华农基因操作原理温习题

1、基因操作原理温习题01级生物技术(2潮刘超1Chapter1IntroductionConcepts：GeneEngineering,Molecularcloning,Exon,Interruptedgenes,OverlappinggenesIntron一、填空题1. 基因操作(Genemanipulation)的核心部份是基因克隆(genecloning)，而genecloning的大体要点有,。2. 是遗传物质的大体单位，也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它能够是持续的，也能够是;能够是,也能够是RNA能够存在于染色体上，也能够。3. 启动子(Promoter)是指。通常一个Gen

2、e是不是表达，是关键的一步，是起决定作用的。在转录进程中，Promoter仍是的4. 原核生物的RNApolymerase要紧由两部份组成：和,其中6-因子并非参与RNA勺合成，它的作用主若是。5. 从到的这一段距离称为一个转录单位，或一个转录产物，其中可包括一个或多个Geneo6. 转录终止子要紧有两种，一种是,另一种是。7. Gene的书写方式，一般是写出的DNAff列老是与相同的那条链，方向是从到。关于碱基的位置，一样自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为,定为-1。8. 重叠基因(Overlappinggen®是指；距离基因(Interruptedgene)是指。9.

3、 Genecloning的要紧目的有,。二、问答题1 .谈谈你对gene的熟悉，并简要说说gene概念的进展情形？2 .如何明白得gene及其产物的共线性和非共线性?3 .什么是genecloning?什么是亚克隆(subcloning)?4 .假设从一个原核生物中cloning某基因（1-2kb）,请谈谈它的大体步骤?5 .什么叫基因工程（GeneEngineering）,试从理论和技术两个方面谈谈GeneEngineering诞生的基础？Chapter2分子克隆经常使用的工具酶Concepts:Terminaltransferase,RestrictionendonucleaseSitep

4、references,MungbeanNucleaseStaractivity,Isoschizomei;Methylase一、填空题1. Ecok的一样分子组成为R2M2S,在这些亚基中，R亚基具有的作用，M亚基具有的作用，S亚基具有的作用，当该该酶发生作历时，需用到的辅因子有：2. 限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease的命名是按属名和种名相结合的原那么的，通常第一个大写字母取自,第二、三个字母取自,第四个字母那么用表小03. 个体间DNA限制性片段长度的不同叫。4. DNA载体经Hindlll切割后产生粘性结尾，能发生载体自连，阻碍载体与外源DNA的连接效率，经

5、常使用的避免载体自连的方式有、5. 完全的回文序列应具有两个特点即和06. DcmMethylase（Dcm甲基化酶）的识别序列为和,该酶的作用位点为。7. 别离写出以下限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease的识别序列：EcoRI、Sau3AI、HindIII。8. Weiss单位的概念为。9. 限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease通常保留在浓度的甘油溶液中。10. 载体和外源DNA经酶切，在进行下一步操作前，需排除限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease的阻碍。经常使用的方式有、11. 对DNA进行双酶切时，酶切缓

6、冲液的选择原那么有（1）、12. DNaseI为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切成效，当Mg2+存在时；当Mn2+存在时013. T4phageDNApolymerase分子量为kDa,该酶的3'-5勺外切活性比Klenow酶强倍，由于它不从单链DNA模板上替换引物，故可用于。二、问答题1 .简述限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease的概念及其生物学功能？2 .试回答阻碍限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease切割效率的因素?3 .在酶切缓冲液中，一样需加入BSA,请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？4 .何谓St

7、aractivity?简述Staractivity的阻碍因素及克服方式?5 .某DNA序列中存在酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序歹当用该酶进行酶切时，发觉酶切不动，试分析可能缘故？6 .天然的质粒载体(plasmidvectors)通常需经改造后才能应用，包括去除没必要要的片段，引入多克隆位点等。试问在此进程中如何增减酶切位点？7 .双脱氧终止法测定DNA序列的片段一样不能太长，如何运用本章所学知识测定较长片段的DNA序列？8 .用T4phageDNApolymerase可进行结尾标记，试简述其原理?9 .BAP和CIAP有何作用？为何一样采纳CIAP而不采纳BAP?10 .利用

