结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究

结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究中图分类号R89R36R39硕士学位论文结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究院系所临床医学院研究生姓名罗志华学科专业神经病学导师姓名李作孝教授二一二年四月目录1结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究111中文摘要112英文摘要313前言514材料与方法715结果1216讨论2417结论3018参考文献3119英汉缩略词对照表352致谢363结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究综述39结合珠蛋白在脑出血后脑水肿形成中抑制作用的研究摘要目的研究已证实脑出血ICHINTERCEREBRALHEMORRHAGE后血肿中红细胞溶解释放的血红蛋白HBHEMOGLOBIN及HB降解产物在脑出血后脑水肿形成中起着重要作用结合珠蛋白HPHAPTOGLOBIN是血液中重要成分可与HB结合形成紧密的非共价复合物HBHP使HB降解受抑制据此推测HP在脑出血后脑水肿形成中具有抑制作用本课题拟通过在SD大鼠脑内研究自体全血中去除或外加HP后对实验性ICH模型血肿中HB及其代谢产物含量变化及其与血肿周围脑组织含水量血脑屏障变化炎性细胞因子含量自由基形成的关系方法将100只200250G成年健康雄性SD大鼠随机分成四组假手术组25只ICH组25只HP去除组25只HP干预组25只假手术组ICH对照组HP去除组断尾取血100UL采用亲和层析法去除HP采用立体定向大鼠尾状核注入去除HP后的自体全血50UL制作HP干预组断尾取血100UL加入100UL所需HP冻干粉相应量采用立体定向大鼠尾状核注入外加HP后的自体全血50UL制作按上述不同术后时间断颈处死大鼠仔细分离大脑及血肿标本进行相应处理观察上述四组不同时间血肿中HB及HB降解产物血红素CO铁离子胆红素含量变化采用免疫组化分析及分光光度法观察脑组织含水量的变化观察脑组织自由基SODMDA含量变化观察上述四组不同时间血肿周围脑组织炎性细胞因子IL1IL6TNFA含量变化观察上述四组不同时间血肿周围脑组织血脑屏障病理变化采作光镜和电镜观察结果1假手术组在术后各时点神经功能障碍评分脑组织含水量HB及其降解产物含量IL6IL1TNFASODMDA含量均未见明显异常2ICH对照组HP去除组神经功能障碍评分和SOD活力显著高于假手术组脑组织含水量HB及其降解产物含量IL6IL1TNFAMDA含量显著低于假手术组3HP干预组神经功能障碍评分和SOD活力显著高于ICH对照组HP去除组而脑组织含水量HB及其降解产物含量IL6IL1TNFAMDA含量显著高于假手术组结论1ICH后大鼠出现明显神经功能损害脑组织含水量增加出现血肿周围脑组织水肿炎性细胞浸润炎性细胞因子产生自由基大量生成MDA含量明显升高SOD活力明显下降2ICH后3天红细胞大量溶解脑水肿达高峰血肿周围脑组织FE含量血红素含量UCB含量和CO含量显著并且持续升高脑水肿消退后血肿周围脑组织仍有FE血红素UCB和CO蓄积3HP治疗ICH大鼠能显著改善其神经缺失症状减轻脑水肿降低MDA含量提高SOD活力HP低表达时加剧ICH引起的脑损伤HP缺乏时会使脑损伤恶化而HP的过度表达则减轻ICH介导的脑损伤4HP对ICH后脑水肿及脑损伤具有脑保护作用其机制可能与其降低脑FE含量血红素含量UCB含量和CO含量含量从而减轻脑组织氧化损伤有关关键词脑出血脑损伤结合珠蛋白HAPTOGLOBININHIBITIONOFTHEFORMATIONOFBRAINEDEMAAFTERICHABSTRACTOBJECTIVESTUDYHASCONFIRMEDTHATINTRACEREBRALHEMORRHAGEREDBLOODCELLSDISSOLVEDINTHERELEASEOFHEMOGLOBINHBANDHBDEGRADATIONPRODUCTSPLAYANIMPORTANTROLEINTHEFORMATIONOFBRAINEDEMAAFTERICHHAPTOGLOBINHPISANIMPORTANTCOMPONENTINTHEBLOODANDHBTOFORMTIGHTNONCOVALENTCOMPLEXESHBOFHPHBDEGRADATIONWASINHIBITEDTHISSUGGESTSTHATHPINHIBITEDTHEFORMATIONOFBRAINEDEMAAFTERICHTHISSUBJECTISINTENDEDTOREMOVEORPLUSAFTERHPHBANDITSMETABOLITECONTENTINEXPERIMENTALINTRACEREBRALHEMORRHAGEMODELHEMATOMAANDHEMATOMASURROUNDINGBRAINTISSUEWATERCONTENTBLOODBRAINBARRIERCHANGESINTHESDRATBRAINSTUDIESOFAUTOLOGOUSWHOLEBLOODINFLAMMATORYCYTOKINESTHERELATIONSHIPBETWEENFREERADICALFORMATIONAIMOFHPINTHEEFFECTANDMECHANISMOFTHEFORMATIONOFBRAINEDEMAAFTERICHTHEPATHOPHYSIOLOGICALMECHANISMSOFCEREBRALBLEEDINGANDLOOKINGFORNEWTREATMENTSOFGREATSIGNIFICANCEMETHODS100200250GADULTMALESDRATSWERERANDOMLYDIVIDEDINTOFOURGROUPSSHAMGROUP25CEREBRALHEMORRHAGE25HPREMOVALGROUPN25INTHEINTERVENTIONGROUP25HPEACHGROUPWASDIVIDEDINTOTHEPOSTOPERATIVE1D3D7D14D21DOFFIVESUBGROUPSEACHSUBGROUPOF5SHAMOPERATIONGROUPTHESTEREOTACTICRATCAUDATENUCLEUSINJECTEDWITHSALINE50ULPRODUCTION2PATIENTSWITHCEREBRALHEMORRHAGETHESTEREOTACTICRATCAUDATENUCLEUSINJECTIONOFAUTOLOGOUSWHOLEBLOOD50ULPRODUCTIONHPREMOVEGROUP100ULTAILSTOTAKEBLOODAFFINITYCHROMATOGRAPHYREMOVALOFHPSTEREOTACTICRATCAUDATENUCLEUSINJECTIONTOREMOVE50ULPRODUCTIONAFTERHPAUTOLOGOUSWHOLEBLOODTHEINTERVENTIONGROUPOFHPTAILBLOOD100ULBYADDINGTHEAPPROPRIATEAMOUNTTHE100ULREQUIREDFORHPLYOPHILIZEDPOWDERSTEREOTACTICCAUDATENUCLEUSOFRATSINJECTEDPLUSHPAUTOLOGOUSWHOLEBLOOD50ULPRODUCTIONACCORDINGTOTHEDIFFERENTTIMEBROKENNECKAFTERRATSWERESACRIFICEDANDTHECAREFULSEPARATIONOFTHEBRAINANDHEMATOMASAMPLESANDDEALTWITHACCORDINGLY1OBSERVATIONOFTHECONTENTOFHBANDHBDEGRADATIONPRODUCTSHEMOGLOBINCOIRONBILIRUBININTHEFOURGROUPSATDIFFERENTTIMESHEMATOMACHANGEDIMMUNOHISTOCHEMICALANALYSISANDSPECTROPHOTOMETRYTHECHANGESINTHEFOURGROUPSATDIFFERENTTIMESHEMATOMASURROUNDINGBRAINTISSUEWATERCONTENTWETANDDRYMETHODFORTHEDETERMINATIONOFWATERCONTENTWETWEIGHTDRYWEIGHTWETWEIGHT1003OBSERVETHEFOURGROUPSATDIFFERENTTIMESPERIHEMATOMARADICALSODMDACONTENTRESPECTIVELYWITHHYDROXYLAMINETHETBAMETHODOBSERVEDTHEFOURGROUPSOFDIFFERENTTIMEPERIHEMATOMAINFLAMMATORYCYTOKINESIL1BIL6TNFACONTENTCHANGEBYRADIOIMMUNOASSAYTHEOBSERVEDTHEFOURGROUPSOFDIFFERENTTIMEPERIHEMATOMABLOODBRAINBARRIERPATHOLOGICALCHANGESMININGFORLIGHTANDELECTRONMICROSCOPYRESULTSANEUROLOGICALDYSFUNCTIONAFTERPOINTSCOREFORTHESHAMOPERATIONGROUPBRAINWATERCONTENTHBANDITSDEGRADATIONPRODUCTSCONTENTOFIL6IL1TNFATHEACTIVITIESOFSODMDACONTENTSHOWEDNOOBVIOUSABNORMALITIESTWOICHCONTROLGROUPHPREMOVETHEGROUPOFNEUROLOGICALDYSFUNCTIONSCOREANDSODACTIVITYWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANSHAMOPERATIONGROUPBRAINTISSUEWATERCONTENTHBANDITSDEGRADATIONPRODUCTCONTENTIL6IL1TNFATHECONTENTOFMDAWASSIGNIFICANTLYLOWSHAMOPERATIONGROUP3HPINTERVENTIONGROUPOFNEUROLOGICALDYSFUNCTIONSCOREANDSODACTIVITYWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANICHINTHECONTROLGROUPHPREMOVETHEGROUPBRAINTISSUEWATERCONTENTOFHBANDITSDEGRADATIONPRODUCTCONTENTIL6IL1TNFAMDACONTENTWASHIGHERTHANTHESHAMGROUPCONCLUSION1INTERNATIONALCONFERENCEONHARMONISATIONICHAFTERTHERATSHADSIGNIFICANTNEUROLOGICALDAMAGEINCREASEDWATERCONTENTOFBRAINTISSUEAROUNDTHEHEMATOMAANDEDEMAINFLAMMATORYCELLINFILTRATIONOFINFLAMMATORYCYTOKINESFREERADICALSGENERATEDALOTOFTHECONTENTOFMDASIGNIFICANTLYINCREASEDTHEACTIVITYOFSODDECREASEDSIGNIFICANTLYTHEICHAFTER3DAYSREDBLOODCELLSALARGENUMBEROFDISSOLUTIONCEREBRALEDEMAREACHEDAPEAKTHEFECONTENTOFBRAINTISSUEAROUNDTHEHEMATOMAHEMOGLOBINCONTENTUCBCONTENTANDCOCONTENTSIGNIFICANTLYANDCONTINUESTORISEARESTILLOFFEHEMATOMAAFTERCEREBRALEDEMASURROUNDINGBRAINTISSUEBLOODREDFACTORSUCBANDCOACCUMULATIONEXACERBATEICHINDUCEDBRAINDAMAGEHPTREATMENTOFICHRATSCANSIGNIFICANTLYIMPROVETHESYMPTOMSOFNEUROLOGICALDEFICITCEREBRALEDEMADECREASEDMDACONTENTANDINCREASEDSODACTIVITYOFHPWITHLOWEXPRESSIONOFHPLACKOFBRAINDAMAGEWILLDETERIORATEWHILETHEHPOVEREXPRESSIONREDUCEDTHEICHMEDIATEDBRAINDAMAGE4HPCEREBRALPROTECTIVEEFFECTOFICHBRAINEDEMAANDBRAINDAMAGEMECHANISMMAYBERELATEDTOLOWERBRAINFECONTENTHEMOGLOBINCONTENTUCBCONTENTANDCOCONTENTINTHECONTENTTHEREBYREDUCINGTHEOXIDATIVEDAMAGEOFBRAINTISSUEKEYWORDSCEREBRALHEMORRHAGEBRAINDAMAGEHAPTOGLOBIN前言脑出血INTRACEREBRALHEMORRHAGEICH是原发性非外伤性脑实质内出血在脑卒中是一种常见且严重的类型ICH约占脑卒中的1020其病死率高达4070在亚洲可达30存活者绝大部分都残留有严重的神经功能障碍目前研究认为红细胞溶解后的代谢产物与ICH后的迟发性脑水肿和13继发性脑损伤密切相关注入完整的RBC72小时后才出现明显的水肿从而提示HB与迟发性脑水肿有关HP亦即触珠蛋白是血清A球蛋白组分中的一种酸性糖蛋白HB是血液的2重要组成部分分子量64500其结构为4个亚基的聚合体每个亚基由一条蛋白质链和一个血红素分子组成HP的主要功能是能与红细胞中释出的自由形式存在的HB结合每分子HP可以结合两分子的HB游离HB在体内分解为二聚体通过与HP结合形成紧密的非共价复合物HBHP并经网状内皮系统清除因此HB与HP结合后形成紧密的非共价复合物HBHP从而使HB降解受抑制研究证实ICH后脑组织表达HP明显增加认为在抑制脑出血后脑水肿形成有45明显作用我们前期进行的预试验证实HP在ICH后脑水肿形成过程中具有抑制作用于HP能否通过与HB结合形成紧密的非共价复合物HBHP而抑制HB进一步降解为血红素铁离子一氧化碳和胆红素HP能否发挥对HB及其降解产物的细胞毒性脑水肿的抑制作用查阅文献目前国内外尚无报道本课题拟通过在SD大鼠脑内研究自体全血中去除或外加HP后对ICH后不同时间血肿中HB与HB代谢产物含量变化的影响及其与血脑屏障变化血肿周围脑组织含水量自由基形成炎性细胞因子含量的关系目的在于探讨HP在ICH后脑水肿形成中的抑制作用及机制材料与方法1实验材料与仪器11实验动物健康雄性SD大鼠100只体重250300G泸州医学院动物中心提供12动物饲养2主要实验试剂大鼠HP冻干粉上海亚培生物科技有限公司NADPH细胞色素P45还原酶中久科技上海有限公司血红素加氧酶武汉新启迪生物科技有限公司SOD试剂盒上海建成生物工程研究所提供MDA试剂盒上海建成生物工程研究所提供血红素检测试剂盒北京优维宁公司提供IL1IL6TNFA仅试剂盒上海普尔伟业生物科技有限公司提供3主要实验仪器WDTV型大鼠脑立体定向仪西安西北光电仪器厂50UL微量进样器浙江宁波市镇海玻璃仪器厂电子分析天平北京赛多利斯仪器系统有限公司D37520型高速冷冻离心机美国基因有限公司电热恒温烤箱上海科析试验仪器厂MDFU博22低温冰箱日本SANYO公司SN695R放射免疫计数仪上海核辐日环化一厂752N型紫外分光光度计上海精密科学仪器有限公司OLYMPUS光学显微镜日本泸州医学院中心实验室提供光学显微镜照相系统泸州医学院中心实验室提供IMAGEPROPLUS图像分析系统泸州医学院中心实验室提供4实验方法41动物分组及目的COM动物分组将100只SD大鼠随机分成4组假手术组ICH组HP去除组和HP干预组每组25只COM动物模