fish在乳腺癌种的应用课件资料

【概念及原理】荧光原位杂交技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术，其原理是采用荧光标记的DNA探针，利用探针与被检测样本中DNA碱基对的互补性，在探针与样本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体或基因异常。【原理图】【技术特点】1操作简单、检测快速、结果易于观察2重复性好、空间定位精准3灵敏度和特异性高乳腺癌HER2基因检测相关资料介绍预览HER2基因扩增检测试剂盒1乳腺癌的流行病学乳癌是女性常见的恶性肿瘤之一，欧美为高发地区，流调学显示欧美的发病率在6080/10万左右，位列女性恶性肿瘤发生的第一位，且发病率在逐年上升。而乳癌的死亡率大约占女性恶性肿瘤死亡的15左右，仅次于肺癌（25）。我国的乳癌发病率在20/10万左右，在女性恶性肿瘤中位列第三位，而且发病率也成逐年上升的趋势。在一些大城市如上海，1999年的调查显示，乳癌的发病率已经达到529/10万。因此，乳癌是威胁女性健康的重要恶性疾病12。2HER2与乳腺癌在最近的20年中，乳癌的治疗疗效发生了根本性的变化。一些研究显示，尽管乳癌的发生率仍在上升，但在一些地区已经可以观察到乳癌患者的死亡率在逐年下降3。这与新的治疗理念如剂量强度和剂量密度以及新的治疗药物如紫杉在临床上的应用是密切相关的。这都使得患者的远期生存较以前得到了明显的改善4。不仅如此，随着分子生物学的发展，人们认识到一些信号传导通路在乳癌的发生发展以及对治疗疗效的影响中也起着重要的作用。这其中最主要的就是EGFR家族。EGFR是表达在上皮来源组织细胞表面的一种受体，家族中共有4位成员，分别位HER1、HER2、HER3和HER4，属于酪氨酸激酶受体家族。基础研究显示，这些受体通过同源二聚或异源二聚的方式发生偶联，使受体胞内部分的酪氨酸激酶激活，导致下游的蛋白发生磷酸化，从而发挥调控细胞增殖以及血管生成等作用。而在部分乳癌患者中，上述蛋白表达是明显增加。其结果就使得该信号传导通路被明显激活，从而促进肿瘤的发生发展。3检测HER2的临床意义31HER2扩增的患者预后更差HER2基因的过表达除了与肿瘤的发生发展有关外，还是一个重要的临床预后指标5。有研究显示，具有HER2基因过表达的患者OS和DFS较短，而且这部分患者就诊时的肿瘤负荷更大，淋巴结转移的几率更高，激素受体阴性的比例更高，组织学分级更差，肿瘤的增殖指数更高，复发风险更高6。32正确判断HER2状态可以辅助临床选择更适合病人的内分泌治疗药物，以及选择疗效最佳的辅助化疗药物，做到合理用药研究显示，相对于无HER2基因扩增的乳癌患者而言，具有HER2基因扩增的患者应用受他莫昔芬TAM治疗后的死亡风险明显增高。提示具有HER2基因扩增的患者可能不适合应用TAM作为内分泌治疗的选择10。对ER阳性的绝经后患者,HER2阳性者,来曲唑的疗效明显高于TAM。来曲唑对HER2阳性患者的疗效优于阴性患者TAM则相反,对HER2阴性患者的疗效明显高于阳性患者10。HER2/NEU扩增的乳腺癌患者对CMF化疗方案的反应性降低；对HER2/NEU扩增的患者,宜采用高剂量强度的蒽环类药物方案；HER2阳性的乳腺癌患者对紫杉醇化疗的反应性明显高出HER2阴性的患者7。33HER2扩增的患者能明显受益于靶向治疗药物HERCEPETIN2002年美国FDA批准了一种全新的药物HERCEPTIN。到目前为止，已经有多篇关于该药物临床应用的期随机对照研究。结果表明，无论是与常规化疗联合用于乳癌患者的辅助治疗，还是用于辅助治疗后的维持治疗，以及用于晚期乳癌患者的单药或联合治疗，都能肯定的改善HER2过表达患者的生存，使乳癌患者在上述常规治疗进步的基础上进一步获益89。在该药物的临床应用过程中，对HER2基因的检测是至关重要的。因为该药物对那些具有基因扩增的患者具有良好的治疗效果，而对于低度扩增或者是不扩增的患者疗效不理想。