检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分

1、自动生化分析仪实际 K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是&的影响。&在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际£,再计算K值，此为。一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有 NAD+ NADP+丨参与的反响途径，用 NADH或NADPH标准液来 校正仪器。用己糖激酶HK方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。葡萄糖有标准纯品，当反响到达终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。在需要校正的仪器上测其 A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际 K值。【考前须知】1减少偶然误差

2、重复测定10次，当CV>5 %时，那么重新测定10次。2减少系统误差 使用实际K值计算酶活性。3. 如果实际&值与理论&值偏差过大，需对仪器检修和校正。二、405nm波长实际 K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时， 以人工“色素原为底物，经酶作用后可释放出在 405nm 波长具有吸收峰有色的反响产物，如对硝基苯酚4-NP、对硝基苯胺4-NA、对硝基-5-氨基苯甲酸ANBA。他们在405nm波长时的理论&分别为 18 700、9 870、9 490。可使用其相 应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际计算出实际K值。以ALP实验产物为4-NP为例测定实际K

3、值。【考前须知】1. 4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。2. 其他考前须知参见 340nm K值校正。三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，假设测得的结果偏低，那么需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，那么校正K值=理论实际K值X校正因子=理论实际K值X校准值 十 实测值NADH正负向反响测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反响式为：L-孚L酸+ NAD+ LD丙酮酸 + NADH + H+在反响过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+复原为NADH。因NADH在340nm处有吸收峰，反响会引起 340nm吸光度的增高。吸光

4、度增加的速率与样本中LD活性呈正比关系。NADH正向反响的最适 pH偏碱性，可使反响平衡偏向产生丙酮酸的方向。【参考范围】成人血清 LD : 109 U/L 245 U/L【临床意义】1. LD活性增高：目前临床测定 LD活性常用于心肌堵塞、肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。2. LD活性降低：目前没有发现重要的临床意义。3. LD的特异性差，几乎存在各种组织中，如：心、肺、肾、肝、骨骼肌以及恶心肿瘤等疾 患时均致此酶增高。【考前须知】1. LD活性测定可用抗凝血浆，肝素的影响不大，而草酸盐抗凝剂、EDTA都是LD的竞争性抑制剂，能抑制 LD活性。2. 不同的LD同工酶对温度的敏感性有差异。组织提取液

5、假设放于-20C过夜，LD4和LD5会丧失全部的 活性。3. 严禁使用溶血标本，红细胞、血小板中含有大量的LD。4比色应在515min内完成，否那么吸光值会降低。【评价】LD能可逆地催化乳酸lactate, L丨和丙酮酸pyruvate, P之间的氧化复原反响。1. 正向反响最适pH是8.89.8，能使平衡偏向生成丙酮酸的方向。其优点是乳酸和 NAD+稳定性好。且NAD+纯品价格较低，过量乳酸对LD活性的抑制较小， 反响线性较宽，重复性较好，特异性高。缺点是需要较高的底物浓度，反响速度较慢。2. 逆向反响的最适 pH为7.47.8，与生理性pH相同。其显著的优点是 NADH用量少，仅为正向反响

6、的3%,且反响速度比正向快 3倍，灵敏度高。 缺点是但丙酮酸与 NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸对LD活性的抑制作用较大。二、连续监测法测定血清 ALT【实验原理】L-丙氨酸+ a -酮戊二酸 ALTt a -丙酮酸+ L-谷氨酸a -丙酮酸 + NADH LD孚L酸 + NAD+在340nm处连续监测到NADH的消耗量，从而计算出 ALT活性浓度。在双试剂测定中，首先使血清与缺少a -酮戊二酸的底物溶液混合， 37C保温5min，将样品 中所含的a -酮酸如丙酮酸消耗完，然后参加a -酮戊二酸启动ALT催化的反响，在波长 340nm处连续监测吸光度下降速率。【参考范围】：成人血清 ALT

