00000129_癃开颗粒抗前列腺增生的药理毒理研究

癃开颗粒抗前列腺增生的药理毒理研究谢家骏1钱伯初2高崎1周光兴3蔡华芳2乔正东1成苗11上海市中药研究所，上海201203；2浙江省医学科学院药物所，浙江杭州310006；3复旦大学，上海200032关键词癃开颗粒前列腺增生药效毒理小鼠大鼠犬摘要目的探讨IG癃开颗粒抗前列腺增生药效与毒性作用。方法给小鼠IG癃开颗粒，测定正常幼年小鼠和丙酸睾丸素皮下注射或尿生殖窦植入诱导的前列腺增生模型动物前列腺指数、前列腺组织内DNA含量、血清酸性磷酸酶活性、精囊和睾丸湿重。以口服给药途径和常规实验方法，检测单次给药的小鼠最大给药量，考察3个月连续给药的WISTAR大鼠或BEAGLE犬长期毒性反应。结果IG癃开颗粒20、40G/KG（QD20D）能降低正常幼年小鼠前列腺的重量及该组织内DNA的含量；IG癃开颗粒10、20、40G/KG（QD10D）能抑制丙酸睾丸素引起的小鼠前列腺腹叶的增生；IG癃开颗粒20、40G/KG（QD30D）能抑制植入胎鼠尿生殖窦引起的小鼠前列腺腹叶的增生；IG癃开颗粒100G/KG（QD13W）能使大鼠前列腺呈轻度萎缩状态，腺上皮由柱状向扁平移生，腺腔变小，停药4周未见消失；癃开颗粒IG对小鼠的最大给药量为200G/KG。癃开颗粒给大鼠IG10、40、100G/KG或给BEAGLE犬IG12、60G/KG（QD13周），未发现有明显的毒性反应。结论癃开颗粒口服能抑制前列腺增生且无明显毒性反应。所属专业应用药理（中药药理）作者简介谢家骏（1959），男，教授级高级工程师。研究方向药理毒理研究及中药新药开发。电话02158958228STUDYONPHARMACODYNAMICSANDTOXICOLIGYOFLONGKAIGRANULESLKGAGAINSTPROSTATICHYPERPLASIAXIEJIAJUN1QIANBAICHU2GAOQI1ZHOUGUANGXING3CAIHUAFANG2QIAOZHENGDONG1CHENGMIAO11SHANGHAIINSTITUTEOFCHINESEMATERIAMEDICA,SHANGHAI2012032INSTITUTEOFMATERIAMEDICA,ZHEJIANGACADEMYOFMEDICALSCIENCES,ZHEJIANG,HANGZOU3100063FUDANUNIVERSITY,SHANGHAI200032KEYWORDSLONGKAIGRANULESLKGPROSTATICHYPERPLASIAPHARMACODYNAMICSTOXICOLOGYMICERATSDOGSABSTRACTOBJECTIVETODEMONSTRATETHEINHIBITOARYEFFECTSOFLKCAGAINSTEXPERIMENTALPROSTATICHYPERPLASIAANDEVALUATEITSTOXICITYONANIMALSORALLYMETHODSTHEPROSTATEEXPONENT,DNACONTENTINPROSTATETISSUE、THEACTIVITYOFACIDPHOSPHATASEINSERUMORTHEWETWEIGHTOFSPERMATOPHORESANDTESTICLESINNORMALIMMATUREMICEANDINTHEHYPERPLASIAMODELMICEINDUCEDBYSUBCUTANEOUSINJECTINGTESTOOSLERONESPROPIONATEORBYIMPLANTINGOFTHEUROGENITALSINUSWEREDETERMINEDAFTERADMINISTRATINGOFLKGINTRAGASTRICALLYTOTHEMICETHESINGLEMAXIMUMDOSAGEOFLKGINMICEANDITSLONGTERM13WEEKSTOXICITYINWISTARRATSANDBEAGLEDOGSINORALLYWASEVALUATEDRESULTSLKGCANDECREASETHEWEIGHTSOFPROSTATESANDDNACONTENTINTHETISSUEINTHENORMALIMMATUREMICEAFTERBEINGADMINISTEREDATDOSAGEOF20AND40G/KGONCEADAYSLKG,ATDOSAGEOFBOTH10,20AND40G/KGFOR10DAYSAND20AND40G/KGFOR30DAYS,CANINHIBITTHEHYPERPLASIAOFVENTRALPROSTATESINTHEMODELMICEINDUCEDRESPECTIVELYBYTHEINJECTIONOFTESTOOSLERONESPROPIONATEANDBYIMPLANTINGUROGENITALSINUSLKG,ATDOSAGEOF100G/KGFOR13WEEKSTOWISTARRATS,WOULDLEADTOPROSTATICATRAPHYINALIGHTDEGREE,ANDITSEPITHELIALCELLSCHANGEINSHAPEFROMCOLUMNTOFLATANDPROSTATICCAVITYBEINGSMALL,WHICHDIDNOTRECOVERIN4WEEKSAFTERSTOPADMINISTRATIONOFTESTEDDRUGTOTHEANIMALSTHESINGLEMAXIMUMDOSAGEBYIGINMICEIS200G/KGTHEREWASNOSIGNIFICANTTOXICITYREACTIONINRATSATDOSAGEOF10,40AND100G/KGFOR13WEEKSORINBEAGLEDOGSATDOSAGEOF12AND60G/KGFOR13WEEKSCONCLUSIONLKCCANINHIBITTHEPROSTATICHYPERPLASIAANDSHOWSNOVISIBLETOXICITYREACTIONINANIMALSORALLY癃开颗粒源于国家级名老中医王绵之教授几十年的临床验方，属通过现代提取方法科学加工而成的纯中药制剂。癃开颗粒由淫羊藿、黄芪、牛膝等中药组成，具有补肾益气、活血化瘀之功效，用于改善轻、中度中老年良性前列腺增生症肾虚血瘀证出现的夜尿频数、排尿困难、腰膝酸软、小腹胀痛等症。为验证癃开颗粒的临床疗效，本研究对其进行了主要药效学和安全性试验。1实验材料11受试物癃开颗粒褐色流浸膏，5G生药/M1，由上海市中药研究所提供。药效学实验用样品批号921216，毒理学实验用样品批号950228。置4C冰箱贮存，用时以蒸馏水稀释至所需浓度。丙酸睾丸素无色透明状针剂，25MG/M1，上海第九制药厂产品，批号921202。常温贮存，用时以精制植物油配制。苯甲酸雌二醇无色透明状针剂，2MG/M1，上海第九制药厂产品，批号8701031。常温贮存，用时以精制植物油配制。12实验动物ICR系小白鼠药效学实验用动物由浙江省实验动物中心提供（合格证号9200001），毒理学实验用动物由中外合资上海西普尔必凯实验动物有限公司提供（合格证号沪动合证字153号）。分每笼5只饲养。饲养温度为222，湿度为6070。饲以鼠用固体高压料。试验前禁食12小时，不禁水。WISTAR大鼠由上海医科大学实验动物科学部提供。实验动物生产合格证号沪医实动单准第057号。BEAGLE犬由上海医科大学实验动物科学部提供。实验动物生产合格证号沪医实动单准第057号。2实验方法21正常幼年小鼠前列腺称重实验1幼年小鼠50只，体重1416G，随机分成受试物低、中、高剂量、阳性药对照和空白对照共5组，每组10只。