分子医学技能：实验一-淋转试验

1、T T淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验( (T lymphocyte transformation test) )实验目的和要求实验目的和要求u 掌握掌握T淋巴细胞转化实验的淋巴细胞转化实验的原理原理u 掌握掌握细胞计数的方法细胞计数的方法u 熟悉能引起熟悉能引起T淋巴细胞发生转化淋巴细胞发生转化 的常用抗原性物质及其特点的常用抗原性物质及其特点实实 验验 原原 理理DNADNA合成合成分化分化淋巴母细胞淋巴母细胞刺激物刺激物细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松T淋巴细胞淋巴细胞未转化细胞未转化细胞过渡态细胞过渡态细胞淋巴母细胞淋巴母细胞体外刺激

2、物种类体外刺激物种类u 非特异抗原刺激物：如非特异抗原刺激物：如PHAPHA、ConAConA等等u 特异性抗原刺激物：如特异性抗原刺激物：如PPDPPDu 细胞抗原和抗淋巴细胞抗体：如同种细胞抗原和抗淋巴细胞抗体：如同种 白细胞、抗淋巴细胞血清等白细胞、抗淋巴细胞血清等实 验 方 案细胞培养细胞培养: : 外周血分离的单个核细胞外周血分离的单个核细胞与与 植物血凝素植物血凝素( (PHPHA A) )混合体外培养混合体外培养3 3天天观察细胞形态变化观察细胞形态变化: : 部分部分T T细胞转化为淋巴细胞转化为淋巴 母细胞，部分可见母细胞，部分可见核有丝分裂核有丝分裂现象现象 判定判定T 淋

3、巴细胞转化率（淋巴细胞转化率（%）实实 验验 材材 料料u 肝素抗凝血u Hanks液u 淋巴细胞分层液u PHAu 细胞计数板u 显微镜 操操 作作 步步 骤骤淋巴细胞的分离用用Hanks液配成液配成1 110106 6 细胞细胞/ml/ml的淋的淋巴细胞悬液。巴细胞悬液。加加PHA 5ug/ml5ug/ml分别加入分别加入2424孔细胞培养板，培养孔细胞培养板，培养7272小时小时离心：离心：1000rpm 1010分钟分钟弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液推片，推片，姬姆萨姬姆萨染色，油镜观察染色，油镜观察阴性对照：不加阴性对照：不加PHAPHA结结

4、 果果 观观 察察转化细胞：转化细胞： 淋巴母细胞淋巴母细胞： 体积大，核膜清楚，染色质疏松体积大，核膜清楚，染色质疏松呈细呈细 网状，核网状，核/ /细胞比例变小。细胞比例变小。 过渡型淋巴细胞过渡型淋巴细胞：类似母细胞类似母细胞。 核丝分裂相细胞核丝分裂相细胞：核体呈现有丝分核体呈现有丝分裂，胞内可见组织染色体。裂，胞内可见组织染色体。未转化细胞：未转化细胞： 成熟小淋巴细胞成熟小淋巴细胞：体积小，核染色体积小，核染色体致密，核体致密，核/ /细胞比例大。细胞比例大。衰老退化细胞衰老退化细胞：胞浆部分或全部破碎（不计数）：胞浆部分或全部破碎（不计数）未转化细胞未转化细胞转化细胞转化细胞转化

5、和未转化细胞特征转化和未转化细胞特征细胞类别细胞类别转化细胞转化细胞未转化细胞未转化细胞母细胞母细胞过渡型过渡型细胞体积（细胞体积（umum）12-2012-2012-1612-166-86-8细胞细胞大小大小染色质染色质核仁核仁有丝分裂有丝分裂增大增大疏松疏松1-41-4个个+ +或或- -增大增大疏松疏松有或无有或无 - -不增大不增大密集密集无无 - -胞浆胞浆增色增色着色着色空泡空泡伪足伪足+嗜碱嗜碱+ +或或- -+ +或或- -+ +嗜碱嗜碱+ +或或- -+ +或或- - -天青色天青色- - -正常成熟淋巴细胞正常成熟淋巴细胞转化为淋巴母细胞转化为淋巴母细胞核丝分裂相细胞核丝分裂相细胞转转 化化 率率 计计 算算u 转化率转化的细胞数转化率转化的细胞数/ /淋巴细胞总计数淋巴细胞总计数u 计数计数200200个淋