临床免疫实验室质量控制PPT学习教案

1、会计学1临床免疫实验室质量控制临床免疫实验室质量控制第1页/共80页、比较实际数据与预期值之间的差异，并说明产生这一差异的原因。超出预定误差范围，报警系统发出信号，反馈通道中断。采取行动，解决差异。恢复原状（原标准状态）的手段发挥作用。第2页/共80页n临床实验室的质量目标：n 使检验结果更好的符合病人的实际情况；及时的发出检验报告，并依据检验结果结合病人临床情况主动为临床诊断提供咨询。第3页/共80页n实验室的工作人员把其描述为实验室的工作人员把其描述为：准确、可靠、临床适用性好。n医生将其定义为：医生将其定义为：实验时间短、临床应用价值大、随时能得到实验室的咨询意见。n医院院长医院院长：成

2、本-效益好，临床医生满意。n病人或被检查者将其定义为：病人或被检查者将其定义为：快速、准确、便宜、有价值。第4页/共80页第5页/共80页1 1）、培训实验室工作人员）、培训实验室工作人员第6页/共80页成）；第7页/共80页 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。第8页/共80页2 2）、建立标准操作规程）、建立标准操作规程 实施质控需要有一套完整的标准操作规程做保障。例如仪器的使用、维护操作规程，试剂、质控品、校准品等的使用操作规程。所有临床实验室都应建立一套完整的标准操作规程。第9页/共

3、80页 3 3）、仪器的检定校准）、仪器的检定校准为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱）,洗板机,酶标仪。移液器移液器：ELISA加样量小（5-100l），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在+-10%以内。第10页/共80页水浴箱水浴箱 经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有1的误差；洗板机洗板机 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪酶标

4、仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。第11页/共80页第12页/共80页第13页/共80页第14页/共80页第15页/共80页 =1.72 S=0.29 CV=16.9%第16页/共80页+3s+2s+1sX1.72-1s-2s-3s LeveYJennings质控图 图1 第17页/共80页第18页/共80页3S为失控限时，第19页/共80页 每100次约有一次判为失控（99%的合格率）。显然，这个标准太低，使许多失控状态判为合格。当以2S为失控限时，每20次约有一次失控（95%的合格率），这个标准可以接受。当我们以1.5S为失控限时，就将2/10的

5、结果设定为失控（即约80%的合格率），显然提高了质控的难度，使操作者需要更用心操作，否则易处失控状态。我们建议我们建议临床实验室采用临床实验室采用2 2S S为失控限。血站为失控限。血站1.5S为失控限。第20页/共80页第21页/共80页12S:一个质控测定值超过均值2S质控限， 违背次规则，提示警告。13S :一个质控测定值超过均值3S ,违背 此规则，提示存在随机误差。22S :2个连续的质控测定值同时超均值+2S或均值-2S质控限。违背此规则，提示存在系统误差。第22页/共80页R4S : 在同一 批内高值质控测定值与低值质控测定值两个质控结果之差超过4S，违背此规则，提示存在随机误差

6、。 31S : 3个连续的质控测定值同时超过+1S或-1S质控限。违背次规则，提示存在系统误差。 第23页/共80页41S : 连续4个质控点落在同一侧1S之外。违背此规则，提示存在系统误差。7 / ：连续7个质控点呈连续上升或下降；或周期性波动变化。10X :是个连续的质控结果在平均数一侧，违背此规则，提示存在系统误差。 第24页/共80页+3s +2s +1s X -1s -2s 21s违背规则-3s 31s违背规则第25页/共80页+3s+2s+1s X-1s-2s-3s22s违背规则R4s第26页/共80页我们利用WestgardWestgard规则规则, ,引入免疫学检验中,建议以下

7、几种情况判为失控. 1 12s 1质控测定值超过2S之外.2 R4S 连续2个质控点相差超过4S范围.3 41S 连续4个质控点落在同一侧1S之外4 7X 连续7个质控点落在同一侧。5 7 / 连续7个质控点呈连续上升或下降；或周期性波动变化。第27页/共80页第28页/共80页（）先将测定值从小到大排列：X1、X2、X3、Xn （X1为最小值，Xn为最大值）。（）计算x和S。 (）计算SI上限值和SI下限值， SI上限 X最大值x 均 SI下限 x 均最小值 （）将SI上限、SI下限与SI值表（表2）中的数字比较。 第29页/共80页 SI值表 表2n n3s n2s n n3s n23 1

