二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析

药物分析,AHTCM,钙通道阻止药物的分析,二氢吡啶类,目录：,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,二、鉴别实验,三、有关物质与检查,四、含量测定,学习要求：,1.掌握 二氢吡啶类药物的基本结构及主要的理化性质；结构、性质与分析方法间的关系；铈量法测定二氢吡啶类药物含量的原理、方法及注意事项。,2.熟悉 二氢吡啶类药物的化学鉴别反应及有关物质检查的方法。,3.了解 二氢吡啶类药物其他鉴别试验及含量测定方法。,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,吡啶的结构：,二氢吡啶类药物的母核结构：本类药物均含有苯基-1,4二氢吡啶的母核.,（一）、结构,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,二氢吡啶类药物的基本骨架：,为活性必需，变成吡啶环或六氢吡啶环活性消失,为活性必需，若为乙酰基或氰基活性降低，若为硝基则激活钙通道,邻、间位有吸电子基团活性较佳，对位取代活性下降,取代基与活性关系次序：H 甲基环烷基苯基或取代苯基,影响作用部位，5,6位取代酯基不同，为手性中心。,（一）、结构,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,常见二氢吡啶类药物结构与物理性质：,白色或白粉末。在甲醇或N,N-二甲基酰胺中易溶，在乙醇中略溶，在水或丙酮中微溶,苯磺酸氨氯地平（Amlodipine Besylate）,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,非洛地平（Felodipine),伊拉地平（Isradipine),白色至淡黄色结晶或结晶性粉末；无臭；遇光不稳定。在丙酮、甲醇或乙醇中易溶，在水中几乎不溶。熔点141145,黄色结晶性粉末。在丙酮中易溶，在甲醇中溶解，在水中几乎不溶。熔点约168,常见二氢吡啶类药物结构与物理性质：,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,拉西地平（Lacidipine),硝苯地平（nifedipine),白色至淡黄色结晶性粉末；在丙酮中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中几乎不溶。熔点约178,黄色结晶性粉末；无臭；遇光不稳定。在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶。熔点171175,常见二氢吡啶类药物结构与物理性质：,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,尼伐地平（Nilvadipine),尼莫地平（nimodipine),黄色结晶性粉末。在乙腈中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶熔点167171,淡黄色结晶性粉末或粉末；无臭；遇光不稳定。在丙酮、三氯甲烷或者乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中几乎不溶解熔点124128,常见二氢吡啶类药物结构与物理性质：,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,黄色结晶性粉末；无臭；遇光不稳定。在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶熔点148152,黄色结晶或结晶性粉末；无臭；遇光易变质。在丙酮或三氯甲烷中易溶，在甲醇或乙醇中略溶，在水中几乎不溶。熔点157161,尼索地平（nisoldipine),尼群地平（nitrendipine）,常见二氢吡啶类药物结构与物理性质：,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,（二）、主要理化性质,1. 二氢吡啶环的还原性 二氢吡啶环，具有还原性，可用氧化还原反应鉴别和氧化还原滴定法进行含量测定。,2. 硝基的氧化性 苯环上大多有硝基，具有氧化性，可被还原剂还原为芳伯氨基，可用重氮化-偶合反应鉴别。,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,3. 二氢吡啶环氨基质子解离性 二氢吡啶类药物与碱作用后，二氢吡啶环1,4-位氢可以发生解离，形成共轭环发生颜色变化，可以进行鉴别。,（二）、主要理化性质,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,4. 稳定性 二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学反应，因此要避光保存此类药物,5. 旋光性 本类药物的C4位多为手性碳原子，具有旋光性。,（二）、主要理化性质,一、二氢吡啶类药物的结构与性质,6. 吸收光谱特性 本类药物具有芳环，有明显的紫外吸收特征和红外特征。,（二）、主要理化性质,二、鉴别实验,1.与亚铁盐的反应如尼莫地平的鉴别（ChP2015） ：取本品20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液2ml，1.5mol/L硫酸1滴与0.5mol/L氢氧化钾溶液1ml，强烈振摇，1分钟内沉淀由灰绿色变为红棕色。,苯环硝基的氧化性，可将Fe(OH)2氧化成Fe(OH)3(红色沉淀）,（一）、化学鉴别法,二、鉴别实验,丙酮溶液+NaOH如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2015）,橙红色溶液,药物被碱水解后，水解后的苯基-1,4二氢吡啶基团溶于丙酮呈现橙红色。,硝苯地平的鉴别ChP2015 ： 取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠溶液35滴，振摇，溶液显橙红色。,2.与NaOH试液反应,（一）、化学鉴别法,二、鉴别实验,本类药物含有1,4-二氢吡啶结构，可与重金属盐类形成沉淀。,尼莫地平+HgCl2,白色沉淀,尼群地平+KBiI4,橙红色沉淀,尼莫地平注射液的鉴别ChP2015 ： 取本品适量（约相当于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振摇提取，静置，分取乙醚层，置水浴上蒸干，放冷，残渣加乙醇2ml，搅拌使溶解，移至试管中，加1%氯化汞溶液3ml，即发生白色沉淀。,3.沉淀反应,（一）、化学鉴别法,二、鉴别实验,如硝苯地平的鉴别（BP2015） ：取本品25mg,加10ml-水-乙醇混合溶液（1.5：3.5：5），温热，加入锌粒0.5g，放置5分钟，滤过，滤液加亚硝酸钠试液（10g/L）5ml,放置2分钟，再加入氨基磺酸胺溶液（5g/L） 2ml,摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L） 2ml,即显红色。