7、5U/L40U/L。【临床意义】1. ALT是肝细胞损伤的诊断指标急性肝细胞损伤的灵敏指标。慢性活动性肝炎或脂肪肝时，转氨酶轻度增高100U200U，或在正常范围，且 AST > ALT。肝硬化、肝癌时， ALT有轻度或中度增高，提示 可能并发肝细胞坏死，预后严重。其它原因引起的肝脏损害，如心功能不全时，肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死，可使ALT、AST明显升高。某些化学药物如异菸肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷剂等可不同程度地损害肝细胞，引起ALT的升高。2. 其他疾病或因素亦会引起 ALT不同程度的增高。如骨骼肌损伤、多发性肌炎等亦可引起 转氨酶升高。3. ALT活性降低见

8、于磷酸吡哆醛缺乏症。【考前须知】1. 试剂空白测定值以蒸馏水代替血清，测定ALT活性单位，规定测定值应小于5U/L.2. 血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性。3. ALT测定中存在着两个副反响。4. 在AACC美国临床化学学会或IFCC国际临床 化学学会推荐的试剂盒中，含有磷酸吡 哆醛P- 5'-P。国家卫生部临床检验中心的推荐方法试剂中不加P-5'-P。5. NADH在Tris缓冲液中稳定性较高；P-5'-P在Tris缓冲液中能显示有效的激活作用；磷 酸盐缓冲液有延缓与脱辅基酶蛋白的结合作用。【评价】本法由于测定上限在酶促反响的线性范围内，偏差小，准确性好；测定条件

9、较赖氏法易于控制，CV值比赖氏法小，精确性好；标本测定中不需要标准对照，测定结果计算方便，操作 简便。但实验条件要求严格，本钱高。色素原底物反响测定酶活性色素原：一些水解酶类或转移酶类经过酶促反响将化合物中的某一基团水解或移除，使无颜色的底物转变为有颜色的产物，这类底物称为色素原底物。一、血清碱性磷酸酶 ALP丨测定【实验原理】：波长：405 ± 1nm磷酸对硝基苯酚二钠4-NPP+ H2O ALP , pH 8.610磷酸 +对硝基苯酚4-NP, 黄色【参考范围】成人血清 ALP :40 U/L 150 U/L【临床意义】1. ALP可作为肝胆和骨骼疾病的辅助诊断指标。肝胆疾病，如

10、阻塞性黄疸、急或慢性黄疸型肝炎、肝癌等血清酶活力可增高。发生骨骼疾病时，由于骨的损伤或疾病使成骨细胞所含高浓度的ALP释放入血，引起血中 ALP活力增高。2. ALP减少比拟少见，主要见于呆小病、成骨不全症、磷酸酶过少症、维生素C缺乏症等。【考前须知】1. 血清置室温25C，ALP活性显示轻度升高。例如，室温6小时，酶活性约增高 1%,置14天酶活性增高3%6%。血清存放冰箱4C，酶 活性也出现缓慢升高。冰冻血清， ALP活性降低，但当血清复温后，酶活性会慢慢恢复。2. 本法的线性范围： 0500 U/L 37 C。代谢物酶试剂法是以酶为试剂测定酶促反响的底物及其相关物质的一类方法。根据测定原

11、理，这类方法的具体应用中又可分为“代谢物酶试剂终点法测定和“代谢物酶 试剂速率法测定两大类一、速率法测定血清尿素【实验原理】尿素 + H2O尿素酶t 2NH3 + CO2NH3 + a -酮戊二酸 +NADH + H+ GLDH宀 谷氨酸 + H2O + NAD+NADH在340nm波长处有吸收峰，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的含量成正比。【参考范围】：血清尿素：1.78 mmol/L7.14 mmol/L。【考前须知】1. 在340nm试剂空白对水的吸光度应大于1.00A，试剂浑浊或吸光度低于 1.00A的应放弃使用。2测定过程中，各种器材和去离子水均应无氨离子污染，防止交叉污染，否那