型制作假手术组ICH对照组HP去除组断尾取血100UL采用亲和层析法去除HP采用立体定向大鼠尾状核注入去除HP后的自体全血50UL制作HP干预组断尾取血100UL加入100UL所需HP冻干粉相应量采用立体定向大鼠尾状核注入外加HP后的自体全血50UL制作COMHP干预组所需HP量随机抽取体重200250G成年健康雄性SD大鼠5只断尾取血100UL按照测定血浆HP原理和方法进行改进加入过量HP37度温育后HP即可与HB结合形成HBHP应用电泳法可将HBHP和未结合的HP区带完全分开测定HPHB复合物的量从而得到HP所用的量42建立模型421大鼠ICH模型建立67严格按照程序制作动物模型422模型成功评价8根据BERDERSON等的评定方法分为四级级别症状0级未有神经缺失症状1级将大鼠尾巴提起可见瘫痪侧前肢回收屈曲于腹下而正常侧前肢则向地面伸展2级除外1级体征推大鼠瘫痪侧时阻力较对侧显著降低3级除外以上体征大鼠具有向瘫痪侧旋转的行为43给药方法HP去除组和HP干预组建立去除HP和HP干预的模型ICH对照组按照程序制作动物模型假手术组不注入自体血44神经功能障碍评分9参照GARCIA等的方法进行神经功能障碍评分最低分3分最高分18分分数越低则表示神经功能障碍越重45脑组织取材46血肿取材血肿匀浆标本的制作及病理切片COM血肿取材用手术刀将肉眼视野范围内血肿组织分离放入玻璃试管加入HCL将其溶解再进行匀浆操作制作匀浆标本COM血肿匀浆标本的制作制作过程与脑组织匀浆制作基本相同将匀浆离心15分钟3000RMIN后取适量上清液进行测定部分保存于20冰箱冷冻备用COM病理学和免疫组化标本制作取材后将脑组织固定由泸州医学院病理学教研室协助制作各时间点组织病理切片47HB及其降解产物的测定分光光度仪测定血红素CO含量UCB含量FE的含量48血肿周围脑组织含水量的测定本实验采用干湿法按ELLIOTT公式计算测定脑组织含水量49IL1IL6TNFA的测定用放射免疫法成批进行测定按试剂盒使用说明书操作410脑组织SOD活性及MDA含量的测定按试剂盒使用说明书操作411HE染色按照相关程序行组织切片染色5统计学分析严格按照统计法统计结果1模型成功评价ICH模型后2HICH模型成功评价成功率达8320失败16例包括窒息1例554麻醉意外2例1600血液进入蛛网膜下腔或脑室7例4005ICH组HP去除组和HP干预组各有3例大鼠拔针后血液自行溢出3350表2假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组术后3H模型评价表TAB2THESUCCESSFULEVALUATIONFORMOFTHEMODELAT3HPOSTOPERATION组别3级2级1级0级死亡假手术组000300ICH组5121137HP去除组5111023HP干预组61211342假手术组ICH组HP去除组和HP干预组神经功能障碍评分表3假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组术后各时点神经功能障碍评分X士STAB3NEUROBEHAVIORALDEFICITOUTCOMEATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHGROUPANDHPREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONX士S组别FP时点假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D16310832587990000072715060214510501483D1690083256100000004051153101187501307D168210017900000000841235605180115019214D172408932000000001055230952220119014521D17130551512120300000000016301301615112注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P00520分15评假手术组碍障10ICH对照组能HP去除组功HP干预组经5神01D3D7D14D21D术后各时间点图1假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组术后各时点神经功能障碍评分X士SFIGURE1NEUROBEHAVIORALDEFICITOUTCOMEATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHGROUPANDHPREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONX士S从上图表可以看出假手术组在术后各时间点神经评分未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其评分显著高于假手术组HP干预组显著低于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现神经功能缺失在3D缺失最严重HP能改善大鼠ICH后神经功能缺失症状3假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织含水量表4假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