蓝白筛选原理_第1页
蓝白筛选原理_第2页
蓝白筛选原理_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、蓝白斑筛选蓝白斑筛选蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生的B -半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-B -D-半乳糖苷）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛 选的最直观有效的方法。设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为B-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码B-半乳糖苷酶的基因突变，造成其编码的B -半乳糖苷酶失去正常 N段一个146个氨基酸的短肽（即 a肽链），从 而不具有生物活性，即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选的载体具有一段称为lacz

2、'的基因，lacz'中包括：一段 B -半乳糖苷酶的 启动子；编码 a肽链的区段；一个多克隆位点（MCS）。MCS位于编码a肽链的区段中，是外源DNA的选择性插入位点，但其本身不影响载体编码a肽链的功能活性。虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的B -半乳糖苷酶，但当菌体中含有带lacz'的质粒后，质粒lacz'基因编码的a肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的B-半乳糖苷酶突变体互补，具有与完整B -半乳糖苷酶相同的作用X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即a -互补。操作中，添加IPTG（异丙基硫代-B - D-半乳糖苷）以激活lacz'中的B - 半乳糖苷酶的启动子，在含有X-gal的固体平板培养基中菌落呈现蓝色。以上是携带空载体的菌株产生的表型。当外源DN（即目的片段）与含lacz'的载体连接时，会插入进MCS使a肽链读码框破坏，这种重组质粒不再表达a肽链，将它导入宿主缺陷菌株则无 a互补作用，不产生活性B -半乳糖苷酶，即不可分解培养基中的X-gal产生蓝色，培养表型即呈现白色菌落。实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次 筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论