8、.15 1.15 12 2.55 2.294 1.49 1.46 13 2.61 2.335 1.75 1.67 14 2.66 2.376 1.94 1.82 15 2.71 2.417 2.10 1.94 16 2.75 2.448 2.22 2.03 17 2.79 2.479 2.32 2.11 18 2.82 2.5010 2.41 2.18 19 2.85 2.5311 2.48 2.23 20 2.88 2.56第30页/共80页 当SI上 限值和SI下 限值n3s值时，说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，重新测定该项质控血清和病人样本。舍

9、去的只是失控的这次数值，其它次测定值仍可继续使用。第31页/共80页 20次质控血清检测S/CO值次数 s/co 次数 s/co 1 1.71 12 1.352 1.81 13 2.003 1.90 14 1.524 1.81 15 1.715 1.09 16 1.816 2.10 17 1.527 1.43 18 2.108 1.62 19 2.009 2.14 20 1.4310 1.43 21 1.5211 1.90 第32页/共80页 在第3次测后，按“即刻法”计算公式 n= 3, S/CO值从小到大排列为： 1.71 1.81 1.90 SI上限=X最大值-X均值/S SI下限 =X

10、均值-X最小值/S x均= 1.81， S = 0.10 计算： SI上限= 1.90 1.81 / 0.1 = 0.9SI下限= 1.81 1.71 / 0.1 = 1.0第33页/共80页 查SI值表：n = 3时，n2s= 1.15，n3s= 1.15 ,SI上限、SI下限均小于 n2s、n3s，因此该三次检验数据在控制范围内。 在第4次测定后，按上法计算： n=4 1.71 1.81 1.81 1.90 x均= 1.81 S = 0.08 SI上限= 1.901.81 / 0.08 = 1.13 SI下限= 1.811.71 / 0.08 = 1.25 查SI值表 ：n = 4时， n

11、2s= 1 .46， n3s= 1.49。SI上限、SI下限均小于n2、n3s ,数据在控制范围内。 第34页/共80页 在第5次测定后，按上法计算： n = 5 1.09 1.71 1.81 1.81 1.90 x均= 1.66 ， S = 0.33 SI上限= 1.901.66 / 0.33 = 0.73 SI下限= 1.661.09 / 0.33 = 1.73 查SI值表；n = 5时，n2s= 1.67，n3s= 1.75 n2s（1.67）SI下限（1.73）n3s（1.75）。SI下限值在n2s和n3s之间, 说明该值在2s3s范围，同时表示该资料是在下限（-2s）之外，处于“告警

12、”状态，本次数据弃去。第35页/共80页第6次检测，n仍为5进行计算： n=5， 1.71 1.81 1.81 1.90 2.1 x均= 1.87 S = 0.15 SI上限= 2.101.87 / 0.15 = 1.53 SI下限= 1.871.71 / 0.15 = 1.07 查SI值表：n2s = 1.67，n3s = 1.75 。 SI上 限、SI下 限均小于n2s、n3s ,数据在控制范围内，继续检测并计算。第36页/共80页 当测定达到21次时，因舍去一个数据（第5个），n=20，排序如下：1.35 1.43 1.43 1.43 1.52 1.52 1.62 1.71 1.71 1

13、.81 1.81 1.81 1.90 1.90 1.90 2.00 2.00 2.10 2.10 2.14 x均= 1.76 S = 0.25 SI上限= 2.14 1.76 / 0.25 = 1.5 SI下限=1.76 1.35 /0.25 = 1.64 第37页/共80页 查SI值表：n 2s= 2.56 ,n3s= 2.88.SI上限、SI下限均小于n2s、n3s 数据在控制范围内.用20次数据的均值和S值（x均= 1.76 S = 0.25）做质控框架图。以后的检测数据不再计算，转入质控图。 从以上实例可看出，通过“即刻法”统计计算的均值和S值与前面介绍的测20次获得均值和S是十分接近