组术后各时点血肿周围脑组织含水量XSTAB4WATERCONTENTSOFBRAINTISSUECIRCUMHEMATOMAATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONXGROUPICHGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONS组别时点FP假手术组ICH组HP去除组HP干预组1D65522028910190928211076051692080000003D7060175108201801132131093521381738000007D758121088301909641140773210513000000014D73522057723150803312278511200600000021D738211077101408215112780711905500000注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P005120100量80假手术组水含60ICH对照组织HP去除组组40HP干预组脑2001D3D7D14D21D术后各时间点图2假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组术后各时点血肿周围脑组织含水量XSFIGURE2WATERCONTENTSOFBRAINTISSUECIRCUMHEMATOMAATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONXGROUPICHGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONS从上图表可以看出假手术组在术后各时间点脑组织含水量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其脑组织含水量显著低于假手术组HP干预组显著高于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现脑水肿HP能减轻大鼠ICH后脑水肿形成4假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿中血红蛋白及其降解产物的变化41血肿内血红素含量血红素的测定检测范围5160PGML表5假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组血肿组织内血肿内血红素含量MOLLX士STABLE5THEHEMECONTENTINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPGROUPANDHPREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPMOLLXS组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D12055士117511877士130213721士140112729士11882080000003D12318士120515173士2086COM12569士10471738000007D12825士125215373士2122COM12858士145913000000014D12114士131415544士1656COM12018士156906000000021D11877士130214587士1513COM11869士138605500000注ICH对照组HP去除组与假手术组比较P005ICH对照组和HP干预组比较P005HP干预组和HP去除组比较P005HP去除组和ICH对照组比较P005从表6可以看出术后1D各组之间血肿组织内血红素含量未见显著性差异PO05HP去除组在术后3D21D各时间点血肿组织内血红素含量显著高于相应时间点的ICH组P005HP干预组在术后3D21D各时间点血肿组织内血红素含量显著低于相应时间点的ICH对照组和HP去除组差异具有统计学意义P00542血肿内FE含量X表6假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组血肿组织内血肿组织内铁含量MOLL士STABLE6THENONHEMEIRONCONTENTINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPGROUPANDHPXREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPMOLL士S组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D5153士14755207士14125321士15015029士13881480000003D5318士1675COM21854士52251556士30471532000007D5225士1652COM23585士5756COM106000000014D5014士1314COM20974士4765COM76000000021D4777士170214587士21318958士3968COM41500000注ICH对照组HP去除组与假手术组比较P005ICH对照组和HP干预组比较P005HP干预组和HP去除组比较P005HP去除组