十二章-免疫学检验的质量保证(与“测定”有关文档共47张)

免疫检验质量控制相关的基本概念。标准品的分类及特性。定量、半定量和定性实验的质量控制方法检测试剂免疫学检测试剂的批间差异和稳定性。免疫学实验常用评价指标。本章要点第1页，共47页。返回总目录目录

免疫检验质量控制的概念1免疫检验质量控制的特殊性2免疫学实验常用评价指标和质控方法3第2页，共47页。前言免疫学检验是临床检验中一大类重要的常规检查,对疾病的诊断、筛查、监测疾病的发展过程和观察患者对治疗的反应等方面发挥着重要的作用。如何保证检验结果的质量，在日常检测中如何贯彻实施质量保证是免疫学检验的一个重要内容。第3页，共47页。第一节免疫检验质量控制的概念免疫检验要保证检验结果的准确、可靠、及时、有效，并尽可能使各实验室间检验结果有可比性，这是免疫检验质量保证的基本目的。只有明确了免疫检验质量控制的概念，才能真正理解免疫检验的质量控制，并准确、有效地完成质控工作。4第4页，共47页。一、基本概念准确度（accuracy）

待测物的测定值与其真值的一致性程度。精密度（precision）

在一定条件下进行多次测定，所得结果之间的符合程度。第5页，共47页。（二）Cutoff值批间差异的控制由二级标准品的比对而来的，通常由实验室自己或试剂生产厂家制备。酶标记抗体在应用防腐剂时要注意不能用NaN3。免疫学检验方法的种类较多，其测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此进行质量控制的手段不能照搬生化模式。免疫检验室在进购试剂时，要选择质量有保障的正规试剂产商，建立完善的实验室内质量控制体系，尽量减少批间差异使其在规定的范围内（一般CV<15%），这对长期控制免疫检测结果的可靠性大有裨益。抗核抗体血清(均质型)待测物的测定值与客观存在的真值之间的差异。正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明，均数是位于曲线的正中线所对应的值。本指标是用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断特异度应为100%。第三节免疫学实验常用评价指标三、检测试剂的批间差异测定多份阴性血清，设定Cutoff值恰好高于95％的阴性血清的测定值。误差（error）

待测物的测定值与客观存在的真值之间的差异。包括系统误差和随机误差两类。偏差（deviation）

待测物的测定值与多次测量平均值之间的差异。第6页，共47页。重复性条件（repeatabilityconditions）

在同一实验室内，由相同的操作者使用同一仪器设备，在短的间隔时间内对相同的测试项目使用同一方法相互独立进行的测试条件。批（run）

在相同条件下所获得的一组测定。第7页，共47页。均值（mean）

一组测定值中所有值的平均值，也称均数。标准差（standarddeviation，SD或S）

用于表示一组测定数据的分布情况。第8页，共47页。变异系数（coefficientofvariation，CV）

标准差与平均值之比用百分数表示。CV是相对比，没有单位，更便于资料间的分析比较。第9页，共47页。正态分布(gaussiandistribution)

当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明，均数是位于曲线的正中线所对应的值。第10页，共47页。正态分布是质量控制图的理论依据，也是许多统计方法的理论基础，正常情况下测量（或实验）误差服从正态分布。第11页，共47页。第三节免疫学实验常用评价指标抗核抗体血清(均质型)质控品（物）（qualitytestingmaterisls）（externalqualityassessment，EQA）由于批间差异的影响，室内质控只能是一个批号的试剂盒使用一个质控框架图。诊断特异度（specificityofdiagnosis）FITC—绵羊抗人Ig质控品（物）（qualitytestingmaterisls）由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室从收取样本至获得测定结果，并对结果进行分析的整个测定过程可靠性程度的措施。室内质控则应选择特定试剂盒或方法的测定范围内的高、中和低三种浓度的质控品，以监测不同浓度标本测定结果的变化。FITC—绵羊抗人Ig待测物的测定值与客观存在的真值之间的差异。是专门用于质量控制目的的特性明确的物质，其含量已知并处于与实际标本相同的基质中，故质控物必须按患者标本一样对待进行检测。定性测定判断阴、阳性时有一个“判断值”（cutoff值），其质控的目的是考察检测结果是否准确和稳定。在保存过程中发生聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。又称真阴性，是指一项试验能将实际上未患某病的人正确地判定为未患某病的能力。二、质量保证的有关概念质量保证（qualityassurance，QA）致力于为某一产品或服务满足特定的质量要求，提供充分信任性所要求的而采取一系列有效的措施。第12页，共47页。室内质量控制（internalqualitycontrol，IQC）由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室从收取样本至获得测定结果，并对结果进行分析的整个测定过程可靠性程度的措施。旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。第13页，共47页。室间质量评价（externalqualityassessment，EQA）