12、么结果偏高。3. 血液标本最好用血清，含NaF的血浆可导致结果偏低。4在内源性氨正常时，本法能用于测定尿中的尿素。【评价】1直接法：用二乙酰一肟与尿素直接作用，产生颜色反响。该法试剂单一，方法简便，但 试剂具毒性和腐蚀性。更重要的问题是红色产物对光敏感，易褪色，目前多用氨基硫脲、铁 离子、镉离子等物质来提高和稳定产物颜色。2间接法：用脲酶使尿素水解产生氨，然后测定氨的产量再换算成尿素含量。根据测氨量 的不同方法，酶法又可分为：尿素酶Berthelot显色法、尿素酶/GLDH偶联法和尿素酶电极法。酶法的优点是无毒性、特异性高，适合于自动化分析仪的应用，使用越来越厂泛。二、酶偶联终点法测定血清 H

13、DL及其亚类胆固醇【实验原理】pH6.5的条件下，10% PEG20 000可将含apoB的脂蛋白沉淀，离心后的上清 液中仅含有 HDL 。 HDL 主要包括 HDL2 和 HDL3 。 pH7.5 的条件下，适量增加 PEG20 000 的浓度，可使血清中的 HDL2 与含有 apoB 的脂蛋白一同沉淀，离心后的上清液中仅含有 HDL3 。血清中总胆固醇TC丨包括游离胆固醇FC和胆固醇酯CE两局部。胆固醇酯可被胆 固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸FFA，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成厶4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化

14、合物，其颜色深浅与标本中 TC 含量成正比。胆固醇酯+ H2O 胆固醇酯酶t胆固醇+脂肪酸胆固醇+ O2 胆固醇氧化酶t 4-胆甾烯酮 + H2O2H2O2 + 4-氨基安替比林过氧化物酶t醌亚胺+ H2O，此步即为Trinder反响【临床意义】1HDL 是一种抗动脉硬化的脂蛋白，心血管疾病的发病率与血清HDL-C 水平呈负相关。在预测心血管疾病的危险因素中， HDL-C 下降比 TC 和 TG 升高更有意义。2HDL 包括 HDL1、HDL2 和 HDL3 。 HDL2 在各种疾病中变化较大。研究说明， HDL2-C 亚类与心血管疾病的相关程度比 HDL-C 更密切。【考前须知】1沉淀后的上

15、清液应清澈。2离心最好用低温离心机，且离心后应立即吸取上清液并在4h 内完成胆固醇测定。3聚乙二醇的黏度较大，吸取时应用吸水纸擦净吸管外壁并缓慢放入试管中。4血清别离后应及时测定，否那么应冰冻保存。5应空腹至少 12h 采血并防止溶血。【评价】1HDL 及亚组分的别离：常用的方法是选择性化学沉淀别离法。根据沉淀剂的不同又有多 种方法，合理选用沉淀剂是保证别离准确的重要环节。2HDL-C 及其亚组分中胆固醇的测定方法：常规方法主要有化学沉淀法和均相测定法。 化学沉淀法包括 HDL 及其亚组分的别离及别离所得 HDL 及其亚组分中胆固醇含量的测定， 其缺点是对温度和 pH 改变敏感，沉淀离心后放置

16、时间不宜过长。均相测定法标本用量少，不需沉淀处理，操作简便，便于在自动生化分析仪上进行测定。免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A I和B100【实验原理】血清中 ApoA或ApoBlOO与试剂中特异性的抗 ApoA I或ApoBlOO的抗体结 合，在适当条件下形成细小颗粒状的、不溶性的抗原抗体复合物并使溶液混浊。光线通过这一混浊溶液时，光线被吸收，吸收的量与浊度成正比。浊度上下在一定范围内与血清中ApoA I或ApoBlOO的含量成正比。根据免疫比浊法原理， 吸光度与浓度之间一般是 3 次方程曲线关系， 应取多点制作校准曲线， 以适宜的数学模型如 Logit-Log 拟合成校准曲线。或以校准液的吸

