土壤微生物分离实验报告

1、土壤生物离实报告周 第组 级科地刘 孙 卢峰 鲁安 齐 闪【要利分纯微物基操技对壤的生进行离纯，据落态察染鉴以一列生生试的果过阅伯氏系细学册对种特 最判所离化细所的。【By methods and technique, got bacteria whichwere from soil. to the results of colony observing, experiments of and bio-chemistry, the Bergey and finally decided their 【键】兰阳、孢片菌 芽孢菌【 Words】Gram Positive 、Pediococcus、

2、Bacillus实目：、习土中离纯微物的理方。、习掌微物鉴方。、提的样行生的离、化养并行单形鉴。、简鉴后微物行理生鉴并鉴结查杰手以定离微物的 种实原：从复杂微生物群体获得只有一种或某株微生的过程称为生物的离 与纯化常用的方法1简单单胞挑取法2平板分法此次实采取的是平分离法，该方法作简单普遍用于生物的离与化。 其原理括两方面：1在适合待分离微生的生长件（如营养酸碱度温度与氧等下培养生 物，或入某种抑制造成只于待分离微物的生，而抑制其微生物长 的环境从而淘汰一不需要微生物。2微生物固体培养基生长形的单个菌落以是由个细胞繁殖成的集体。因可通过挑取菌落而得纯培养。得单菌的方法可通稀释涂平 板或平划线等

3、方法成。但是从生物群体中分离生在平板上的个菌落不一定保证纯培养因 此，纯养的确定除察其菌的特征外，要结合微镜检测个形态特后才能 确定。的微生物的培养要过一系列分与纯化程和多种特鉴定才得到。土壤是生物生活的本营，所含微生物论是数还是种类都极其丰的。 因此土是微生物多性的重场所，是发微生物源的重要基，可以中分离纯 化的到多有价值的株。此验将从土壤分离两细菌。实器、剂菌：1、 材：培养皿载玻片、盖片、普光学显微镜量筒、管、吸水纸烧杯、角 瓶、电、玻璃棒、种环、子、搪瓷杯恒温培箱、高温灭锅、移枪 （枪头电子天、滤纸、pH 试纸等。2、 剂：配制牛膏蛋白胨培基的原（牛肉膏NaCl、脂、蛋白胨配置糖发酵

4、培养基原料（葡萄、 K HPO 、溴百里酚蓝琼脂 NaCl、白胨、油2 3（丙三结晶紫染液番红染、碘液、乙醇、雀绿染、 番红水液、过氧氢水溶、1酸二甲基对撑二胺液、蒸馏水。3、 样：取自山东大 7 宿舍门前土，地下 10cm 左右。实步：1配制牛膏蛋白胨培基：1配制牛膏蛋白胨琼培养基 500ml （用于 12 个平皿和 10 支试管斜面牛肉膏 0.3% 1.5 g蛋白胨 1% 5gNaCl 0.5% 2.5g琼脂 2% 10gpH 7.07.22倒 12 个平板 10 试管斜面，包扎，灭菌 20min.2制备土稀释液：称取土 10g放入盛有 无菌水的带有玻珠的三瓶中振荡摇匀 10min 使土和

5、充分混合，后用移枪从三角瓶吸取 （此操作求无菌作，入另一盛 9ml 无菌水试管中合均匀此类推别制成制成 0.010.0010.0001 不同稀度的土壤溶。1ml 0.1 0.001 0.0001稀释过程意图（图中左梯形为三角瓶，其中入 100ml 菌水与 土，土壤溶液稀释度为 依此类推右侧三试管中土壤稀度分别为： 、0.0010.00013、布培养以 0.01 及 0.0001 两个浓度的壤稀释作为涂布平培养的象将其分涂 布在 3 个肉膏蛋白胨养基中共 6 培养基标号， 温箱培 。4、线分离划线培养对两种壤溶液的微物培养进行观察，录两种分明显的细性状。取 此两种菌在新的培基中划培养（每种菌培养

