医院消毒效果细菌学检测 市CDC许烈英（六）

医院消毒效果细菌学检测自贡市疾病预防控制中心卫生检验所许烈英一、医院消毒效果监测的意义医院消毒灭菌是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段，因而在医院消毒、灭菌工作中必不可少。二、医院消毒效果监测范围日常监测重点科室：手术室、层流洁净病房、ICU、产房、新生儿科、母婴同室病房、透析室、血液病房、烧伤病房、供给室、内镜室、治疗室、换药室三、医院消毒效果监测分类消毒灭菌效果监测：使用中消毒液或无菌器械保存液灭菌设备〔压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器〕紫外线灯灭菌物品环境卫生学监测：空气物表医务人员手四、细菌检测方法采样及检查原那么采样必须采取无菌操作，防止污染。送检时间不得超过4h，假设样品保存于0-4℃条件时，送检时间不得超过24h。采集和运送方法正确与否直接影响标本的检验质量。〔一〕、灭菌器灭菌效果检测1.主要方法：化学法〔化学指示卡、指示胶带〕生物法2.常用灭菌器种类：压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器、干热灭菌器3.生物指示物：嗜热脂肪杆菌芽胞〔ATCC7953〕—压力蒸汽灭菌器枯草杆菌黑色变种芽孢〔ATCC9372〕—干热灭菌器和环氧乙烷灭菌器化学指示卡化学指示胶带4.检测方法4.1高压蒸汽灭菌效果的监测：?消毒技术标准?〔2002〕常用生物监测法，用嗜热脂肪杆菌芽胞〔ATCC7953或SSIK31株〕为指示菌，每张纸片含菌量为5.0×105～5.0×106CFU，在121℃+0.5℃，D值为1.3min~1.9min,KT值≤19min,ST值为≥3.9min。消毒灭菌后将指示菌纸片放入溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，置56℃培养7天〔自含式生物指示物按说明书操作〕，观察培养基颜色变化，如果培养基不变色为无细菌生长，说明灭菌合格；如果培养基由紫色变为黄色表示有细菌生长，查找原因后重新灭菌。同时做阳性和阴性对照。4.2环氧乙烷灭菌效果：?消毒技术标准?〔2002〕常用生物监测法，用枯草杆菌黑色变种芽孢〔ATCC9372〕菌片为指示菌，消毒灭菌后将指示菌纸片放入含有复方中和剂的0.5%的葡萄糖肉汤培养基中，以未经处理的阳性菌片做相同接种，均置36℃+1℃培养，阳性对照在24h内有菌生长，样品连续观察5(7)天，观察培养基颜色变化，如果培养基不变色为无细菌生长，说明灭菌合格；如果培养基由紫色变为黄色表示有细菌生长，查找原因后重新灭菌。同时用质控菌株做阳性和阴性对照。注意：所用菌片须经卫生部许可，并在有效期内使用。〔二〕空气消毒效果检测1.布点及采样方法：平板暴露法〔1〕Ⅰ类环境布点、采样方法：参照?医院洁净手术部建筑技术标准?〔GB50333-2002〕将普通营养琼脂平面〔直径为9cm〕放在室内手术区和周边区各采样点处，采样高度离地面≤0.8m,采样时将平面盖翻开，扣放于平面旁，暴露30min，盖好。36℃+1℃培养48h,分别计数手术区和周边区的平均菌落数。注意：设置空白对照1.用于检测的培养皿〔含培养基〕做阴性对照，每批一个对照皿。2.过程对照：模拟操作过程，但培养皿翻开后立即封盖。3.两次对照必须为阴性。菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后1位。(2)Ⅱ、Ⅲ类环境采样、检测方法GB15982-2021将普通营养琼脂平面〔直径为9cm〕放在室内各采样点处，采样高度离地面0.8m~1.5m,采样时将平面盖翻开，扣放于平面旁，暴露规定时间〔Ⅱ类环境暴露15min，Ⅲ、Ⅳ类环境暴露5min〕后盖好，于36℃+1℃培养48h,计数平板菌落数，必要时别离致病性微生物。结果按平均每皿的菌落数报告：CFU/(皿.暴露时间)〔三〕物表和医务人员手检测1.?医院消毒卫生标准?GB15982-20212.采样方法：用浸有0.03mol/L的磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子涂抹，涂抹后剪去手接触局部，投入10ml采样液的试管内，立即送检。假设采样物体外表消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。3.检测工程：细菌总数、大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌细菌总数：将采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0mL接种平面，置36℃+1℃培养48h，计数菌落数：