34FISH技术检测HER2状态结果客观准确，为检测HER2状态的金标准17号染色体非整体性即每个细胞中17号染色体数多于多体性或少于单体性或亚二性2个，是乳腺癌的遗传学特征之一。而这种非整体形会造成一部分的病人免疫组化检测（IHC）的假阳性结果，这样的病人在使用HERCEPTIN时效果并不理想。FISH检测技术加入了17号染色体着丝粒探针作为对照探针，因此能明确检测出患者肿瘤细胞的倍体性，避免了HER2扩增是由于17号染色体非整体性造成的假阳性结果11。4结语综上所述，HER2在乳癌患者的诊疗过程中起着重要的作用，它不仅可以用于估计患者的远期预后，还可以指导乳癌治疗的药物选择。因此，目前对于就诊的乳癌患者都常规行HER2基因或其表达蛋白的检测。国外的资料显示，在乳癌患者中，大约有2530的患者会有HER2蛋白的高表达，而这其中9095的蛋白高表达是由于HER2/NEU基因的扩增引起的。因此，临床上无论是检测肿瘤细胞表面的蛋白表达，还是检测细胞内基因的扩增，理论上都是可以指导临床的。TOP2A基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称乳腺癌GLPTOP2A/CSP17红/绿TOP2A17Q211CSP1717P111Q111TOP2A基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）临床意义乳腺癌是妇女中常见的恶性肿瘤之一，在西方国家其发病率和病死率居肿瘤之首。近年来，在我国发病率也呈直线上升的趋势。研究表明，对于HER2扩增阳性的乳腺癌患者，使用赫赛汀后会得到更好的预后效果，并且，使用大剂量蒽环类药物的治疗效果要优于常规剂量的治疗效果。由于TOP2A基因也定位与17Q染色体，并且与HER2基因相隔很近，而且，TOP2A基因所编码的蛋白拓扑异构酶II是蒽环类抗生素的靶酶，因此有推断称使用TOP2A基因状态来预测患者对含蒽环类药物治疗方案，更为准确2。在对晚期乳腺癌的研究中发现,TOPO的基因表达和肿瘤细胞对拓扑异构酶抑制剂的敏感性明显相关10TOP2A基因异常的病人可以明显受益于含有拓扑异构酶抑制剂的辅助化疗方案。TOP2A扩增的病人使用CEF方案进行治疗可以降低61的复发风险和51的死亡风险，而没有TOP2A扩增的患者使用CEF方案只能降低6的复发风险和10的死亡风险11。而且，且TOP2A基因异常的病人预示着更短的无复发生存期（RECURRENCEFREESURVIVAL，RFS）但总生存期并无改变，TOP2A缺失的病人预后更差11。因此，检测乳腺癌患者肿瘤组织中TOP2A基因状况可以2对患者预后风险进行判断。TOP2A基因异常的病人预示着更短的无复发生存期（RECURRENCEFREESURVIVAL，RFS），TOP2A缺失的病人预后更差11。2指导临床使用含蒽环类的辅助化疗药物，存在TOP2A基因异常（缺失或扩增）的患者，使用蒽环类治疗方案效果要好于使用非蒽环类治疗方案一、背景介绍1流行病学介绍乳腺癌MAMMARYCARCINOMA是人类最常见的一种恶性肿瘤，也是女性主要恶性肿瘤之一。各国因地理环境、生活习惯的不同，乳腺癌的发病率有很大差异。北美和北欧大多数国家是女性乳腺癌的高发区，南美和南欧一些国家为中等，而亚洲、拉丁美洲和非洲的大部分地区为低发区。在北美、两欧等发达国家，女性乳腺癌的发病率居女性恶性肿瘤发病率的首位。据美国癌症协会估计，美国每年有12万乳腺癌新发病例，发病率为72210万，。乳腺癌在我国各地区的发病率也不相同，在世界上我国虽属女性乳腺癌的低发国。但近年来乳腺癌的发病率明显增高。尤其沪、京、津及沿海地区是我国乳腺癌的高发地区。美国癌症协会估计，2004年美国新诊断乳腺癌患者病例约217440例，有近40580患者将死于该病。在美国乳腺癌是最常见的妇女恶性肿瘤，在癌症死因中仅次于肺癌，居第二位。过去几十年里，美国乳腺癌的发生率稳步增长，但其死亡率却逐步下降。这得益于对乳癌的早期发现和更有效的治疗。乳腺癌是妇女中常见的恶性肿瘤之一，在西方国家其发病率和病死率居肿瘤之首。近年来，在我国发病率也呈直线上升的趋势。