6、 3 培养皿标号、37C 培 养。5、步鉴定对两种进行简单染、革兰染色以及芽染色观，记录结果6、管斜面培养：将两种菌株接种分接种在 5 试管中，共 支管37C 培（24h 7、试管中养的两种菌行生理化鉴定：1）氧化氢鉴定：A 实验原理：乳酸菌许多厌氧菌其他细区分的主要据是鉴有无过氧化酶。 该酶可把过氧化氢解为水氧气，气体以气泡出来，则为氧化氢 实验阳。乳酸菌和多厌氧在过氧化氢实验中现阴性。B 步骤：将培养鲜的待测菌（培养 1824h ）接在玻片上滴一滴 3氧 化氢于体上。2）发酵与化实验A 实验理：在细菌分类鉴定中糖发酵氧化测定是项重要依据。绝大数细菌 都可以用糖类作为源以及源，但由于同的菌在

7、酶系的差，因而 糖类的酵与氧化的力就有不同有的在类发酵与氧代谢中分解糖 类，产产气，有的只能产不可以产气酸的产与否，以及发酵型 酸还是化型产酸，以由预加在培养基的指示（溴百里酚水溶液 呈现出。这样把接菌种的养基放在厌或好氧环境下培养培养基 绿色变黄色为产酸是否产气是过观察养基中是否生气泡培养基断 裂来测。B 步骤 配置糖发酵培养 ml 萄糖K HPO 百里酚琼脂NaCl、2 3蛋白胨分装试。 110C 灭菌养基 20 mins （同时灭一定量油，待用。 对两种细菌进行穿刺”养，每种菌 个试管2 盖管培养2 开管 培养，个为盖管对组。在养基的上方入 2cm 厚的甘，作为盖 管以提供菌体氧的生环境

8、，开管不加甘，作为有氧生长环供 菌体生。 在 下培养并在培养 24h 后观察培养基中色的变以及有无气泡 3）胞色素化酶测定A 实验理细胞色氧化酶是氧酶的一它在有子氧以及细色素 C 存时， 可以氧 二基对苯二胺，使之现玫瑰或暗红色，此基础还可 与 a酚结合成吲哚酚兰出现蓝B 步骤在干净养皿中放一纸，用柴棒取培养 1824h 鉴定菌黏在滤 纸上，一滴 1盐酸二甲基对苯二胺溶于菌苔上，行观察实结：1、种分离菌的简单鉴以及生生化鉴定结：来培条鉴定结表 1细 1细 2小河泥1 牛膏白培基养用肉观说察定简鉴、氧氢鉴、 细色氧酶定验2 糖酵养用糖酵氧实验肉眼观察鉴定简单鉴定大形高颜边干革氏色简染芽染鞭染较圆

9、中凸白整湿紫（革氏性）球 0.81.0m没芽无毛小圆中凸淡不则湿紫革氏性 菌杆 0.40.92.23.0m有孢有毛培物现泡阳、气为性简单生理过 氧 酶定糖酵阳培基上部 黄为酵（刺阳上黄下绿反。验阳说两细均有 过化酶它不厌型菌乳 酸。在养 后若养上为色下 部蓝色证细为化；培 养全变黄，者部为色 上为绿则明菌发型通生化鉴定氧实线丝，色不 在面长色菌氧型 过养知开培基（氧件下中细的长但闭培基 （氧件）没细生，明 两菌非氧。细色氧酶定结阴片菌阴芽杆属1min 内菌苔现色阳，1min 以出红为性片球菌属拉学(Pediococcus) 细球形不长直 1.2 m在宜件，分以二方形四，有也出成排，个胞罕，形链。 兰阳。运，产孢兼厌，的株有时抑制长化异， 胞要富养培基发糖(主要单和双类。萄产不气主产 是 或 L(+)-酸接酶性化也性还硝酸最生温 。 出于菜食；植或物致，间别表 7-7 。 模式：害球 (Pediococcus 。细-肠杆菌芽孢杆菌拉学（） 革兰氏色性。生孢需或性氧大数动，荚，数血通过化酶性包对和动致的疽孢 菌可起物毒蜡芽杆，致性枯芽杆、蕈芽杆、粘 孢菌。疽孢菌荚，鞭，人培物细呈长状列形圆 形孢芽位菌中 ，但大菌宽度专需；孢抵力强在燥 状下生数年本主使草物病