17、光度值与校准液浓度的对 数为坐标作图，制备校准曲线。所以需要多点定标【参考范围】ApoA I： 1.OO g/L 1.5Og/L。ApoBlOO : O.5O g/L 1.1Og/L。ApoA I /ApoB1OO ： 1.O2.O。【临床意义】1. 血清ApoA I主要存在于 HDL中，一般情况下，它可反映 HDL的水平，与HDL-C呈明 显正相关，其临床意义与 HDL-C 根本相同。2. ApoB1OO 主要存在于 LDL 中，其含量主要代表 LDL 水平，与 LDL-C 成显著正相关，其 临床意义与LDL-C根本相同。此外，临床上常将 ApoA I /ApoBlOO < 1.0作为

18、冠心病的危险 指标。【考前须知】1 标本应是及时别离的空腹血清。2 抗血清中不含杂抗体，效价不低于1 ： 16。3应注意抗原和抗体的比例。4比浊法测定终点法中宜选用多点定标，按曲线回归方程计算结果。 5免疫比浊法的干扰主要来自血清，手工单一试剂法应设标本空白管。 6应用定值血清作校准物以减少基质效应的影响。【评价】：免疫浊度法为临床实验室测定ApoA I和ApoBlOO的常规方法。其又分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。免疫透射比浊法是目前实验室最常用的方法，该法操作简单， 结果准确， 可在自动生化分析仪上作批量测定。 但该法对抗体的质量要求高， 消耗抗体较多。琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同

19、工酶【实验原理】乳酸脱氢酶同工酶的一级结构和等电点不同， 在一定的电泳条件下， 使其在支持介质上别离。 然后利用酶的催化反响进行显色：L-孚L酸 + NAD+ LD , pH 8.89.8丙酮酸 + NADH + H+NADH + H+ 2PMS 宀 2PMSH +NAD+2PMSH + INT t 2PMS + INTH + H+【操作步骤】1、 样本制备：取小鼠一侧肾脏，用0.9%生理盐水洗涤干净，参加 1ml生理盐水于匀浆器中 末 5min 。将匀浆液移入 Ep 管中 2OOOrpm 离心 5min 实际上这个时间和转速都不够 ，取上 清作为样品。2、 制备琼脂糖凝胶玻片：琼脂糖微波炉中

20、加热至沸腾，吸管吸取融化的凝胶液2ml，均匀铺在玻片上。冷却凝固后，于一端约11.5cm处制槽。用0.5cm滤纸条，吸去琼脂中水分，形成加样槽。3、加样：剪长约1cm，宽约0.20.3cm的滤纸，浸入样本液中完全湿润，置于加样槽中央。 跑电泳前将滤纸揭去。4、电泳：恒压70V跑1h,样本由负极向正极泳动。5、 显色：用显色液覆盖整个玻片，置于托盘中37°避光孵育 1Omin。6、双蒸水漂洗后观察结果，光密度扫描。【参考范围】健康成年人血清中 LD同工酶百分比有下述规律：LD2 > LD1 > LD3 > LD4 > LD5。【临床意义】1. LD同工酶电泳分析

21、在临床上常用于急性心肌梗死的诊断，在急性心肌梗死时 LD1与LD2活性均升高，但 LD1 升高更早、更明显，导致 LD1/LD2 比值增大。2. 溶血性疾病、幼红细胞贫血症、肾坏死、以及假性肥大性肌营养不良、活动性风湿性心 肌炎、急性病毒性心肌炎患者血清 LD1 和 LD2 的活性也可增高。3. 肝炎、急性肝细胞损伤时 LD5 增高。急性肺损伤、白血病、胶原病、心包炎以及病毒感 染时 LD2 和 LD3 增高。4. 胃癌、结肠癌和胰腺癌患者血清中五种 LD 同工酶均可升高，但以 LD3 增高最为显著。 骨骼肌损伤时 LD4 和 LD5 增高。【考前须知】1严禁溶血。2. LD4与LD5尤其是L