受试物组小鼠分别IG癃开颗粒10、20、40G/KG（QD20D），阳性药对照组小鼠SC苯甲酸雌二醇05MG/KG（Q3D20D），空白对照组小鼠IG蒸馏水（QD20D）。灌胃容积20ML/KG，皮下注射容积10ML/KG。末次给药后24H，仔细剖取前列腺各叶，包括腹叶，背叶和侧叶，称其湿重，并换算成前列腺各叶指数。同时，取前列腺组织测其DNA含量2，取血清测其酸性磷酸酶（ACP）含量3。前列腺指数计算公式前列腺各叶指数（）前列腺重量（G）体重（G）10022丙酸睾丸素引起小白鼠前列腺增生实验4小鼠60只，体重2125G，随机分成受试物低、中、高剂量、阳性药对照、模型和空白对照共6组，每组10只。除空白对照组SC同容积液体石蜡外，其余各组小鼠分别SC丙酸睾丸素10MG/KG（QD10D）。同时，受试物治疗组小鼠分别IG癃开颗粒10、20、40G/KG，阳性药对照组小鼠SC苯甲酸雌二醇05MG/KG（Q3D10D），模型和空白对照组小鼠则分别IG蒸馏水（QD20D）。灌胃容积20ML/KG，皮下注射容积10ML/KG。末次给药后24H，仔细剖取前列腺各叶，称其湿重，并换算成前列腺各叶指数。同时，取前列腺组织测其DNA含量，取血清测其ACP含量。23尿生殖窦植入所致小鼠前列腺增生实验5小鼠50只，体重2730G，随机分成受试物中、高剂量、阳性药对照、模型和空白对照共5组，每组10只。除空白对照组仅作假手术外，其余各组小鼠分别进行植入手术。小鼠IP戊巴比妥钠60MG/KG麻醉后，无菌操作剖开下腹部，仔细分离前列腺腹叶，在解剖镜下，用尖端锋利的钟表镊子向前列腺腹叶内植入3个16D龄胎鼠的尿生殖窦组织，空白对照组进行同样手术操作，但仅用镊子尖端刺人前列腺组织两次，作为假植入。经检查证实植入后，逐层缝合腹壁，3D后分组给药。受试物治疗组小鼠分别IG癃开颗粒20、40G/KG（QD30D），阳性对照组小鼠SC苯甲酸雌二醇05MG/KG（Q3D30D），模型和空白对照组小鼠则分别IG蒸馏水（QD30D）。末次给药后24H，仔细剖取前列腺各叶、精囊、睾丸，称其湿重，并换算成前列腺各叶指数。同时，取前列腺组织测其DNA含量。24单次给药的最大给药量试验小鼠20只，体重1822G，禁食12H后，以最大浓度和最大容量分别IG癃开颗粒200G/KG，给药后自由饮食，即时及以后每天上、下午各观察1次，连续7D，记录7D内动物的死亡状况及毒性反应。25三个月给药的长期毒性试验WISTAR大鼠96只，体重92451G，随机分成4组，每组24只。受试物组大鼠分别IG癃开颗粒10、40、100G/KG（QD13W），停药后观察4周。BEAGLE犬18条，67月龄，体重7606KG，随机分成3组，每组6条。受试物组动物分别IG癃开颗粒12、60G/KG（QD13W），停药后观察4周。在整个实验过程中，每日观察受试动物的一般行为活动状况，每周称体重和食耗量1次，动态地检测血液学、血清和尿液生化学、组织及细胞形态学等各项指标的变化。3实验结果31对正常幼年小鼠前列腺重量的影响给幼年小鼠IG癃开颗粒10、20、40G/KG，前列腺各叶重量减轻，前列腺组织NDA含量也相应减少，血清ACP活性除40G/KG剂量组有降低趋势外，其余两组无明显影响。见表1。32对丙酸皋丸素所致小鼠前列腺增生的影响给小鼠IG癃开颗粒10、20、40G/KG，丙酸睾丸素所致前列腺增生模型小鼠前列腺腹叶重量减轻，血清ACP活性下降，并能抑制40G/KG剂量组小鼠前列腺组织DNA含量。见表2。33对尿生殖窦植入所致小鼠前列腺增生的影响给小鼠IG癃开颗粒20、40G/KG，尿生殖窦植入所致前列腺增生模型小鼠前列腺腹叶重量减轻，前列腺组织DNA含量减少，但对精囊、睾丸重量无明显影响。