8、本章学过的限制性内切酶学知识，设计一个实验确信某一点突变的具体位置。Chapter3vectorsConcepts：Vehicle,Plasmid,Phagemid,Cosmid,Mobilization,a-complementation,Lyticgrowth,LysogenicstateChromosomewalking,spi+(sensitivetop2interference),Insertionvectors,Replacementvectors,RFDNA,Shuttlevector,YAC(yeastartificialchromosome)一、填空题1. 载体(Vehicl

9、e)的类型有,等。2. Genecloning是指；基因文库(Genelibrary)是指。3. Plasmid的概念是。Plasmid能进行自我复制，大多数为_链状DNAib子，大小一样为kb。与virus比较，它们没有外壳蛋白，在其genome上也没有基因。4. 即为质粒的拷贝数，依照质粒拷贝数的多少，质粒能够分为和。质粒多数是一些具有传递能力的大质粒；质粒多数是一些不具有传递能力的小质粒5. 松弛型质粒和严谨质粒融合以后，杂合质粒一样优先利用的复制子。6. 称之为质粒的不相容性。若是两个质粒不能稳固地共存于同一个寄主细胞中，那么它们属于(填相同或7. 质粒具有转移性，它是指,它需要,。8

10、. 依照质粒的转移性能够将质粒分为和,一样大质粒都是,一样都是小质粒，在其DNAS因组上没有09. 按其用途可将标记基因分为选择标记和挑选标记，选择标记一样用于,挑选标记一样用于。10.经常使用的用来鉴定重组质粒的细菌菌落的方式11 .pBR32斯粒是基因工程最重要的人工质粒之一，它的大小约为_也，用于其组建的三个亲本质粒是和。此质粒具有一个colEI松弛型质粒复制子，两个挑选标记氨苇青霉素抗性基因和四环素抗性基因，其中colEI松弛型质粒复制子来源于,氨苇青霉素抗性基因来源于,四环素抗性基因来源于。12 .pUC系列的质粒载体是由和两种质粒构建而来的，其中氨苇青霉素抗性基因来自于,多克隆位点

11、MC既自于。pUC系列的质粒载体一样是成对存在的如pUC1诉口pUC19其要紧区别是。13 .质粒载体的附加功能要素要紧有,等。14 .入噬菌体Genome勺长度约为kb,其DN6子为(填单或双)链。它的DNA子既能够以状存在也能够以环状存在，而且能够自然成环，其缘故是在入噬菌体的线性分子的两头各有一个长度为个碱基的天然粘性结尾，这种粘性结尾能够自然成环，成环后的粘性结尾就叫做。15 .入噬菌体在感染大肠杆菌以后，能够进入Lyticgrowth也能够进入Lysogenicstate。若是其基因组DNA!过专一性重组整合到宿主染色体中，那么其进入;它也能够选择进入,大量复制并组装子代噬菌体颗粒。

12、16 .在入噬菌体载体中，要紧利用入噬菌体的生物学特性作选择标记，具体有,cI基因失活，和等。17 .改造后的人噬菌体才可用作载体，依照改造方式的不同可将其分为两种类型，即插入型载体(insertionvectors)和替代型载体(replacementvectors)。其中Insertionvectors是指；Replacementvectors!指。18 .ggt10是一个由入噬菌体衍生而来的insertionvectors,要紧用于。它缺失了含有溶源整合的;入gt11载体也是一种insertionvectors,该载体的最大特点是在最左侧可替代区置换了一段基因,可编码B-半乳糖甘酶，在I

13、PTG/X-gal平板上可形成色噬菌斑。19. 入噬菌体由于受到包装的限制，插入外源DNRt段后，其总的DNAfe度应该在噬菌体genome的范围内.20. Cosmid事实上是由和组成的杂合载体，也能够说是带有序列的质粒。21. Cosmid的组成包括三个部份：,和,其中复制子来源于,cos序列来源于。22. 入噬菌体的最大克隆片段是kb,Cosmid的最大克隆片段可达到b,YACS体的最大克隆片段可达kb,BACS体的最大克隆片段可达kb。23. 利用人噬菌体载体构建的genelibrary中，文库是以的形式存在的；用质粒载体构建的genelibrary是以的形式存在的；粘粒载体构建的ge