14、的。即刻法质控的统计方法，适于免疫学测定的质控。第38页/共80页 当检测的数值超20次以后，不必再使用“即刻法”质控统计计算，可以转入常规的质控图的质控，将前20次的数值求出的均值和S值作质控框架图，第21次的数值，依次点入即可。第39页/共80页第40页/共80页 x均=0.101 S = 0.01 CV = 9.3 % 通过孔间的变异调查，可以了解不同试剂、不同批号、不同操作者的差异，以便于选择、改进。 了解孔间的变异，就可以了解每个样品测定值的可能变动范围，对于判定处于CO值上下的样品的结果是十分有用的。第41页/共80页第42页/共80页 有的实验室，不考虑批内变异，只将每天检测的“

15、第一块”板的质控数值描记在质控图中，这样使该室质检图可以做得十分漂亮，但细查一下每块板的质检结果，就会发现差异变化极大。这样的质控，不能对每块板进行质控（批内变异）,失去意义。 如何进行免疫实验室室内质控的批内、批间变异的控制，我们借用某一实验室开展室内质控初始的实际数据计算一下。该室室内质控初始阶段资料变异很大，6个月后才趋于稳定水平。从这也说明实验室开展室内质控的必要性。该实验室室内质控资料见表4第43页/共80页 某实验室室内质控资料表（S/CO值） 质控血清：HBsAg lng/ml 日期序号 S/CO 1 2.24 1.32 1.39 2 3.39 1.52 2.01 3.95 3.

16、08 8.00 1.71 2.97 1.58 3 3.25 3.95 3.02 2.23 4 2.07 3.04 2.13 2.13 1.98 3.16 2.51 5 2.50 3.00 2.20 4.01 1.94 9.83 6 2.70 3.46 2.38 2.42 2.71 7 3.37 3.79 4.26 2.74 2.91 2.58 8 3.06 3.97 8.62 9.22 4.06 3.45 9 4.65 4.96 8.91 6.40 8.62 10 7.30 4.13 7.68 3.02 11 2.38 3.20 2.65 3.57 12 1.90 1.72 3.38 3.61

17、 2.88 2.66 3.02 13 2.63 2.63 3.19 8.91 14 12.86 4.4 5.20 9.73 6.68 6.78 15 4.85 4.88 4.51 4.95 2.18 2.64 16 10.50 6.90 6.10 8.59 第44页/共80页 取表4中连续20天的每天最大值（X大）和最小值（X小）列表，并计算其值差（X差），求20天值差的均值和标准差，此为批内变异（以x均 内S 内表示 );以取每天数值的均值,求20天均值的均值和标准差，此为批间变异(以x均 间S 间表示 ）,见表5第45页/共80页 某实验室室内质控批内、批间数值表（S/CO值） 质控血清：

18、HBsAg lng/ml 表5 第n天 最小值 最大值 值差 均差 第n天 最小值 最大值 值差 均差 （X小） （X大） (X差) X （X小） （X大） (X差) X 1 1.32 2.24 0.92 1.65 11 2.38 3.57 1.19 2.95 2 1.52 8.00 6.48 3.02 12 1.72 3.81 2.09 2.77 3 2.33 3.95 1.72 3.11 13 2.63 6.91 4.28 4.34 4 1.98 3.16 1.18 2.43 14 4.40 12.86 8.46 7.61 5 1.94 9.83 7.89 3.91 15 2.18 4.9

19、5 2.77 4.00 6 2.42 3.46 1.04 2.73 16 6.10 10.85 4.40 8.02 7 2.58 4.26 1.68 3.28 17 2.89 8.80 5.97 6.33 8 3.06 9.22 6.16 5.40 18 3.27 9.67 6.30 6.17 9 4.65 8.91 4.26 6.17 19 3.70 6.20 2.50 5.13 10 3.02 7.68 4.66 5.53 20 2.80 9.40 6.60 5.36 第46页/共80页通过表5，计算值差项得出： 均值 内=4.11 S 内=2.52 计算均值项得出：均值间=4.52 S