为客观地比较某一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的方法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。又称为实验室能力验证（proficiencytesting，PT）。第14页，共47页。质控品（物）（qualitytestingmaterisls）

是专门用于质量控制目的的特性明确的物质，其含量已知并处于与实际标本相同的基质中，故质控物必须按患者标本一样对待进行检测。一般包括室内质控物和室间质评物两类。第15页，共47页。第二节免疫检验质量控制的特殊性免疫学检验方法的种类较多，其测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此进行质量控制的手段不能照搬生化模式。免疫检验质量控制包括定量实验、半定量实验和定性实验三个方面。第16页，共47页。标准品（standard）

指性质纯的处于一定基质中已知含量或成分，且特性明确的物质，通常用于比较检测未知的物质或成分。标准品质量的优劣直接影响样品的测定结果。一、标准品（一）标准品的分类第17页，共47页。根据标准品性质的差异，可分为三级：一级标准品二级标准品

三级标准品

为冻干品，内含载体蛋白，数量有限，可使用10~20年。通常为国际标准品，由WHO指定的实验室制备

即国家标准品，是由国家的有关权威机构制备，供国家内部使用，其效价单位与国际标准品一致由二级标准品的比对而来的，通常由实验室自己或试剂生产厂家制备。

第18页，共47页。标准品IU/支建立的年份Mg/IU类风湿关节炎血清10019650.1710抗核抗体血清(均质型)10019700.1860人血清IgG、IgA、IgM10019700.1847人血清IgD10019710.8100人血清IgE1150019730.06562人AFP10000019750.001399人CEA10019750.0236FITC—绵羊抗人Ig10019760.0594FITC—绵羊抗人IgMμ链10019780.0447血清蛋白(白蛋白、α1-抗胰蛋白酶、C3铜蓝蛋白、转铁蛋白)10019781.1140人补体成分(C4、C5、Clq、B因子)10019801.1070FITC—绵羊抗人IgGγ链10019810.0923过氧化物酶标记绵羊抗人Ig10019820.0316抗RNP抗体-1983-平滑肌抗体-1983-线粒体抗体-1983-免疫学检验质控常用国际标准品第19页，共47页。（二）标准品的特性与被测物具有相同的特性，活性稳定

所用基质对测定结果无明显影响，通常为含蛋白质的缓冲液。

无已知传染危险性，物理性能均一，能准确重溶为澄清液体。对标准品的要求第20页，共47页。基质中的酶、细菌污染、pH变化、氧化、等因素都可导致标准品变性，高温和光照可加速这些变化。容器内壁的吸附作用和溶剂的蒸发可造成标准品浓度的改变。在保存过程中发生聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。保存条件不适当也可以影响标准品的稳定性，如反复的冻融可降低标准品的免疫活性等。标准品稳定性的影响因素第21页，共47页。定量免疫实验通常需要使用全自动免疫分析仪，在测定时须用校准品对仪器进行校准。室内质控则应选择特定试剂盒或方法的测定范围内的高、中和低三种浓度的质控品，以监测不同浓度标本测定结果的变化。二、定量、半定量和定性实验（一）定量实验

第22页，共47页。定量实验的质量控制比较复杂，通常是根据室内质控物的测定结果，采用统计学的原理方法判断所进行的临床常规标本测定是否在控。目前多采用的质控方法主要包括：Levey-Jennings（L-J）质控图方法、基线测定、Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法、“即刻法”质控方法以及累积和质控方法等。第23页，共47页。Levey-Jennings质控图第24页，共47页。符号意义判定标准12S一个质控测定值超出±2s质控限。发出警告，在控13S一个质控测定值超出±3s质控限。随机误差，失控22S两个连续质控测定值同时超出它们各自的+2s或－2s质控限。系统误差，失控R4S同一批内，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s质控限。随机误差，失控41S四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s质控限。系统误差，失控10十个连续的质控测定值同时处于均值（）的同一侧。系统误差，失控Westgard多规则常用质控标准第25页，共47页。半定量实验在免疫检验中比较少用，此类实验主要有酶免疫试验、荧光免疫试验等，测定结果通常以抗体的滴度、效价等表示。半定量免疫检验质控要点在于采用多个相应滴度或效价的抗体作为室内质控品，与临床标本同时测定，当然还需要有阴性质控。（二）半定量实验