14、nelibrary是以的形式存在的。24. M13噬菌体颗粒是状的，其基因组为（填单或双）链DNA它只感染性大肠杆菌，感染宿主以后，其噬菌体颗粒的释放不像人噬菌体那样要裂解宿主菌，而是。25. 噬菌粒载体事实上是带有丝状噬菌体大距离区的质粒载体，是集质粒和丝状噬菌体的有利特点于一身的载体，它具有,及。26. 野生型的M13噬菌体不适合做基因工程的载体，要紧缘故是和027. M13噬菌体仅有两个大的基因距离区，别离位于与之间和和之问，这些基因距离区内含有的元件。其中，称为IG区，它有三个最重要的功能即,和。28. RFDNA!指。29. M13K071助噬菌体是的衍生株，它带有一个来自的复制起点

15、，还带有一个来自的卡那霉素抗性基因，用作选择标记；基因II带有一个A到的突变，致使基因蛋白质第40为氨基酸由甲硫氨酸变成异亮氨酸。30. YA或体大体组成元件有,和031. 表达载体（Expressvectoi）是在常规载体的基础上衍生而来的，其构建的原理主若是增加一个,和有利于表达产物的分泌、分离或纯化的元件；穿梭载体（ShuttlevectoG是指0二、问答题1 .何为载体？一个理想的载体应具有那些特点？2 .含pMB1或（ColE1）复制子的plasmid是如何复制的，具调剂机制如何?3 .当向细菌培育基中加入氯霉素时，能够使细菌质粒的拷贝数取得扩增，试分析其原理？4 .抗性基因(Res

16、istantgene)是目前利用的最普遍的选择标记，经常使用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？5 .何为a-complement?如何利用a-complement来挑选插入了外源DNA勺重组质粒？6 .试简述入噬菌体的Lyticgrowth和Lysogenicstate两种循环的分化及其调剂进程？7 .用人噬菌体载体进行genecloning时，要紧利用入噬菌体的生物学特性作选择标记，其中有cI失活和Spi挑选，请问什么叫cI挑选？什么叫Spi挑选?8 .什么缘故野生的人噬菌体DNA能直接用于基因工程的载体？应该如何对其进行改造来构建入噬菌体克隆载体？9 .什么叫染色体步查(chrom

17、osomewalking)?其用途如何10 .简述入噬菌体载体的克隆原理及一样步骤？11 .Cosmid的工作原理是什么?12 .比较入噬菌体载体和粘粒载体的结构和功能，并别离说出其优缺点?13 .在构建粘粒文库时会碰到哪些问题？你如何解决?14 .丝状噬菌体克隆中常常会碰到哪两类问题？可用何种方式来解决?15 .噬菌粒(Phagemid)具有那些特点？许多phagemid都有一个要紧的缺点，即在辅助噬菌体感染后，有时候单链DNA勺产量较底且重复性一样较差，试分析其缘故？16.YAC®体具有什么样的功能性DN亦列？什么缘故它在克隆大片段时具有专门大的优越性？Chapter4大分子物质

18、的分离和分析Concepts:Southernblot,Northernblot,Westernblot,Dotblot一、填空题1 .碱裂解法提取质粒DNA的原理是02 .抽提含pBR322系列质粒的细菌前，需在培育基中加入必然浓度的氯霉素，此氯霉素的作用是3 .从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方式有4 .琼脂糖凝胶电泳检测DNA时，需在DNA中加入加样缓冲液（一样为澳酚蓝或二甲苯青），此加样缓冲液的作用是、5 .在RNA的分离、纯化和检测进程中，需操纵RNA酶的活性，经常使用的RNA酶抑制剂有、06 .在用SDS分离DNA时，要注意SDS的浓度，%和1%SDS的成效是不同的，前者,后者。7