22、D5丨对热很敏感，因此底物 -显色液的温度不能超过 50C，否那么 易使LD5等变性失活。3. LD4和LD5对冷不稳定，容易失活，应采用新鲜标本测定。如果需要，血清应放置于25 C条件下保存，一般可保存2d3d。4. PMS对光敏感，故底物显色液需避光保存，否那么显色后凝胶板背景颜色较深。5因乳酸钠长期放置后可产生酮类物质，对酶促反响造成抑制作用，可用乳酸锂代替上述 溶液。【评价】：操作简便、重复性好、标本用量少。明显的溶血会导致假阳性。临床生化检验方法学评价试验一、重复性试验【实验原理】：批内重复性试验是指在同一条件下用同样的方法，同一种试剂和标准品， 同一台仪器，在同一实验室由同一人操作

23、，并保持实验期间准确度不变对同一标本在尽可 能短的时间内进行 m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。其结果 能反映测定方法的随机误差大小。本试验将血清标本用 GOD-POD法作5轮，每轮4次血糖测定，即可获得 20个测定数据。 【计算】1. 检验20次测定数据中的离群值如存在异常值时应剔除。对小样本测定来讲，可采用Grubbs检验，该方法是最合理的检验方法。2. 按照批内精密度的计算公式计算5轮每轮4次测定值的平均数X、标准差s和变异系数CV%。首先计算出每轮测定值的均数、标准差Si及方差S1、S2、S3、S4,并将数值填入表27-1内，再将5轮Si总和代入公式即可算出批内标

24、准差Sw。最后计算出变异系数CV%【考前须知】1、 血糖的医学决定水平值为2.8 mmol/L、6.7mmol/L和8.9mmol/L。分析物浓度应选择医学 决定水平才更具价值。2. 用于评价方法精密度的变异系数应该是剔除离群值后的计算结果。【评价】批内不精密度的判断限是1/4允许误差范围。批间不精密度的判断限是1/3允许误差范围。允许误差范围可以根据CLIA88规定的能力比对试验的 TEa确定。二、回收试验【实验原理】：回收试验是用以发现分析方法比例系统误差的有效评价方法。即通过测定 GOD-POD法测定血糖的回收率，能较确切地判断该分析方法比例系统误差的有无或大小， 从而评价方法的准确性。

25、【考前须知】1. 标本参加标准液后，总浓度应在该方法的分析范围内。最好使被测标本的浓度到达医学决定水平，血糖测定的医学决定水平为2.8 mmol/L、6.7mmol/L、8.9mmol/L。2. 纯标准品溶液的参加体积不得超过血清样品的10%，假设稀释过大，误差将发生改变。3. 准确加量是本试验最主要的技术关键。【评价】：一般检验方法，要求回收率在95105%之间，最理想的回收率应为100%三、干扰试验【实验原理】：干扰试验是测定特异性和干扰两者引起的误差。干扰物浓度一定时，产生的 误差是恒定系统误差，误差的实际大小随干扰物的浓度而异。选用尿酸作GOD-POD法测定血糖的干扰试验，尿酸可疑和G

26、OD反响生成的H2O2发生反 应，使局部H2O2不能参与第二步 POD的耦联反响，从而降低显色强度，产生负的测定误 差。尿酸对该反响有干扰，但不是尿酸被测定。干扰试验既用于检测某方法的特异性，也用于检测干扰物质对方法的干扰作用，以评价分析方法的准确性。【考前须知】1. 可疑干扰物浓度 参加可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好到达病理标本的最高值，尿酸升高的变动范围在0.42mmol/L0.9mmol/L之间。2. 干扰物对测定的影响与被分析物浓度无关，而与干扰物本身的浓度有关，所以产生的误 差是恒定系统误差。3. 其他考前须知与回收试验相同。【评价】：偏差Bias允许误差EA丨的