第26页，共47页。定性实验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多，常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果。定性测定的室内质控以低值的质控品最为重要，设置临界于cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的关键。（三）定性实验

第27页，共47页。定性测定判断阴、阳性时有一个“判断值”（cutoff值），其质控的目的是考察检测结果是否准确和稳定。定性测定不仅检测项目多，而且方法类型也多，因此决定采取何种质控方法必须要考虑检测方法的特点，1定性测定质控的特点第28页，共47页。

三、检测试剂的批间差异

不同厂家

不同批号

产品的质量、技术含量的区别

原料来源、纯度不同以及生产条件变动对购入的试剂盒应进行性能检测，利用可靠的定值血清检测试剂盒批间差异的大小，只有质量符合实验要求方可用于实际工作。第29页，共47页。引起试剂盒批间变异原因是多方面的。试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的，生产技术要求难度大，工艺提纯方法不好掌握，质量控制要求较高，产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所差别。用不同的提纯方法及不同批号的抗原或抗体所制备的试剂质量不一样；同一批号的的原料，不同组装工艺，其结果也不尽一样，组装工艺相同，质量标准控制稍有欠缺，其结果也会有所差异。第30页，共47页。生产技术难度大

提纯方法不好掌握

质量控制要求较高产品质量不易稳定

每批原材料的纯度和活性都有所差别

引起试剂盒批间变异原因是多方面的

第31页，共47页。由于批间差异的影响，室内质控只能是一个批号的试剂盒使用一个质控框架图。根据中、小型检验科的工作特点，不利于室内质控的开展和稳定。免疫检验室在进购试剂时，要选择质量有保障的正规试剂产商，建立完善的实验室内质量控制体系，尽量减少批间差异使其在规定的范围内（一般CV<15%），这对长期控制免疫检测结果的可靠性大有裨益。第32页，共47页。

四、检测试剂的稳定性

由于所用的仪器种类繁多，试剂盒品牌不一，实验室工作人员业务能力的差异等，造成不同实验室间的测定结果差异较大。目前临床免疫检验用的试剂盒保质期一般为6个月以上，有些检验机构为了节约成本，分数次使用试剂盒，势必会使酶标抗原处于溶解状态保存一定的时间，最后影响试验结果。第33页，共47页。试剂盒抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易保存；浓度低时，应加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白作保护剂。酶标记抗体在应用防腐剂时要注意不能用NaN3。抗体浓缩液应在-20℃保存，避免反复冻融。第34页，共47页。35第三节免疫学实验常用评价指标临床上实验室免疫学检验的方法越来越多，如何对各种免疫学实验的方法进行对比，以评价各种检测方法的优劣，这需要通过一些有效的评价指标来鉴定。第35页，共47页。诊断灵敏度（sensitivityofdiagnosis）

反映一项试验能将实际有病的人判定为患病的百分率，其值越大，则漏诊的可能性愈小。一、诊断灵敏度、特异度和正确诊断指数

本指标可用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断敏感度应为100%。第36页，共47页。诊断特异度（specificityofdiagnosis）

又称真阴性，是指一项试验能将实际上未患某病的人正确地判定为未患某病的能力。其值越大，则误诊的可能性愈小。本指标是用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断特异度应为100%。第37页，共47页。正确诊断指数（Youden’sindex）

又称约登指数，指将灵敏度和特异度结合的评价某种免疫学实验的综合指标。其值是灵敏度与特异度之和减去1，大小范围从0到1

正确诊断指数愈大，实验的真实性亦愈好。理想实验方法的正确诊断指数为1。第38页，共47页。Cutoff值是被检分析物的量值，用于确定结果高于还是低于临床或分析决断点。在选择Cutoff值和报告检测结果时应该考虑敏感性和特异性哪个更重要。理想的Cutoff值是实验室自己在的人群中确定。二、Cutoff值第39页，共47页。大多数免疫分析，来自感染和非感染人群的标本之间有一个检测结果的重叠区，即“灰区”第40页，共47页。使用阴性血清测定结果均值的2或3倍作为阳性判断值。测定大量（数千）正常人血清样本，然后将所得到的吸光度均值增加2或3个SD作为阳性判断值。在测定大量正常人血清样本的同时，测定大量阳性血清样本，根据