自身免疫性疾病的免疫学检验

第十五章 自身免疫性疾病的免疫学检验,返回总目录,目录,自身耐受(self-tolerance) ：正常情况下，免疫系统 对宿主自身的组织和细胞不产生免疫应答。 自身免疫 (autoimmunity)：当某种原因使自身耐受 性破坏时，免疫系统就会对自身组织成分、细胞成 分及其产物发生免疫应答。,第一节 概述,自身免疫病(autoimmune disease,AID)：是自身免疫应答过强或持续时间过久，表现为质和量的异常，所产生的自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击，导致损伤或功能障碍，并出现相应临床症状。,一、自身免疫病与风湿性疾病,风湿性疾病（rheumatic diseases）泛指影响骨、关 节及周围软组织等一组疾病，简称风湿病。,结缔组织病(connective tissue disease,CTD) 是指病变主要发生于结缔组织，有组织黏液样水肿、纤维蛋白样变性及坏死性血管炎等基本病理变化的一组疾病。以往所指的结缔组织病或胶原病是风湿性疾病的一部分，它们和风湿性疾病不可完全等同。,1.发生与感染、遗传、性激素等因素有关，属AID；2.结缔组织及血管的慢性炎症为其基本病理变化；3.病变可累及多系统、多器官；发病情况差异大，为异质性疾病；5.以关节、肌肉、软组织等疼痛为主要症状；6.血清中可查出多种自身抗体；7.对糖皮质激素及免疫抑制剂药物治疗有疗效；8.病程慢性、反复、进行性，最终可导致残疾或死亡。,风湿病的临床特点,二、自身免疫病的共同特征,三、自身免疫病的分类,按自身抗原分类,器官特异性自身免疫性疾病,器官非特异性自身免疫性疾病,患者的病变常局限于某一特定的器官，由对器官的特异性抗原的免疫应答引起,全身性或系统性自身免疫性疾病；患者的病变可见于多种器官及结缔组织（结缔组织病或胶原病）,按发病部位的解剖系统分类,（一）自身抗原形成,分子模拟,四、自身免疫病的发病机制,隐蔽抗原的释放,自身抗原改变,多克隆激活,（二）免疫系统发育和免疫调节异常,胸腺 骨髓 功能异常,Th1和Th2细胞功能失衡,（三）遗传因素,1.自身抗体的作用,（四）AID的病理损伤机制,抗血细胞表面抗原的抗体,1.自身抗体的作用抗细胞表面受体抗体,重症肌无力,抗细胞表面受体抗体,毒性弥漫性甲状腺肿（Graves病）发病机制示意图,自身抗体抗核抗体,肾小球、关节、皮肤和其它多种器官的毛细血管壁,结合,循环中的核抗原,多部位脉管炎 系统性红斑狼疮,形成,可溶性抗原抗体IC,反复沉积,1. 自身抗体的作用： 自身抗体与相应抗原形成的免疫复合物,2. 自身应答性T淋巴细胞作用 针对自身抗原发生免疫应答的T细胞可引起组织 损伤，这类疾病属于型超敏反应引起的疾病。 3. 巨嗜细胞和NK细胞的作用 巨噬细胞在AID的组织损伤中也起重要作用。巨噬细胞被细胞因子激活后，就具有细胞毒作用。,（四）AID的病理损伤机制,返回章目录,抗核抗体（antinuclear antibody，ANA): 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称； 在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；,第二节 自身免疫性疾病的免疫学检查,一、抗核抗体测定,ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；将检出ANA作为AID存在的依据。,抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、 AnuA、抗DNP、抗DE多肽抗体、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等,（一）ANA的类型和临床意义,ANA谱,抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗体，又称抗双链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。,抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体，又称抗单链DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗体。,对SLE有高特异性;SLE诊断标准之一。,缓解期降低,70%90%SLE活动期增高,药物疗效,抗dsDNA抗体,抗DNA抗体,抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；,AHA,检出百分率,抗dsDNA,50,70,90,100,药物诱导性狼疮只能检出此,SLE,AHA,AHA,抗组蛋白抗体,可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋 白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的RNA和多 肽组成。,抗ENA抗体,对风湿病有特异诊断价值的有以下七种： 抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体； 抗Sm抗体； 抗SSA抗体； 抗SSB抗体； 抗Scl-70抗体； 抗Jo-1抗体； 抗核糖体抗体 。,抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。,检出百分率,抗DNP,20,40,60,80,SLE非活动期,SLE活动期,抗不溶性DNP抗体,抗DNP,抗DNP,100,RA滑膜液中,抗DNP,抗可溶性DNP抗体,抗DNP抗体,抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质的基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积， 诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。,抗dsDNA抗体,抗核小体抗体,抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60%80%，特异性97%。,抗核小体抗体,（二）ANA的检测方法,将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。,形成胞核基质ANA抗人Ig FITC,1.荧光免疫法,均质型,抗核抗体核型,着丝点型,核仁型,斑点型,例：间接免疫荧光法（IIF法） 测定抗dsDNA抗体,短膜虫的动基体内含有大量纯的 dsDNA，无其他抗原干扰，可用 作基质来测定抗dsDNA抗体。 短膜虫替换小鼠肝切片或肝印片或 Hep2，制成抗原基质抗dsDNA抗人IgG FITC, 阳性结果可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。 测定抗dsDNA抗体具有特异性强、敏感性高的优点。,用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。,2. ELISA法,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,待检血清,按分子大小分开不同区带,分离,转印,NC膜上,抗ENA与膜上相应抗原带结合,抗人IgGHRP,NCENA抗ENA抗人IgGHRP显色,3. IBT法,类风湿因子(rheumatoid factor,RF): 是抗变性IgG的 自身抗体，为19S的IgM，也可见7S的IgG和IgA。 与人变性IgG结合，不与正常IgG发生凝集反应。 RF出现在类风湿性关节炎（RA）患者中，约70% 90%的血清中和约60%的滑膜液中可检出IgG类RF；,二、类风湿因子测定,IgG类抗体与相应抗原结合后，即发生变性； 在炎症过程中也可发生IgG变性，构成自身抗 原，刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体； 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合形成中等 大小的IC，比血清中IgM类RF更易致病。,（一）RF检测方法,RF检测最常采用的试验方法。 将IgG吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上作为诊断试剂，与待检血清中的RF结合，出现胶乳凝集颗粒。但此法的灵敏度和特异性均不高，而且只能检出血清中的IgM类RF。,间接胶乳凝集试验,将待检血清稀释成一定浓度，再加入定量变性IgG诊断试剂，立即用透射比浊或速率散射比浊仪测定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（达ng/L水平）、精密度高（CV5%）、稳定性好、能定量分析的优点，但仍局限在IgM类RF的检测。,免疫比浊法,IgM、IgG和IgA类RF需要用RIA法或ELISA法等方法检测，但前者有放射性污染，故临床上多采用ELISA间接法或双抗原夹心法进行测定。,ELISA法,（二）临床应用,RF在诊断RA患者时并非特异的，也非唯一标准。慢性活动性肝炎及老年人均可有不同程度的阳性率。,三、其他自身抗体测定,返回章目录,1.筛选试验与确诊性试验的合理组合；2.结合临床症状选择性检测相关的自身抗体；3.切忌盲目的全面检测自身抗体。4.通常以抗核抗体作为筛选试验，ANA在许多AID中 可呈阳性。5.ANA阳性时，再进行针对特异性靶抗原成分的自身 抗体的检测，达到明确诊断的目的。,第三节 自身抗体的检测实验选择的原则,一、自身抗体检测的一般原则,二、实验室方法的选择及结果的确认,IIF法,筛选试验,ANA,抗dsDNA,IB法ELISA法IFA法,特异性实验,抗原基质片(Hep-2细胞、小鼠肝印片/切片)，加入自身抗体后与抗原成分相结合，再与荧光标记的抗抗体结合，根据荧光在细胞上的着色部位进行定位分析。,特异性纯化抗原包被载体，检测特异性自身抗体；特异性抗原不易纯化或不明确，用ELISA法和IBT法等检测自身抗体会有一定误差。,返回章目录,小 结,自身免疫病是由于某种原因使自身免疫应答过强或持续时间过久，表现为质和量的异常，所产生的自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细