和ICH对照组比较P005从表6可以看出术后1D各组之间血肿组织内FE含量未见显著性差异PO05HP去除组在术后3D21D各时间点血肿组织内FE含量显著高于相应时间点的ICH组P005HP干预组在术后3D21D各时间点血肿组织内FE含量显著低于相应时间点的ICH对照组和HP去除组差异具有统计学意义P00543血肿内非结合胆红素UCB含量表7假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组血肿组织内血肿组织内非结合胆红素UCBX含量MOLL士STABLE7THEUCBCONTENTINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPREMOVEGROUPANDXHPTREATINGGROUPMOLL士S时点组别FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D1055士3751134士2961221士3011029士288420000003D1118士3452845士7694753士5282069士247438000007D1118士3452218士7454083士6571658士19530000000014D998士3742218士7454671士4691518士21236400000021D1052士4021887士575COM1169士28615570000注ICH对照组HP去除组与假手术组比较P005ICH对照组和HP干预组比较P005HP干预组和HP去除组比较P005HP去除组和ICH对照组比较P005从表7可以看出术后1D各组之间血肿组织内UCB含量未见显著性差异PO05HP去除组在术后3D21D各时间点血肿组织内UCB含量显著高于相应时间点的ICH组P005HP干预组在术后3D21D各时间点血肿组织内UCB含量显著低于相应时间点的ICH对照组和HP去除组差异具有统计学意义P00544血肿内CO含量X表8假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组血肿组织内血肿组织内CO含量MOLL士STABLE8THECOCONTENTINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPREMOVEGROUPXANDHPTREATINGGROUPMOLL士S组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D205士125304士196321士201309士2181050000003D216士1451545士2692753士221569士2441258000007D278士2521618士2423183士241658士192110000000014D278士2521465士3522671士164618士21202000000021D252士2021287士2252758士205569士28001500000注ICH对照组HP去除组与假手术组比较P005ICH对照组和HP干预组比较P005HP干预组和HP去除组比较P005HP去除组和ICH对照组比较P005从表8可以看出术后1D各组之间血肿组织内CO含量未见显著性差异PO05HP去除组在术后3D21D各时间点血肿组织内CO含量显著高于相应时间点的ICH组P005HP干预组在术后3D21D各时间点血肿组织内CO含量显著低于相应时间点的ICH对照组和HP去除组差异具有统计学意义P0055假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织MDA含量表9假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织MDA含量见表TAB9MDALEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D46502075502482903159502299200000003D48001295002310510407900359400500000382007D4650177910239790356080210000014D47801452502156803052001827000000021D471020519017551025515018250000000注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P00512T10ORP8假手术组GMICH对照组L6OHP去除组MM4NHP干预组A2DM01D3D7D14D21D术后各时间点图3假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织MDA含量见表FIGURE3MDALEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHGROUPANDHPREMOVEXGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS从上图表可以看出假手术组在术后各时间点MDA含量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其MDA含量显著低于假手术组HP干预组显著高于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