维生素C的提取及含量测定ppt课件

1、维生素维生素C的提取及的提取及含量测定含量测定一、实验目的一、实验目的学习维生素学习维生素C的重要性质的重要性质 掌握掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素二氯酚靛酚法测定维生素C的的原理和方法原理和方法二、实验原理二、实验原理维生素维生素C的构造与性质的构造与性质维生素定量测定维生素定量测定构造与性质构造与性质维生素维生素C/ L-抗坏血酸抗坏血酸(ascorbic acid)多羟基，内酯；酸性；多羟基，内酯；酸性；易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏 CCCHCH2OHOHHOHCCOOOH14CCCHCH2OHOHOHCCOOO142H2HL-L-抗坏

2、血酸抗坏血酸脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸 维生素维生素C的功能的功能维生素维生素C C是重要是重要的供氢体的供氢体促进胶原合成促进胶原合成坏血病坏血病 来源来源 新颖水果及新颖水果及蔬菜蔬菜: 橙类橙类 、番、番茄茄 、辣椒、辣椒 富含维生素富含维生素C量高的食物毫克量高的食物毫克/100克食物克食物) 酸酸 枣枣830-1170猕猴桃猕猴桃568枣枣 549辣辣 椒椒185山山 楂楂89柿子椒柿子椒89菜菜 花花88金花菜金花菜85苦苦 瓜瓜84雪里红雪里红83豌豆苗豌豆苗53油油 菜菜51橙橙 49柚柚 41柠柠 檬檬40柑柑 橘橘34水萝卜水萝卜34大白菜大白菜19西红柿西红柿12芥菜头芥菜

3、头80青青 蒜蒜77 2,6-二氯酚靛酚 氧化复原指示剂三、实验内容三、实验内容样品处置：样品处置：2.0g猕猴桃猕猴桃510ml 2%的草酸研磨成浆状的草酸研磨成浆状 50ml的容量瓶定容的容量瓶定容过滤过滤规范液滴定：规范液滴定：5ml 1草酸草酸 + 5ml 0.001molL维生素维生素C (176.13)2,6-D滴定到浅红色，滴定到浅红色，30s ；3次次 10 x2,6-D)计算计算1ml 2,6-D相当于维生素相当于维生素C的的mg数数T 21)(VCVT 滴定数样品滴定：样品滴定：50ml 锥形瓶：滤液锥形瓶：滤液5ml移液管移液管2,6-D滴定到浅红色，滴定到浅红色，30s

4、 ；3次次空白滴定：空白滴定：50ml 锥形瓶：锥形瓶：5ml l草酸草酸2,6-D滴定到浅红色，滴定到浅红色，30s ；3次次计算结果计算结果100g 样品含维生素样品含维生素C的的mg数数=Bx(A-E)xTx100/CxDA滴定样品所耗费的滴定样品所耗费的2,6-二氯酚靛酚钠的平均二氯酚靛酚钠的平均 毫升数；毫升数；E滴定空白所耗费的滴定空白所耗费的2,6-二氯酚靛酚钠的平均毫二氯酚靛酚钠的平均毫升数；升数；B样品提取液的总体积样品提取液的总体积50ml；C每次滴定所用的提取液的毫升数每次滴定所用的提取液的毫升数5ml；D提取所用的样品分量提取所用的样品分量2g；T 1ml 2,6-D相

5、当于维生素相当于维生素C的的mg数。数。 四、操作要点四、操作要点 定容定容过滤过滤移液管运用移液管运用滴定管的运用滴定管的运用滴定滴定思索题思索题为什么维生素为什么维生素C规范溶液要用新颖配制的？规范溶液要用新颖配制的？ 为准确测得维生素为准确测得维生素C的含量，实验时要留意的含量，实验时要留意那些操作步骤？那些操作步骤？多酚氧化酶的制备多酚氧化酶的制备和性质研讨和性质研讨一、实验目的一、实验目的 了解植物组织褐变和多酚氧化酶的关系。了解植物组织褐变和多酚氧化酶的关系。 学习多酚氧化酶的提取和活力测定方法学习多酚氧化酶的提取和活力测定方法 了解影响酶促反响速度的各种要素了解影响酶促反响速度的

6、各种要素二、实验原理二、实验原理酶的分别纯化：酶的分别纯化：资料的选择新颖、目的蛋白含量高资料的选择新颖、目的蛋白含量高分别过程中防止一切能够引起变性的条件分别过程中防止一切能够引起变性的条件蛋白质的纯化普通在低温下进展蛋白质的纯化普通在低温下进展4oC细胞破碎：机械破碎细胞破碎：机械破碎分别目的蛋白：盐析法分别目的蛋白：盐析法多酚氧化酶催化的反响多酚氧化酶催化的反响邻苯二酚邻苯二酚邻苯醌邻苯醌三、实验内容三、实验内容多酚氧化酶的制备：多酚氧化酶的制备：50g小块土豆小块土豆 + 50ml氟化钠氟化钠600g/班班捣碎机中研磨捣碎机中研磨30s 3-5层纱布过滤层纱布过滤40-45ml滤液滤液

7、/组组等体积饱和硫酸铵，等体积饱和硫酸铵，4，30min 离心离心4，4000r/min，20min沉淀沉淀 + 15ml柠檬酸缓冲液柠檬酸缓冲液离心离心4，4000r/min，15min上清上清多酚氧化酶粗制品多酚氧化酶粗制品 多酚氧化酶的性质多酚氧化酶的性质 多酚氧化酶的作用多酚氧化酶的作用 ：催化的反响：催化的反响 多酚氧化酶的化学性质：稳定性多酚氧化酶的化学性质：稳定性 底物专注性邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚底物专注性邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚 底物浓度底物浓度 酶浓度酶浓度 氢离子浓度氢离子浓度 移液管移液管四、操作要点四、操作要点 公用试剂的运用、玻璃器皿清洁、定量、定时公用试剂

8、的运用、玻璃器皿清洁、定量、定时离心机及其运用离心机及其运用 离心机是利用离心力对混合液含有固形物进展离心机是利用离心力对混合液含有固形物进展分别和沉淀的一种公用仪器。分别和沉淀的一种公用仪器。 普通非冷冻离心机：转速小于普通非冷冻离心机：转速小于4000rpm(Rotate Per Minute )，台式高速离心机最大转速可，台式高速离心机最大转速可18000rpm。 低速冷冻离心机低速冷冻离心机 ：转速普通不超越：转速普通不超越4000rpm 高速冷冻离心机高速冷冻离心机 ：转速可达：转速可达20000rpm，搜集微生物、，搜集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免细胞碎片、

9、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。疫沉淀物等。超速离心机超速离心机 ：转速可达：转速可达50000rpm，能使亚细胞器分，能使亚细胞器分级分别，并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。级分别，并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。 转转 头头50 Ti RotorJA 20.1 Rotor JA-18 RotorJA17 Rotor离心管离心管开启离心机控制电闸开启离心机控制电闸翻开离心机电源开关翻开离心机电源开关选择转头选择转头将转头放入离心机内预冷将转头放入离心机内预冷平衡离心管平衡离心管离心管放入转头、拧紧转头盖离心管放入转头、拧紧转头盖封锁离心机盖封锁离心机盖设定离心转头速度、温度、时间，开场离心设定离心转头速度、温度、时间，开场离心离心终了后离心终了后 取出离心样品管取出离心样品管 取出转头，擦干、清洁转头取出转头，擦干、清洁转头 封锁离心机电源开关封锁离心机电源开关