目前浸润性乳腺癌已被视为全身性疾病。其预后的判断及与预后相关的生物学标志物备受关注。由于许多患者存在着亚临床转移灶，以及化疗耐药的出现，导致患者无瘤生存期缩短，所以检测有关乳腺癌耐药相关基因，对指导规范化治疗尤为重要1。2乳腺癌的临床分级根据治疗方法，乳腺癌可分为1）单纯非浸润性癌包括导管原位癌（DCIS）和小叶原位癌（LCIS）（0期）；2）可手术治疗的局部浸润性癌（临床I、II期和部分IIIA期肿瘤）；3）不能手术治疗的局部浸润性癌（临床IIIB、IIIC期和部分IIIA期肿瘤）；4）转移性或复发性肿瘤（IV期）。3乳腺癌的治疗概括地说，乳腺癌的治疗手段包括对局部病灶进行手术治疗、放射治疗，或两者联合，以及对全身性疾病进行细胞毒化疗、内分泌治疗、生物治疗或以上手段的联合应用。对各种全身和局部治疗手段的需求和选择要依据多种预后和预测因素来判断。这些因素包括肿瘤组织学特征、原发肿瘤的临床和病理学特征、腋窝淋巴结状况、肿瘤激素受体水平和HER2状态、有无可检测到的转移病灶、合并症情况、患者的年龄以及绝经状态。研究表明，对于HER2扩增阳性的乳腺癌患者，使用赫赛汀后会得到更好的预后效果，并且，使用大剂量蒽环类药物的治疗效果要优于常规剂量的治疗效果。由于TOP2A基因也定位与17Q染色体，并且与HER2基因相隔很近，而且，拓扑异构酶II是蒽环类抗生素的靶酶，因此有推断称使用TOP2A基因状态来预测患者对含蒽环类药物治疗方案，更为准确2。4DNA拓扑异构酶的结构、分布及功能在生物体的整个生命过程中，细胞遗传物质DNA起着十分重要的作用。但是，DNA的超长度和双螺旋性质使其在复制和重组期间经常缠绕，阻碍DNA的复制、转录和重组等。DNA拓扑异构酶DNATOPOISOMERASE是生物体内广泛存在的一类重要的核酶，是核基质成分之一，在核内发挥作用。它可催化单链或双链DNA断开和结合的偶联反应，从而改变DNA的拓扑结构。DNA拓扑异构酶的生物学作用可以两种方式体现一是调节控制DNA的超螺旋状态及打结或解结DNA的环连体状态，从而间接地影响细胞内核酸代谢过程。二是直接参与那些需打断并重新连接DNA分子链的细胞过程，DNA的重组、修复、转录及复制过程。此外拓扑酶还参与转导、姊妹染色体互换、分离等生物过程3、4。DNA拓扑异构酶不仅对细胞的正常生命活动至关重要，而且在肿瘤发生、发展以及疗效等方面均扮演重要角色。肿瘤细胞内TOPO的过表达与化学药物的选择也密切相关，因此为了提高化学治疗效果，人们对它的研究十分重视5。根据DNA链断裂反应过程中产生断口性质的不同，DNA拓扑异构酶可分为两类I类DNA拓扑异构酶TOPOI引起DNA糖磷酸骨架上的单链DNA的断裂；而类DNA拓扑异构酶TOPOII,主要引起双链DNA的断裂。其中TOPO包含、2个亚单位4。在基因和蛋白质的结构方面，TOPO、两种同功酶基本相似。TOPO基因（TOP2A）由36KB碱基对构成，有35个外显子；TOPO由49KB碱基对，含36个外显子。TOPO在染色体上的定位及其物理图谱详见下图5TOP2A与HER2/NEU基因的相关性TOP2A和HER2/NEU原癌基因在染色体上的位置非常邻近，均定位于17Q11222区域。研究证实，在乳腺癌中TOP2A和HER2/NEU这两种基因的扩增或缺失有一定的相关性。HER2/NEU是人类肿瘤中发生改变频率最高的癌基因之一。其与乳腺癌的发生、发展关系密切，约在2030的乳腺癌组织中可以检测到该基因的扩增和过表达。在乳腺癌中，HER2/NEU基因扩增又与其邻近位点上的TOP2A基因改变呈正相关。当HER2/NEU基因在乳腺癌中过度表达时，通过多种途径参与跨膜信号的转导及促进细胞的增殖，这可能是TOP2A基因扩增的原因。研究表明，对于HER2扩增阳性的乳腺癌患者，使用赫赛汀后会得到更好的预后效果，并且，使用大剂量蒽环类药物的治疗效果要优于常规剂量的治疗效果6。由于TOP2A基因也定位与17Q染色体，并且与HER2基因相隔很近，而且，拓扑异构酶II是蒽环类抗生素的靶酶，因此有推断称使用TOP2A基因状态来预测患者对含