见表3。34最大给药量测定给小鼠IG癃开颗粒200G/KG，7D内小鼠无一死亡，且毛色、体重、行为活动、食耗量、粪便性状及分泌物等，均未发现明显的异常反应。提示该药对小鼠的最大给药量为200G/KG，相当于临床单日拟用剂量的100倍。35长期毒性试验给大鼠IG癃开颗粒10、40、100G/KG，或给BEAGLE犬IG癃开颗粒12、60G/KG，每日1次，连续13周，各组动物活动状况和神态反应均无异常，摄食情况基本正常，平均体重增长和一般行为观察与对照组动物相比无差异，亦未发生明显毒性反应与死亡。给药13周及停药4周时，动物血液学、血清和尿液生化学检查均未发现明显异常。组织病理学检查发现，给药结束时，高剂量（100G/KG）组雄性大鼠前列腺呈轻度萎缩状态，腺上皮由柱状向菱形或扁平移生，腺腔变小，停药4周未见消失。其它各脏器，各组间无明显差异。提示癃开颗粒的作用靶器官主要在前列腺部位，系与受试物的药效作用有关。4小结和讨论前列腺增生症是一种特殊的组织病理性疾病。虽然其发病机理尚未完全阐明，但是至今的研究已表明其发生发展与前列腺组织间质及上皮细胞的增殖失控、凋亡减少密切有关，而体内性激素失衡是其必要条件6。因此，作为治疗前列腺增生症药效评价的一种手段，采用雄性激素失衡所致的前列腺增生动物模型已成为首选的实验方法。丙酸睾丸素皮下注射诱发的前列腺增生模型是目前抗前列腺增生药物研究中最常采用的方法，此发病机制系添加外源性雄激素而使前列腺过度增生。对正常幼年动物前列腺生长的影响实验亦被国内外广泛用于研究抗前列腺增生药。研究证明，处于生长期的幼年动物的前列腺的增重几乎完全受雄激素支配，幼年动物由于存在内源性的雄激素，所以其前列腺可以正常生长，一旦该通路受到干扰，则原有的生长状况必然发生变化。植入胎生期尿生殖窦诱发前列腺增生动物模型是一个与人类良性前列腺增生更为接近的动物模型，其机理可能是由于胎生期尿生殖窦诱导并激活了成年动物前列腺周围区域胚胎组织生长能力的重新恢复，有一定的特异性，但同样依赖于体内睾丸雄激素的存在。血清酸性磷酸酶（TOTALACIDPHOSPHATASE,ACP）活性是诊断前列腺疾病的一项经典的检测方法。由于前列腺中含ACP比其它组织器官高出1000倍，所以其活性大小可以反映前列腺状况变化。前列腺组织增生加强，血清ACP升高。前列腺组织的生长和ACP的合成及分泌均依赖于雄激素的存在及其水平。本研究选用上述三种动物模型，以前列腺重量、前列腺组织中DNA含量以及血清ACP活性为指标，对癃开颗粒抗前列腺增生作用进行了观察，发现可明显抑制正常幼年小鼠和由丙酸睾丸素或植入胎鼠尿生殖窦诱发前列腺增生模型小鼠前列腺湿重及其组织中DNA含量，同时亦能显著降低由丙酸睾丸素诱发前列腺增生模型小鼠血清ACP活性，提示其主要药效学活性与能影响内源性与外源性雄性激素的某个作用环节相关。该药最大给药量为临床拟用剂量的100倍；以临床拟用剂量50倍给药，每天一次，连续三个月，除动物前列腺组织萎缩外，其它各项指标均未发现明显的毒性反应。结果表明，癃开颗粒作用靶器官主要在前列腺部位，其抗前列腺增生的作用机制与影响内源性与外源性雄性激素的某个作用环节有关，以拟用剂量应用于临床，其安全性较大。文献资料1南京大学生物系编生物化学实验人民教育出版社1979832赵学勤,张镜宇,焦成久,等细胞中DNA含量测定/I改进的二苯胺法天津医药199195625643陈正炎主编临床生物化学和生物化学检验实验指导人民卫生出版社199931324上海市医学化验所主编临床生化检验上海科学技术出版杜1979，3605奈帆,宋波,熊恩庆尿生殖窦间质诱导的鼠前列腺增生模型制备第三军医大学学报9992121311326郭军,张春影,主编实用前列腺疾