27、临界值，说明由于干扰物引起的偏差对临床诊断和 治疗不产生不良影响，是可以被接受的。血2.8mmol/、6.7 mmol/和8.9mmol/L时的EA为0.56mmol/L 。四、方法比拟试验【实验原理】：用两种方法同时检测一批样本，计算出两种方法间测定结果的差异，用以估 计试验方法在检测样本时可能引入的误差。中选择准确度的常规方法作为比拟方法时， 局部误差来自比拟方法， 其他局部误差那么来自试验方法。假设选择准确度高的参考方法作为比拟方法，可把方法间的任何分析误差都归于试验方法。本实验以HK法测定血糖的参考方法作比照来评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差。【计算】1、 将实验结果作散点图，

28、图中以x轴代表比拟方法的测定值，y轴代表实验方法的测定值，在坐标纸上作图应散布于整个测定范围之内。通过散点图可以观察到，测定数据的分布趋势，假设所有测定值在坐标图中大致呈45°角的直线分布，提示被实验方法与比拟方法的测定结果之间存在密切的相关关系；假设呈明显的曲线分布，那么此实验方法被采用的可能性极小。2、 如果x、y之间呈直线关系，可作直线回归的统计处理，计算：回归方程y=a+bx和相关 系数r。其结果可以显示实验方法的测定结果有无系统误差存在。截距a反映恒定系统误差的大小；斜率b反映比例系统误差的大小；相关系数 r反映两种方法相关性的密切程度。【考前须知】1. 选择试验样品：一般

29、作 40100例，包括常规工作中可能遇到的整个分析范围其中 25%的标本低于参考范围下限，50%标本在参考范围之内，25%标本高于参考范围，选择适宜的样品分析范围比增加样品的数目更为重要。2. 试验方法：一般每个样品用两种方法各测一次，最好每个样品用两种方法各测定两次， 在做双份第二次测定时，标本顺序应全部倒过来，最好在 4h内完成。3. 比照方法：比照方法的选择十分重要，一般应选参考方法或决定性方法，这样方法间的 任何分析误差都可归于被评价的候选方法。在评价一个实验方法时，最理想的情况是回归直线呈45°角通过零点，这时 a=0， bx/y比值=1.0，说明恒定系统误差和比例系统误差

30、均不存在。但x和y都会有随机误差，a和b只是估计值，会有所波动，只要偏离程度比拟小，该方法就能用于临床检验的常规分析。根据计算出的回归方程的a、b值，可以计算候选方法系统误差SE的大小，并与不同医学决定水平Xc丨的允许误差EA作比拟，对被评价方法的系统误差的可接受性作出判 断。SE的可接受性判断指标为(a + bXc )- Xc| < EA血糖测定的 Xc=2.8 mmol/L、6.7mmol/L、8.9mmol/L 时，Barnett 提出的 EA 值为 0.56mmol/L。4作相关分析 在方法比拟试验中，相关系数 门可作为被评价方法可否被接受的一项统计学指标。对相关系数还应作相关系

31、数的t检验。相关系数门的t检验统计学公式是：1 一 15. 方法比拟试验的数据属于配对资料，因而可作配对t检验，其统计学公式是:lycd-d)7 /yd-(Xd)【实验原理】：线性范围是指系统最终的输出值浓度或活性与被分析物的浓度或活性呈比例，并在允许的非线性误差以内的范围。线性评价是测定被测物质浓度/活性的反响曲线接近直线的程度。本试验配制不同浓度的葡萄糖标准溶液，用god-pod法试剂测定相应其吸光度，以标准浓度为横坐标，测得的吸光度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反响曲线dose-response curve。【计算】：以葡萄糖浓度值为横坐标，测定的吸光度值为纵坐标，