19、.预杂交的目的是,通常需在预杂交液中加入其缘故是08 .在Southernhybridization中，DNA经琼脂糖凝胶电泳后，通常须经NaOH处置，其缘故是09 .Northernhybridization检测RNA时，需将RNA片段转移到尼龙膜上，经常使用的转移方式10 .原位杂交的概念是,依照杂交的对象可分为和011 .DNA探针制备通常可分为均一标记和结尾标记，均一标记可分为和切口平移标记，切口平移标记的原理是12 .SSC是由NaCl和柠檬酸钠组成的试剂，其中NaCl的作用是而柠檬酸钠的作用是13 .在整个Southernhybridization进程中，一样需要防护的有、和。二、

20、问答题1 .分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？2 .琼脂糖凝胶电泳中，简述阻碍DNA在凝胶中迁移速度的因素?3 .CsCl-EB梯度平稳离心法分离质粒和染色体DNA的原理?4 .小量制备质粒DNA,用质粒中特定的酶切发觉切割不动，试分析可能缘故及克服方式？5 .何谓RNA的斑点杂交和狭线杂交？6 .以pUC18系列为载体，外源基因经酶切和载体连接后，将其导入处于感受态的宿主细胞中，挑选菌落，设计一个实验证明外源基因能在宿主细胞中转录表达。7 .Southernhybridization中，发觉最后杂交的信号不强，分析可能缘故？如何克服？8,简述随机引物标记的原理和步骤?9 .

21、何谓S1核酸酶作图？有何应用?10 .什么是Westernblot?它和Southernblot有何区别?Chapter5ThetechnologyandprincipleofPCRConceptsPCR(polymerasechainreaction)Denature,Annealing,Extension,Plateaueffect,InversePCROverlapextension,Randomprimer,SOE(splicingbyoverlapextension)一、填空题1. PCFH的简称。PCRS映体系的大体要素有,等。2. PCRS映进程分为三个步骤，即,和。3. PCR

22、S映受,等因素的阻碍。4. PCR5映常常利用的高温DNA5合酶是TaqDNApolymerase,此酶缺乏校读活性，因此其合成的忠实性就要紧取决于,。另外也取决于pH值和模板是不是被损伤。5. 在PCRK映体系中，Taqpolymerase的合成速度取决于,dNTP的浓度，,等。6. PC网映体系中往往要加入适量的矿物油，其作用是和O7. PC网映进程的最适温度仅与有关，其概念是指O8. 具有readingproof功能的高温polymerase有,等。9. 一样常规的PCRR能扩增b以下的DNAt段。_mmol/Lkcl,mmol/,mmol/LMgcl2。Tcloning是利用。12.随

23、机弓I物(Randomprimer)是指。二、问答题1 .PCRK术的原理是什么？从大的方面讲，PC敬术可用于那些领域？2 .Primer是PCRg映体系的四大要素之一，PCR的许多应用都是通过primer设计来实现的，请问primer设计的一样原那么是什么？3 .在PCRS映的后期，或循环次数过量时，反映体系中就会显现一种所谓的平台效应(Plateaueffect),请问什么叫Plateaueffect?产生Plateaueffect的缘故有那些？4 .在对PC蜻物进行电泳检测时，有时会显现拖带或非特异性扩增条带，请分析其缘故？若是检测结果是看不到DNAt或DNA<很弱，那又是什么缘故

24、？5 .通过双向蛋白质电泳发觉某蛋白质与某植物的一种表型紧密相关，假设要利用编码该蛋白质的基因来转基因植物，试问如何分离取得该基因？6 .一样常规的的PCRR能扩增1kb的以下的DNA>t段，对长片段DNA勺扩增是很困难的。请说出扩增超长DNA>t段的PCR®略？7 .由mRN应转录成cDN府口DNAPCFT增是两个完全不同的酶催化反映进程,如何将两个进程联系在一路，实现由mRN底始扩增出DNAChapter6DNAsequencingConcepts:Primerwalking,randomcloning,DNAsequencing一、填空题1 .年，创建了测定DNA序

