N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）注册资料10 NAG临床试验方案

1、N-乙酰-B -D-氨基葡糖糖甘酶测定试剂盒（比色法）临床试验方案产品名称：N-乙酰-B-D-氨基葡糖糖甘酶测定试剂盒（比色法）包装规格：试剂1 30mlXl试剂2 10ml XI拟试验时间：2014年10月1日2015年3月31日临床试验主要研究者（签名）：承担临床试验的研究单位（公章）：统计学负责人（签名）：统计学单位（公章）：临床试验类型：新诊断试剂产品的研究已有同品种批准上市的临床研究关于变更申请中产品临床研究注册申请人（盖章）：注册申请人联系人及联系方式：姜志华 89672199版本号：20140930第一版 版本日期：2014年9月30日-临床试验的背

2、景NAG又称尿酶，是广泛分布于人体各组织细胞中的溶解体水解酶，与黏多糖类 及糖蛋白代谢有关。在近曲小管上皮细胞和前列腺中含量较高。NAG分子量约为14kD, 正常情况下，血清中NAG不能通过肾小球滤过从尿中排泄。故尿中的NAG主要来自 肾近曲小管上皮细胞，此前在尿中稳定，成人尿中正常参考值范围为0.3T2U/L （各 医院的测试方法不同，参考值不完全相同）。尿中NAG的升高是肾脏疾病的早期表现，是肾小管损伤的敏感指标。尿中NAG 增高见于：（1）肾小管疾病，如肾小管间质病变、先天性肾小管病变、急性肾功能 衰竭、药物诱发肾毒损害、肾移植排异反应等，均可引起肾小管损伤而使尿NAG升 高。肾移植出现

3、排异反应前1-3天，尿NAG即可增高，有助于早期诊断排异反应。 尿NAG测定可作为氨基糖甘类抗菌药物的肾毒性检测试验。（2）肾小球病变，如肾 小球肾炎、糖尿病肾炎等尿NAG活性也升高，且与病变程度相关。糖尿病肾炎早期, 由于滤过压增高，滤过膜负电荷减少，裂孔变化，血浆白蛋白滤出增加，在近曲小 管被重新吸收后，尿白蛋白排泄可不增加，但此时，因细胞溶酶体被激活，导致尿 NAG升高，且NAG/尿肌酎比值增高，先于尿白蛋白排泄量的变化。肾移植患者，尿 NAG测定可早期发现排斥反应，一般在临床指征前1-3天即有尿NAG增高。目前把 mALb和肾小管标记蛋白（NAG等）作为早期发现和监控糖尿病合并症的常规

4、指标。 另外，尿NAG的监测在多种肾实质疾患中有不同程度的升高，是肾脏损害的较敏感 指标，增高见于急慢性肾炎，休克引起的肾功能衰竭、肾病综合症、中毒性肾病等。N-乙酰-8-D-氨基葡糖糖苜酶测定试剂盒（比色法）为长沙海润生物技术有限 公司研发注册的产品，按照现行体外诊断试剂注册管理办法需要进行临床试验 研究，临床研究资料作为注册资料的一部分。为了完成产品注册和确认其有效性和 安全性，需要通过2家以上医疗机构开展临床研究，试验结束后各临床单位根据结 果编制临床试验报告，研制单位汇总后书写总结报告。二临床试验的研究目的以本公司研制的N-乙酰氨基葡糖糖昔酶测定试剂盒（比色法）作为临床 试验的研究产品

5、（以下简称为研究产品），选择已批准上市的同类型成熟产品：山东 博科生物产业有限公司生产的N-乙酰氨基葡糖糖甘酶检测试剂盒（比色法） 作为对照产品（以下简称为对照产品），针对同一临床样本进行对比试验研究，通过 试验数据的统计分析以评价研究产品的临床应用性能，为其有效性及安全性提供重 要的依据。三临床试验的管理临床试验由试验单位和注册申请单位分别委派专人共同负责管理，临床实验前, 由双方负责人协商、确定临床试验方案，确定临床试验负责人、主要参加人员以及 实验过程质量控制、试验数据管理、统计分析方法。临床研究单位按照双方确定的 试验临床方案进行临床试验研究，申请单位协助和监督执行。一般情况下，临床试