细菌总数〔CFU/cm2〕=

〔四〕使用中消毒液检测1.采样：用无菌吸管吸取消毒液，参加含相应中和剂的采样管内，作10倍稀释混匀。2.检测工程：染菌量、铜绿假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌3.染菌量：用无菌吸管吸取消毒液1.0mL,加到9mL中和剂的采样管中混匀，分别取1mL放入2只灭菌平面内，参加熔化好的40℃~45℃的琼脂混匀，36℃+1℃培养72h。消毒液染菌量〔CFU/mL〕=平均每皿菌落数×10×稀释倍数4.致病菌检测4.1大肠菌群〔第一法〕阴性GB4789.3-2021GB/T4789.3-20034.1大肠菌群〔第一法〕阳性GB4789.3-2021GB/T4789.3-20034.2沙门氏菌菌落形态

XLD沙门〔黑色〕，大肠〔黄色〕科玛嘉鼠伤寒〔紫红色〕BS沙门菌典型菌落HE沙门菌典型菌落4.2沙门氏菌菌落形态4.3铜绿假单胞菌菌体长短不一球杆状或长丝状.单端单鞭毛动力+无芽胞.可形成多种不同形态的菌落.产多种色素(主要为绿脓素、荧光素)典型型〔普通平板上〕大小不一，圆形，边缘不整齐，扁平，湿润产绿脓素琼脂染成黄绿色典型〔血平板上〕：扁平湿润有金属光泽琼脂被染成蓝绿或灰绿有溶血环粘液型〔麦康凯平板〕粘液型〔血平板〕菌落光滑凸起成粘液状侏儒型〔麦康凯平板〕细小，无光泽半透明菌落菌落呈灰绿色大小不一扁平湿润边缘不规那么呈伞状伸展外表常可见金属光泽典型型〔麦康凯平板〕粗糙型〔麦康凯平板〕菌落中央凸起边缘扁平外表粗糙大肠型〔麦康凯平板〕菌落圆形凸起似大肠埃希菌菌落4.4金黄色葡萄球菌B-P平板上，圆形，滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉色，边缘常为淡色〔米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色〕，周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感革兰阳性球菌，排列成葡萄状，无芽孢与荚膜血平板上菌落形态金黄色或乳白色，大而突起，圆形，不透明，外表光滑，周围有/无溶血圈。4.5乙型溶血性链球菌革兰阳性球菌，单个、成对或成链排列，革兰氏染色阳性，不生芽孢。链的长短常与细菌的种类及生长环境有关，液体培养中易呈长链。4.5溶血性链球菌为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，外表光滑，有乳光，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。监测发现：1.局部空气菌落总数不合格。2.物表主要为细菌总数不合格、部位主要在洗手池边缘、门把手、旋钮、鼠标等。3.多家大医院多个部门的物表样品中检出条件致病菌：蜡样芽孢杆菌

蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品中常见。其产生的肠毒素可引起食物中毒，也可引起感染性眼内炎。为何多家大医院均检出大量蜡样芽孢杆菌？科室内自身污染？如果是自身污染，可能的原因有：1.消毒不彻底？采样液？采样棉签？检测高压灭菌效果、采样液、采样棉签结果：均为阴性2.实验室污染？