20、间=1.83表5中均值 内4.11 和S 内2.52为批内变异，均值间4.52和 S 间1.83为批间变异。从该数据反映出该室批内变异S内2.52，大于批间变异1.83。依人们固有思想，一般认为批间变异往往大于批内变异，而事实往往不一定。因此提示人们应重视精密度检测水平。第47页/共80页 利用表5中X内和S内做室内批内变异质控框架图，将X大和X小描记上，并连成线段，观察批内变异十分直观。实际应将第21次以后的X大和X小线段描记上，在这里，仅利用表5的数据进行范列描记，见图9。第48页/共80页 图9 某实验室批内变异质控图第49页/共80页 从图9中可以看到，线段长短不等。线段越长，反映精密

21、度越差；线段长的越多，反映这一阶段精密度总体情况不好。线段上上下下不平衡地分布在X轴线的上下两侧，反映出批内变异的偏离也很大。第50页/共80页 利用表5中X间和S间做室内批间变异质控框架图，并将第21次以后的均值依次描记上。在这里，仅利用表5中的均值数据X进行范例描记。见图10第51页/共80页 图10 某实验室批间变异质控图第52页/共80页 从图10中可以看到，前7次数值偏于X轴的下方。 第21次到29次，数值呈明显上升趋势，反映出这一段检测处于系统误差之中，应查找原因。第53页/共80页第54页/共80页失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批病人标本报告可能作废。此时，首先要尽

22、量查明导致失控的原因，如果为假失控常规测定报告可按原先测定结果发出，如果为真失控，应在纠正失控原因后，全部标本重做，质控品测定合格后再签字发出报告。当出现失控信号时，可采用下述步骤寻找原因：第55页/共80页1）、重新测定同一质控品，用以查明是否有人为误差或偶然误差，如重侧的结果在允许范围内（在控）即为偶然误差。如重侧的结果仍不在允许范围，应进行下步操作。2）、新开一瓶质控品，重测定失控项目。如果结果正常，说明原来那瓶质控血清可能变质，如果仍然不在允许范围，则进行下一步。 第56页/共80页4）、进行仪器维护，重侧失控项目。检查光源是否需更换，滤光片是否在正常位置。如果仍然不在允许范围，则进行

23、下一步。第57页/共80页第58页/共80页1、试验首先应成立，满足试剂盒要求。阴、阳对照结果符合要求，cut-off值判定公式满足试剂盒要求。该试验结果可以发出报告。2、每一批次操作时，应含有一个阳性和阴性质控品，用已知靶值物质作为质控品。3、质控品必须按患者标本那样进行检测。4、只有观察到预先设立的质控品反应模式时，实验室才能发出检验结果。第59页/共80页第60页/共80页1灵敏度灵敏度: 1)为试剂检出被检物质的最低量的能力;2)为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。2特异性特异性:指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗

24、原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。第61页/共80页4 4稳定性稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为37每稳定一天相当于4-10保存一个半月。第62页/共80页5参考室间质评评价报告中对试剂的评价结参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果果:这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况；6根据权威部门发布的试剂评价结果 ，了解市场上试剂的质量优劣 。第63页/共80页评价试剂的各项性能指标按以下公式计算评价试剂的各项性能指标按以下公式计算灵敏度（%）= 真阳性 100% 特异性（%）= 真阴性 100 %符合率（%）= 真阳性 +真阴性 真阳性+假阴性 假阳性+真阴性 真阳性+假阳性+ 真阴性+假阴性100%第64页/共80页1、灵敏度就是患者真阳性结果的百灵敏度就是患者真阳性结果的百分率分率。理想的检验结果应当是假阴性为零，敏感性为100%。敏感性与假阴性是互补的，敏感性好，假阴性就少，相反敏感性差，假阴性就高。 假阴性率在临床检验中通常称为漏诊率。一般要求临床检验尽量减少假阴性，在血站对献血员的筛查，就要求漏诊率为零。第65页/共80页2、特异性就是患者真阴性结果的特异性就是患者真阴性结果的百分率。百分率。理想的检