6、验方案不宜更改，对于研究中的任何修改均应说明，并按 照双方认可，对更改的时间、理由、更改过程及有无备案进行详细阐述并讨论其对 整个研究结果的评价和影响。四临床试验总体设计1研究样本量及其确定依据依据国家对体外诊断试剂临床研究技术指导原则，W乙酰氨基葡糖糖汁 酶测定试剂盒（比色法）为第二类医疗器械产品，临床研究的总样本数最少为200 例。确定2家三甲医疗卫生单位，例数符合统计学要求与体外诊断试剂临床研究 技术指导原则、医疗器械临床试验规定的要求，NAG在（0-200）U/L浓度范围 应尽量分散。2样本入选依据2. 1选择对象范围N-乙酰-B-D-氨基葡糖糖甘酶测定试剂盒（比色法）主要是用于体外定

7、量测定 人体尿液中2乙酰-B-D-氨基葡萄糖昔酶（NAG）的活性，临床上主要用于辅助评价 肾小管损害。临床样本可为医院门诊、体检中心、检验科或住院患者样本。2. 2入选标准所选标本从临床试验机构的日常检测样本中挑选，其中可能包括检测的正常样 本与其他检测指标异常的样本。选取样本时，应尽量保证检测值在线性范围内均匀 分布，避免集中在某一小段区域；同时存在异常低值及异常高值时，应尽量均匀地 选取样本，不可使异常样本数偏于一侧。2. 3排除标准标本量不足以完成整个试验的检测者;不符合入选标准者；登记表记录中缺少核心信息的病例。4剔除标准3样本采集、保存、运输方法等中途退出本试验者有其中之一者，符合剔

8、除 标准。凡在入组后发现不符合试验方案者3.1样本类型样本应为新鲜尿液。应按说明书要求采集、处理和保存尿液。严格避免使用血 尿，防止结果假性偏高。3.2样本采集、保存、运输方法（详见产品说明书）3样本编码与设盲样本采集的同时立即编码，编码由专人保管，同事设盲，待试验结束后揭盲，试 验操作采用盲法。4对照产品的确定我们选择了已批准上市且目前临床普遍认为质量较好的山东博科生物产业有 限公司生产的N-乙酰氨基葡糖糖甘酶检测试剂盒（比色法）（以下简称为对 照产品）作为对照产品。对照产品的相关信息如下：产品名称：N-乙酰氨基葡糖糖甘酶检测试剂盒（比色法）规格型号：Rl:18mLXl R2:6mLXl注册

9、证号：鲁食药监械（准）字2014第2400627号检测原理：NAG水解2-甲氧基-4 （2 -硝基）-苯基2-乙酰氨-2-去氧-B-D-氨基葡萄糖 （MNP-GlcNAc）为2-甲氧基-4 （2 -硝基）-苯酚。在碱性溶液中505nm波长处比色 测定，其变化程度与样本中的NAG活性成正比。主要性能指标：空白吸光度：在波长505nm, 1cm光径下，试剂空白吸光度W0. 5。精密度：重复性CVW10%；批间差RW10%。准确度：相对偏差W10%。线性范围：0200U/L,线性相关系数（r）应不小于0.990； （0-34） U/L, 线性绝对偏差应不超过3.4U/L, （34200） U/L,线

