌肽简介肠杆菌肽在母猪生产中的案例,日粮中添加肠杆菌肽对母猪繁殖性能的影响,选取40头配种时间接近、 胎次大致相同、 体重大致接近、 健康状况良好的长白大约克经产母猪随机分为两个处理， 每个处理4个重复，每个重复5头。试验分为2个处理组， 处理1组为对照组，饲喂基础日粮；处理2组为试验组，饲喂基础日粮+肠杆菌肽300mg/kg。基础日粮采用该猪场原有日粮。试验开始前将母猪赶进定位栏饲养，预饲期7d，试验从母猪妊娠90d至仔猪断奶结束。,试验设计,试验结果,肠杆菌肽对母猪生产性能的影响,注：同行数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05）；相同表示差异不显著（P0.05）。,试验结果,肠杆菌肽对仔猪腹泻频率的影响,注：同行数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05）；相同表示差异不显著（P0.05）。,肠杆菌肽对母猪的繁殖性能和仔猪的生长性能等指标的影响，试验结果表明，母猪添加300 mg/kg肠杆菌肽能够提高仔猪断奶重和成活率，同时显著改善仔猪的腹泻问题，对母猪、仔猪疾病起到一定的预防作用，减少应激对机体的损伤。,试验结论,肠杆菌肽对哺乳仔猪腹泻的治疗效果,吉林某规模化猪场。此场饲养管理属于中等水平，经常出现产房腹泻的问题。,试用案例一,选用的为5日龄仔猪，该窝仔猪共计11头，拉稀6头，3头使用颖泰二号，3头使用诺氟沙星。10月13日下午用药，10月14日用药2次，10月15日早康复！ 说明颖泰二号具有明显的治疗仔猪拉稀作用，且作用和诺氟沙星一样，可作为诺氟沙星替代品用以治疗仔猪拉稀。,10月13日用药前的试用组小猪,10月13日用药前的对照组小猪,选用的为7日龄仔猪，该窝仔猪共计10头，拉稀8头，4头使用颖泰二号，4头使用诺氟沙星。 诺氟沙星组组10月13日下午用药，10月14日仍拉稀继续用药，至10月15日2头仔猪好转，10月16日粪便成型，10月17日康复，不再灌药，其中死亡1头。 颖泰二号组10月13日下午用药，10月14拉稀，10月15日2头粪便成型，10月16用药一天康复。 以上结果可以看出颖泰二号对仔猪痢疾有显著的治疗作用，效果同诺氟沙星相似，且效果较诺氟沙星更显著。,试用案例二,试用组康复过程中的仔猪,对照组康复过程中的仔猪,试用组康复后仔猪,对照组