,苯环硝基具有氧化性，在酸性条件下可被锌粉还原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反应进行鉴别。,4.重氮化-偶合反应,（一）、化学鉴别法,二、鉴别实验,1.紫外分光光度法：本类药物具有芳香环，有强烈的紫外吸收。因此可用UV进行鉴别。,(二)、分光光度法,如尼群地平软胶囊的鉴别（ChP2015)：避光操作。取本品的内容物约1g，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释置刻度，摇匀，取10ml,置100量瓶中，用无水乙醇稀释置刻度，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在353nm与303nm的波长处分别测定吸光度，在353nm与303nm的吸光度比值应为2.1-2.3。,二、鉴别实验,(二)、分光光度法,2.红外分光光度法,二、鉴别实验,基于二氢吡啶类药物具有不同的分子结构，其色谱行为有所差别，可用于分离鉴别。.HPLC尼群地平片的鉴别：供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。,.TLC如硝苯地平的鉴别：对照品和供试品固定相：硅胶F254薄层板上流动相：乙酸乙酯-环己烷（40：60） 检查：紫外光灯（254nm）下检查。,BP2015硝苯地平的鉴别： 取本品加甲醇制成每1ml 中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每1ml 约含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶F254薄层板上，以乙酸乙酯-环己烷（4060）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。,(三)、色谱法,三、有关物质与检查,二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法，亦可采用TLC法,1.硝苯地平中有关物质的检查,2.苯磺酸氨氯地平中的有关物质的检查,三、有关物质与检查,1.硝苯地平中有关物质的检查,硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：,杂质I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯杂质II：2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯,三、有关物质与检查,具体方法（P259-260） 1.供试液和的制备 2.有关杂质对照品液和的制备 3.色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶; 流动相：甲醇-水60:40）； 检测波长：235nm。结果：按外标法以峰面积计算，均不得超过0.1%，其他单个杂质的峰面积不得大于对照品溶液中硝苯地平峰面积，杂质总量不得过0.5%。,1.硝苯地平中有关物质的检查,三、有关物质与检查,2.苯磺酸氨氯地平中的有关物质的检查,苯磺酸氨氯地平在光照和氧化剂存在条件下光催化氧化将二氢吡啶芳构化成氧化物杂质：2-(2-氨基乙氧基）甲基）-4-（2-氯苯基）-6-甲基-吡啶-3-羧酸乙酯-5-羧酸甲酯，对人体极为有害。因此ChP2015、USP38苯磺酸氨氯地平下分别采用TLC（正相）和HPLC（反相）进行有关物质的检查；BP2015、EP8.0、JP16均规定采用HPLC进行有关物质的检查。,四、含量测定,二氢吡啶类药物具有还原性，可用铈量法测定该类药物的含量。铈量法简介：也称为硫酸铈法，是以Ce(SO4)2为标准溶液的氧化还原滴定法。,1.铈量法,优点：.以Ce(SO4)2标准溶液稳定，长时间放置、曝光、加热不会引起浓度的变化。.Ce4+还原为Ce3+是单电子转移，不是生成中间价态，反应简单，副反应少。.大部分有机物不与Ce(SO4)2作用，不干扰测定。.特别适用于糖浆剂以及片剂等制剂药物的测定。,终点指示：.Ce4+为黄色，Ce3+为无色， Ce4+可自身作为指示剂，但不够灵敏。.常用邻二氮菲作为指示剂，即稍过量的Ce4+将指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。,四、含量测定,如硝苯地平的测定测定原理：可用下列反应式表示：,终点时（邻二氮菲-Fe(II)指示剂）:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。,如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用该法定量。（ChP2015）,1.铈量法,四、含量测定,ChP2015硝苯地平的含量测定：取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微温使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，消耗滴定液；并将滴定的结果用空白试验校正,消耗滴定液0.14mL。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。,含量计算公式：,1.铈量法,四、含量测定,2.紫外-可见分光光度法,尼群地平软胶囊的含量测定（ ChP2015）：避光操作，取本品10粒置小烧杯中，用剪刀剪破嚢壳，加无水乙醇少量，振摇使溶解后，将内容物与嚢壳全部转移至具塞锥形瓶中，用无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯，洗液并入锥形瓶中，将锥形瓶密塞，置40水浴中加热15分钟，并时时振摇，将内容物移入100ml量瓶中，用无水乙醇反复冲洗嚢壳和锥形瓶，洗液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（ChP2015通则0401）在353nm处的波长处测定吸光度；灵渠尼群地平对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并定量稀释制成没1ml中约含20g的溶液，同法测定，计算，即得。,四、含量测定,3.高效液相色谱法,ChP2010尼莫地平分散片（2mg/片）的含量测定：色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（353827）为流动相；检测波长为235nm。理论板数按尼莫地平峰计算不低于8000，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。,测定法： 避光操作。取本品20片，精密称定为3.9882g，研细，精密称取1.0012g(约相当于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理15分钟使尼莫地平溶解，放冷；用流动相稀释至刻度，摇匀，离心10分钟(每分钟3