10、性相对偏差应不超过 10%。稳定性：本试剂在2c8、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12个月。5临床研究所有产品的名称、规格、来源、批号、效期及存储条件等项目对照产品研究产品名称N-乙酰-B -D-氨基葡糖糖苜酶检测试剂 盒（比色法）N-乙酰- B -D-氨基葡糖糖昔酶测 定试剂盒（比色法）来源山东博科生物产业有限公司长沙海润生物技术有限公司注册号鲁食药监械（准）字2014第2400627号规格与批号规格:Rl:18mLXl R2:6mLXl批号：20141010E规格：RI： 30ml XI； R2： 10ml XI 批号：20141118适用仪器本产品适用于BIOBASE分立式全自动生 化分析

11、仪、日立7020、0LYMPUSAU640全 自动生化分析仪。本试剂盒适用于日立7060/7600. 西门子1650、贝克曼DXC800、奥 林巴斯2700、东芝120FR全自动生 化分析仪。也可根据实际情况选择 其他系列或型号的全自动生化仪。参考值（参考范 围）0.3-12U/L(0. 3-12)U/L存储条件和效 期试剂在2-8C密封避光保存，有效 期为12个月。已经开启的试剂注意避免 污染，在2-8保存，有效期为30天。1、试剂在2-8密封避光储 存，不可冷冻，有效期为12个月。2、试剂开瓶后，2-8避光储 存可稳定2周，及时清理残留试剂 避免污染。6质量控制方法本临床试验采用对照、随机

12、试验设计。将入选病例随机编码，采用盲法对对照 产品和研究产品进行检测。1临床试验现场质量控制本研究过程中，由临床监督员定期对研究单位进行现场监察访问，以保证方案 得到严格准守与实施、研究资料填写正确。参加研究人员必须经过相关培训，统一 记录方式与判断标准。每一考核样本填写相关的详细资料，其中包括考核对象明确 的临床资料（内容包括：样本流水号、实验室检测结果等），确保填写内容完整真实、 可靠、临床试验中所有观察结果和发现都应加以核实，以保证数据的可靠性，确保 临床试验中各项结论来源于原始数据。在临床试验和数据处理阶段均有相应的数据 管理措施。2临床试验过程质量控制严格按照体外诊断试剂检验实验室的

13、工作规范进行临床研究实验，试验过程中 的试剂准备、样本处理、仪器测试和结果分析严格分区管理和分区操作，单向流动, 防止交叉污染。试验操作和结果判断严格按照各自的说明书进行，每次试验中，研究产品或对 照产品均需要做质控品测试，结果应符合各自说明书中的质量控制要求，确保试验 结果有效。7临床研究数据的统计分析方法7.1测试方法：将研究产品和对照产品针对同一临床样本进行检测和统计分析，两种产品对同 一临床样本检测值相对偏差不超过15%o当检测结果偏差大于15%,需重新进行检测, 如果相对偏差超过15%,应采用其他方法或原理试剂再次进一步验证试验，以便对临 床研究结果进行分析，验证本公司研制的研窕产品

14、与已上市的对照产品的临床性能 等效。相对偏差(%)/研究产品测值一标准值xioo% 标准值2配对T检验统计分析(a=0. 05)将研究产品与对照产品之间的检测结果作配对t检验。PW0. 05,研究产品与对 照产品之间有统计学差异；P0. 05,两个产品之间无统计学差异。3线性回归分析以研究产品的测试值为Y轴，对照产品测试值为X轴做散点图，并进行线性回 归分析，得出回归方程及线性相关系数。研究产品和对照产品的测试值应具有线性相关性，相关系数R20. 975o五各方承担职责1注册申请人负责为临床试验的医疗机构提供试验用的NAG测试系统及相关技术资 料，与实施者共同设计、制定临床试验方案，双方签署临床试验方案及协议。2临床试验机构负责与实施方共同设计、制定临床试验方案，双方签署临床试验方案 及协议，如实记录受试产品试验数据，提交临床研究报告，并对报告的正确性及可 靠性负责，对实施方提供的资料负有保密义务。六临床试验人员姓名科室职务/职称负责试验内容临床研究主要负责人临床试验