姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF7细胞凋亡作用

1、doc格式论文，方便您的复制修改删减姜黄素体外诱导人乳腺癌mcf7细胞凋亡作用（作者:_单位: _邮编: _） 作者：孙黎 刘正泉 罗强 薄爱华【摘要】 目的:观察姜黄素对人乳腺癌mcf7细胞(简称mcf7细胞)凋亡的诱导作用。方法:不同浓度姜黄素(0.048，0.056，0.064，0.072，0.080mol/l)作用于mcf7细胞24h,采用cck8法检测其对mcf7细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡结果。结果:经上述不同浓度姜黄素诱导24h后，mcf7细胞生长抑制率分别为17%、28%、48%、50%及55%;琼脂糖凝胶电泳显示出dna梯形条带。结论：姜黄素对体外培养mcf

2、7细胞的增殖有明显的抑制作用并可诱导其细胞凋亡。 【关键词】 姜黄素;人乳腺癌mcf7细胞;细胞凋亡【abstract】 objective:to study the effects of curcumin inducing apoptosis of mcf7 cells(human breast cancer mcf7 cells is called mcf7 cells for short).methods:curcumin with different contentrations (0.048，0.056，0.064，0.072，0.080mol/l) effected on mcf7

3、 cells,and after 24h effects of curcumin on growth inhibition of mcf7 cells,were detected by the methods of cck 8 and cell apoptosis,was detected the methods of agarose gel electrophoresis. results:by these concentrations curcumin inducing,24h later,growth inhibition of mcf7 cells was respectively 1

4、7%,28%,48%,50% and 55%;agarose gel electrophoresis showed dna ladder electrophoresis.conclusion:mcf7 cells were inhibited apparently and induced apoptosis by curcumin in vitro culture.furthermore,it provided important basis for the treatment of malignant tumors(breast cancer,etc.)and the study for m

5、echanism of apoptosis.【key words】 curcumin,human breast cancer mcf7 cells,apoptosis姜黄素是从姜科植物的根茎姜黄(curcuma aromatica,salisb.)中提取的一种植物多酚，具有抗炎、抗氧化、抗凝、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用，对多种肿瘤细胞系均有明显的凋亡诱导作用，是一种理想的细胞凋亡诱导物1，其抗癌范围很广，具有广阔的开发前景。1 材料与方法1.1 材料及仪器mcf7细胞株由北京肿瘤研究所遗传室提供,本院实验中心细胞室传代、冻存;cck8为上海同仁化学产品;rpmi1640培养基为美国gib

6、co公司产品;胎牛血清购自天津市川页生化制品有限公司;琼脂糖,100bpdnamaker为北京六和同公司产品。其他均为国产分析纯试剂。美国spectramax m2/m2e多功能微孔检测系统。1.2 方法1.2.1 mcf7细胞培养 复苏mcf7细胞于50ml培养瓶中,rpmi1640培养液(含100ml/l胎牛血清，100万u/l庆大霉素)37,50ml/l co2培养,待细胞生长至对数生长期加入不同浓度姜黄素处理。1.2.2 cck8法检测姜黄素对肿瘤细胞的抑制作用 取对数生长期密度为2105/ml的mcf7细胞，接种于96孔培养板上,100l/孔。用培养液将姜黄素稀释成0.080，0.0

7、72，0.064，0.056，0.048mol/l 5个不同浓度，并分别加入96孔培养板(100l/孔),每组设4个复孔，对照组加入等体积培养液，培养24h。实验终止前4h每孔加入cck8 20l,10min后以酶标仪检测吸光度(a490值),按公式计算mcf7细胞抑制率。抑制率(%)=(1实验组平均a490值/对照组平均a490值)100%。1.3 琼脂糖凝胶电泳分析 取培养至对数生长期mcf7细胞(密度为1106/ml)分别接种于6只50ml的培养瓶,1.5ml/瓶,实验组分别加入上述不同浓度的姜黄素悬液1.5ml,对照组加入1.5ml培养液。培养24h后,1500rpm/min离心,收集