25、列双脱氧终止法；同年，Maxam和Gilbert进展了。2 .ddNTP与一般的dNTP的不同的地方在于ddNTP,它们能够在DNA聚合酶的作用下，通过其掺入到正在增加的DNA链中，因致使链延伸反映终止。3 .在开始测序前，必需依照待测序列区的长度，所要求的测序精准度和现有的设施来制定测序总策略。依照测序的目的，通常可将测序分为和04 .经常使用的双脱氧终止法测定DNA序列，其长度一样可不能超过1Kb,因此进行大分子DNA测序时，需，经常使用的方式有、和05 .化学降解法进行DNA测序的原理是06 .在DNA测序中，Primerwalking的概念是07 .在引物设计中，有时会用到dITP,其

26、缘故是08 .构建嵌套缺失体的作用是,经常使用的方式是用限制性内切酶（Restrictionendonuclease消化两头，经常使用的酶除DNaseI外，还有和。二、问答题1 .用双脱氧终止法测定DNA序列时，为何一样需制备M13克隆载体而不直接采纳双链DNA?2 .简述PCR-银染测序法的大体原理?3 .何谓测序酶？与Klenow片段相较，它有何优势?4 .用化学降解法测定DNA序列时，需将DNA的一端标上放射性标记，试问如何实现结尾的不对称标记？5 .以下为某一DNA序列，据此回答以下问题5'-GATCTAAATTCTAGCCTTGAACTCATACGGGATTGTTAAATCT

27、AG-3'3'-CTAGATTTAAGATCGGAACTTGA-GTATGCCCTAAGAATTTAGATC-5(1) .在DNA测序中，引物设计的大体原理是什么？(2) .若是你打算扩增上图所示的一段序列之间的DNA,你会如何选择引物？6 .以下为双脱氧终止反映，经琼脂糖凝胶电泳和放射自显影所取得的X胶片图,依照此图，分析其结果？AGCT(1) .简述双脱氧终止法进行DNA测序的原理?.依照上图，写出该DNA片段的序列？.若是整个胶面显现模糊不清的带，分析可能缘故？若是整个胶面显现自下而上强度依次递减的带，但有一条带的带强度明显比下部的带强度要大，分析可能缘故？若是在胶的同一

28、高度显现多条带，而且强度不一样，分析可能缘故？显现以上情形时，如何读带？Chapter7Site-directedmutagenesisConceptsSite-directedmutagenesis,OverlapextensionSOE(splicingbyoverlapextension)一、填空题1. 基因突变(Genemutation)的类型有,等。2. dut-是指,细胞不能把dUTP转化为dUMP。ung-是指3. 利用PCR技术介导的定点诱变(Site-directedmutagenesis较经常使用的方式一样有三种，即,。二、问答题1 .什么叫标记获救现象？2 .利用SOE重

29、叠延伸技术(splicingbyoverlapextension)能够将两个DNA片段在所期望的位点进行连接，请说出其设计方案和技术线路？3 .说出一种利用PCR技术进行目标基因定点诱变(Site-directedmutagenesis的原理和技术线路？4 .核甘酸介导的诱变中有一种方式叫Kunkel法，或称“U”法，请说出其原理和技术线路？Chapter8GenecloningConcepts：cDNAlibrary,Genelibrary,Okayama-Berg一、填空题1 .构建Genelibrary时，应依照所要分离的外源基因的大小选择适合的载体，这些载体通常包括有人噬菌体、YAC和、和等。2 .构建cDNAlibrary时，cDNA的第二链合成的方式要紧有>、和。3 .构建低丰度mRNA的cDNAlibrary,需进行富集处置，经常使用的富集方式有、和04 .常规用于构建cDNAlibrary的两种入噬菌体载体是入gt10和,入gt10用于构建只用核酸探针挑选的文库，而后者用于。5 .扣除杂交的原理是6 .Genecloning的目的是,经常使用的方式有、7 .噬菌斑形成选择法有两种判定标准，一是二是二、问答题1 .什么是Genelibrary?它与cDNAlibrary有何区别？2 .简述以质粒为载体构建Genelibr