现MDA含量升高HP能降低ICH后MDA含量6假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织SOD活力X表10假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织SOD活力见表STAB10SODACTIVITYATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS时点组别FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D17930147014642980134529401675010201610000003D180051190132521040130529401500511405100000007D1828777015852852154801270171907808410000014D16950100216152948159501080168309802000017521D167409201555210251532110621601085010500150注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P005200T150OR假手术组PGICH对照组M100HP去除组UHP干预组D50OS01D3D7D14D21D术后各时间点X图4假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织SOD活力见表SFIGURE4SODACTIVITYATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS从上图表可以看出假手术组在术后各时间点SOD含量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其SOD含量显著高于假手术组HP干预组SOD含量显著低于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现SOD活性降低HP能升高ICH后SOD活性7假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织LL6水平X表11假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织IL6水平见STAB11IL6LEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D1201194170522518053057022901610000003D14203051950295215128110822725100000007D1007275182532519053117532508410000014D93021597031011053257403702000017521D9412001020320115044073733410500150注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P0052520假手术组LM15ICH对照组GNHP去除组610HP干预组LI501D3D7D14D21D术后各时间点X图5假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织IL6水平见SFIGURE5IL6LEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONUMGPROTS从上图表可以看出假手术组在术后各时间点IL6含量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其IL6含量显著低于假手术组HP干预组IL6含量显著高于ICH对照组和HP去除组表明ICH后1D出现IL6含量升高3D达到高峰HP能降低ICH后IL6含量8假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织TNFA水平表12假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织TNFA水平见NGXMLSTAB12TNFALEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPXREMOVEGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONNGMLS组别时间点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D1110121620111600151320131450000013D122008178013169013147012750000087D1160121380091290121250115200002314D1170111260121230111200103000008821D11401212101112002211800925000000注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P005错误未指定书签图6假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织TNFA水平见NGXMLSTABTNFALEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPREMOVEXGROUPHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONNGMLS从上图表可以看出假手术组在术后各时间点TNFA含量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其TNFA含量显著低于假手术组HP干预组TNFA含量显著高于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现TNFA含量升高HP能降低ICH后TNFA含量9假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织LL1水平XS表13假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织IL1水平见NGXMLSTAB13IL1LEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPXREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONNGMLS组别时点FP假手术组ICH对照组HP去除组HP干预组1D0130050590060610050250071005500003D0160020450070530070390052800000007D0200040310040390050220062200015014D0190030220030290030230041550024021D01700202000202500302100310500250注ICH对照组HP去除组和HP干预组与假手术组比较P005HP去除组ICH对照组和HP干预组比较P005ICH对照组和HP去除组比较P005在ICH对照组其他时间点与3D相比P005在HP干预组其他时间点与3D相比P00507假手术组06ICH对照组05HP去除组LMHP干预组G04N031L02I0101D3D7D14D21D术后各时间点图7假手术组ICH对照组HP去除组和HP干预组血肿周围脑组织IL1水平见NGMLFIGURE7IL1LEVELATVARIOUSTIMESTAGESINSHAMOPERATIONGROUPICHCONTROLGROUPANDHPREMOVEGROUPANDHPTREATINGGROUPPOSTOPERATIONNGML从上图表可以看出假手术组在术后各时间点IL1含量未见明显异常在ICH对照组和HP去除组其IL1含量显著低于假手术组HP干预组IL1含量显著高于ICH对照组和HP去除组表明ICH后出现IL1含量升高3D达到高峰HP能降低ICH后IL1含量10HE染色光镜观察结果光镜显示假手术组术后脑组织切片未见明显病理改变见图8图8假手术组术后3D图9ICH对照组术后1DHE染色病理切片100HE染色病理切片100图10ICH对照组术后3D图11ICH对照组术后14DHE染色病理切片100HE染色病理切片100图12HP去除组术后1D图13HP去除组术后7DHE染色病理切片100HE染色病理切片100图14HP去除组术后14D图15HP干预组术后1DHE染色病理切片100HE染色病理切片100图16HP干预组术后3D图17HP干预组术后14DHE染色病理切片100HE染色病理切片100讨论1ICH后病理生理损害机制近年来对ICH所引起的脑损伤机制的研究有了许多进步认为主要涉及19脑水肿血红蛋白及其分解产物凝血酶纤溶酶炎性反应等多方面的损害其病情的恶化往往与ICH后继发的脑水肿兴奋性氨基酸中毒及氧自由基的损伤炎症反应血肿周围组织能量代谢紊乱有关202221ICH与脑水肿23脑水肿是ICH致死率和致残率高的十分重要的原因ICH后血肿周围脑24水肿形成可能与下列因素有关1血凝块回缩2血肿周围脑组织血流量2526改变和继发性缺血3红细胞溶解和血红蛋白毒性作用4凝血酶生成273031323334355基质金属蛋白激酶6水通道蛋白7血脑屏障破坏3641428血肿周围组织炎症反应9补体激活本实验结果显示ICH对照组在术后1D7D的脑组织含水量显著高于各相应时点的假手术组在ICH对照组各时点以术后3D的脑组织含水量最高病理结果也提示血肿周围脑组织3天水肿最明显且炎性细胞浸润明显增加脑组织含水量与IL1含量IL6含量TNFA含量均呈正相关与SOD活性呈负相关22脑出血与炎性因子研究表明ICH后脑组织内存在以中性粒细胞和巨噬细胞浸润小胶质细43胞激活为特征的并有炎性因子参与的炎症反应炎性因子包括IL6IL1TNFAIL8IL10等IL6能够加重BBB的破坏和神经功能障碍抑制脂多糖内毒素诱导单核细胞TNFA和IL1的表达保护部分神经元免受谷氨酸诱导的细胞死亡双重作用研究表明IL1作为早期产生的细胞因子它可以产生初始炎性反应并级联放大炎症的作用并能诱导免疫活性细胞产生继发性细胞因子及其他炎性介质从而最后造成组织器官的损伤研究表明TNFA是一种主要由激活的巨噬细胞或单核细胞分泌的炎性细胞分子ICH后TNFA表达增高可以调节ICAM1表达引发血管的炎性反应在中枢主要由激活的星形胶质细胞小胶质细胞和神经元产生并能刺激IL6IL1及转化生长因子1TRANSFORMINGGROWTHFACTOR1TGF1等细胞因子和粘附分子等的表达从而引起脑细胞肿胀和