32、在坐标纸上作图，假设所 有梯度浓度实验测试点在坐标纸上呈直线趋势，即可建立回归方程 y=a+bx。要求a接近于0，b在0.971.03之间。假设满足此条件，那么可直接判断该测定方法是否在所要求的线性范围。假设a偏大，b<0.97或b>1.03那么认为在低浓度或高浓度处的实测值与预期值间存在较大偏差。可舍去某一组数据，另作回归分析，直到a接近于0，b在0.971.03之间，此时变窄的线性范围即为真实的可报告范围。【考前须知】 应以葡萄糖浓度的预期值作为横坐标，测定值为纵坐标作图，而不能以葡萄糖浓度的预 期值和对应的吸光度值作图。 有的测定特别是酶法测定，当酶量相对缺乏时，用标准液所作

33、的线性范围可以到达指定 的上限，但在测定同样高值样品时，结果却明显偏低，这通常是由样品中的介质效应所致。 线性评价方法还可参照 EP6文件进行。【评价】一终点法时间反响曲线实验【实验原理】：终点法是测定化学反响到达平衡时的产物生成量，这样才能较准确地反映待测物的量。用略高于参考值上限的标准液或定值血清进行测定，以观察反响到达平衡期的时间以及反响持续和终止的时间，即可分析有关试剂盒的性能指标。【评价】1假设试剂空白的吸光度大于规定标准，表示试剂质量有了变化不能使用，否那么会影响测 定的精密度和准确度。2试剂空白的反响速度时间曲线应平坦，吸光度在整个反响期间无明显波动，否那么，说明 试剂本身不稳定

34、，会导致测定偏差。3. 反响能否在规定的时间内到达平衡，到达平衡的时间应在临床生化自动分析仪终点法读 取测定吸光度的时间之前。4. 反响到达平衡后，吸光度最大并维持不变，这一期间为反响稳定期。终点法测定应在这 一期间读取吸光度，尤其是对显色不稳定的反响，应严格控制比色测定在稳定期内完成。二连续监测法时间反响曲线实验【实验原理】：连续检测法测定的是酶促反响的初速度。本实验用ALT法试剂盒进行测定，连续观察该反响中的延迟期、 线性期和混合期的整个过程， 即可分析连续监测法试剂盒的性 能指标。【评价】1、2与终点法根本一致；反响速度上升型的试剂，空白吸光度越低越好。3、观察试剂的延滞期、线性反响期与

35、设定的实验参数是否符合，不符的需要修正4、可用定值血清，由酶促反响速度曲线的斜率分析试剂盒的灵敏度。三、补充1、试剂盒按组合方式可分为：单一试剂、双试剂 单一试剂：除标准品外只有一个试剂，优点是操作简单。缺点是稳定性、抗干扰能力差 双试剂：除标准品外有两个试剂，优点是抗干扰能力强， 可在一定程度上消除内源性物质的干扰；试剂稳定、均一2、方法学比拟 平衡法/终点法：指标本中待测物的量有限，经过酶促反响逐渐被消耗，当剩余的底物量 很小之时，只是反响信号逐渐到达稳定，以到达该平衡点的信号计算待测物浓度的方法。 速率法/连续监测法：当底物消耗量较小之时，酶促反响呈一级反响，此时反响速度与待测物浓度成正

36、比；连续测定酶促反响过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率，求出酶活性浓度。实验操作技能考核评价【实验原理】室间质量评价external quality assessment, EQA丨是在室内质控的根底上，通 过实验室间的比对，观察各实验室结果的准确性、一致性。/n吾值标准差(Sd) = 1V 11 -1 d t = 在计算t值公式中的分子局部是两种方法的偏差值，说明方法间系统误差的大小。分母是平均偏差标准误，反映方法比拟实验中随机误差的大小。因此t值是方法比拟试验中系统误差和随机误差的比值。临床生化检验试剂盒性能评价实验一、线性范围试验1根据浓度与对应测定值作直线回归分析，建立方程y=a+bx ;使a尽量接近0,b在0.971.03时的测定范围为该方法的线性范围。理想的情况是该方法的分析范围的上限应能使95%的临床标本不经稀释均能得到正确的测定结果。2试剂盒测定工程的线性范围要求能