8、mcf7细胞,用pbs(0.01mol/l ph7.4)洗涤3次,最后1次移入1.5ml ep管中,加裂解液615l，70水浴振荡15min,重复2次,离心取上清液500l加1000l的无水乙醇使dna析出,离心后用20l te缓冲液(ph7.4)溶解dna。电泳前,用rna酶(10g/l)消化30min。2%琼脂糖凝胶电泳60min,紫外透射仪观察并拍照。2 结果2.1 姜黄素对mcf7细胞增殖的抑制作用 cck8法检测0.048，0.056，0.064，0.072，0.080mol/l 5个不同浓度的姜黄素作用mcf7细胞24h，对mcf7细胞的生长有不同程度的抑制作用，并随着姜黄素浓度的

9、增加，对mcf7细胞抑制率也增加，分别为17%、28%、48%、50%及55%(见图1)。各实验组a490与对照组比较，差异均有统计学意义(t=3.606及5.918，p0.05;t=9.171、7.841、7.067，p0.01)。 图1 不同浓度姜黄素对mcf7细胞增殖的抑制作用2.2 dna琼脂糖凝胶电泳经不同浓度姜黄素处理的mcf7细胞dna电泳显示出细胞凋亡典型的180200bp及其倍体的dna“梯形”条带(图2)。图2 mcf7细胞dna凝胶电泳图谱m:100 bp dna标志物,1:对照组(未加姜黄素),2:姜黄素浓度0.048mol/l,3:姜黄素浓度0.056mol/l,4:

10、姜黄素浓度0.064mol/l,5:姜黄素浓度0.072mol/l,6:姜黄素浓度0.08mol/l。3 讨论细胞凋亡(cell apoptosis)是一种由基因调控的细胞主动死亡过程4，是机体生长发育、细胞分化、生理及病理性死亡的重要机制。凋亡细胞表现为细胞增殖受到抑制、细胞核固缩、凝聚、断裂、细胞磨出泡，形成凋亡小体及dna发生规则断裂等，目前这些变化已成为判断细胞凋亡的重要指标，细胞凋亡失衡与肿瘤的发生发展有关5。肿瘤细胞的凋亡诱导及其机理研究，是当前抗肿瘤研究的一个主要方向。乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,据流行病学预测，乳腺癌将成为全球妇女健康最主要的威胁之一，发病率呈逐年上升趋势

11、。随着人口老龄化及女性平均寿命的延长，老年人乳腺癌的发病率正在增加。欧美国家新诊断的乳腺癌中65岁的病人约占一半2。在美国等西方国家及中国一些大中城市,乳腺癌已占居妇女恶性肿瘤死亡的首位3，因此乳腺癌的治疗尤为重要。姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗凝、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用，我们将姜黄素在体外作用于人乳腺癌细胞mcf7，采用cck8法检测乳腺癌细胞的生长，琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。cck8法是一种较客观、敏感的测定抗癌药物敏感性的新方法。本实验结果显示姜黄素在体外对人乳腺癌mcf7细胞增殖具有明显抑制作用，不同浓度姜黄素对mcf7的生长抑制率达到17%、28%、48%、50%及55%;琼

12、脂糖凝胶电泳显示出dna梯形条带，由此证实姜黄素在体外对乳腺癌细胞具有抗肿瘤活性，同时使细胞dna降解诱导肿瘤细胞凋亡。姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的机制很复杂，诱导肿瘤细胞凋亡并非其抗肿瘤作用的唯一途径，姜黄素抗肿瘤作用也可通过免疫调节、抗氧化等与诱导肿瘤细胞凋亡等诸多途经联合，进而起到抗肿瘤作用6，姜黄素是否也通过免疫分子的表达而诱导肿瘤细胞凋亡，也有待进一步研究。细胞凋亡的启动是一个涉及多基因参与的复杂过程，姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的过程中是否有调控基因的激活和转录、有无相关基因的表达改变等，也有待进一步研究。近几年有关姜黄素抗肿瘤报道较多，姜黄素以较好的疗效越来越受医疗工作者的重视，我们相信在

13、不久的将来姜黄素会广泛用于临床。【参考文献】 1 li n,shao sl.a research progress on apoptosis mechanisms of malign tumor cells induced by curcuminj.j sci teach colleg univer,2007,27(1):2729(in chinese) 2 muss hb. adjuvant therapy for older women with breast cancerj. breast,2003,12(6):550557 3 gennari r,curigliano g,romensz n,et al.breast carcinoma in elderly women:features of disease presentation, choice of local and systemic treatments compared with younger postmenopausal