FACSCanto流式细胞仪原理课件

BD公司介绍BD公司是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在纽约创立的,总部位于美国新泽西州BD公司介绍BD公司是由MaxwellW.Becton和1BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司产品涵盖诸多医疗领域生物科学部:流式细胞仪及应用于生物科学的试剂、耗材BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司2BD公司流式细胞仪产品FACSVantageSE-大型分选机FACSAria-高速分选的台式机FACSDiva-高速分选的数字化大型机BD公司流式细胞仪产品FACSVantageSE-大型分3BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSCalibur流式细胞仪FACSCantoII流式细胞仪BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSC4BD公司流式细胞仪产品BDFACSCantoII流式细胞仪BD公司流式细胞仪产品BDFACSCantoII流式细5FACSCantoII流式细胞仪原理FACSCantoII流式细胞仪原理6流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向角散射光信号，FSC）细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性（侧向散射光信号，SSC）相关的荧光强度流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向7散射光信号的特征FSC和SSC当颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为侧向角散色光信号（SSC）。488nm激光激发产生散射光散射光信号的特征FSC和SSC8前向角散射光信号FSC前向角散射光信号FSC9侧向角散射光信号SSC侧向角散射光信号SSC10散射光信号的特征红细胞裂解的全血散射光信号的特征红细胞裂解的全血11荧光信号的特征什么是荧光信号当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光束时，染料吸收光子跃迁到高能级，返回基态时，染料释放出能量，大部分以光的形式释放。这种发射出的光称为荧光。荧光信号的特征什么是荧光信号12荧光信号的特征发射光的荧光强度与结合的位点成正比荧光信号的特征发射光的荧光强度与结合的位点成正比13信号产生荧光信号信号产生荧光信号14荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长15直方图显示荧光信号直方图显示荧光信号16点图显示荧光信号点图显示荧光信号17什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的18流式细胞仪特点及检测标本特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析；可检测的样本种类多样(1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细胞(2)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液流式细胞仪特点及检测标本19FACSCantoII流式细胞仪系统组成流式细胞仪液流车工作站FACSCantoII流式细胞仪系统组成流式细胞仪20FACSCanto简介配置空冷激光两根激光:488nm、633nm、光路固定，无需调校液流系统信号检测系统八角形和三角形光学收集系统，将光信号转换成电信号电子系统将电信号转换成数字化信号FACSCanto简介配置空冷激光21液流系统流动室鞘液工作液，可选PBS、血球稀释液或蒸馏水。样本流单细胞悬液，浓度51051106/mL液流系统流动室22液流系统鞘液是压力驱动的。在压力作用下，鞘液经过滤器进入流动室下部的小室中。检测的样本在压力的作用下，也进入流动室下部的小室中，样本压力略大于鞘液的压力。在鞘液的包裹下，样本由下向上通过流动室，经激光激发后，样本中的颗粒被检测。液流系统鞘液是压力驱动的。在压力作用下，鞘液经过滤器进入流动23液流系统

-FLOWCELL(流动室)InjectorTip荧光信号聚焦的激光光束鞘液液流系统

-FLOWCELL(流动室)Injec24液流系统液流系统25液流系统-样本流速液流系统-样本流速26样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度快,但分辨率低.低流速：一般用于对分辨率要求较高的分析，如DNA分析。样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度27光学系统光学系统28光学系统染色的细胞或其他颗粒通过聚焦的激光束时，会散射激光或荧光。因为激光束是一个小斑点，颗粒快速通过流动室，散射光或荧光持续的时间非常短-只有几微秒。这些短暂的光信号被收集、过滤然后被检测器转换成电信号。光学系统染色的细胞或其他颗粒通过聚焦的激光束时，会散射激光或29信号采集系统激光488nm，633nm，激发样本中的颗粒或细胞产生散射光信号和荧光信号信号检测组件-八角形和三角形光学滤片将激光激发后产生的散射光信号和荧光信号引导至相应的PMTPMT-将光信号转换成电信号信号采集系统激光30常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色PerCP 488 670免疫荧光深红APC633 670免疫荧光红色PI488620DNA染色

橙红ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发31

常用荧光染料(488nm,633nm激发)FluoresceinIsothiocyanate(FITC)异硫氰酸荧光素Phycoerythrin(PE)藻红素Allophycocyanin(APC)异藻蓝蛋白Peridinin-ChlorophyllProtein(PerCP)多甲藻黄素-叶绿素蛋白TandemDyesPE-TexasRed(ECD)PE-Cy5(PC5)PE-Cy5.5(PC5.5)(futures)PE-Cy7(PC7)(futures)常用荧光染料(488nm,633nm激发)Fluoresc32FACSCantoⅡ信号检测组件种类八角形三角形构成检测器滤片FACSCantoⅡ信号检测组件种类33FACSCantoⅡ信号检测组件八角形检测组件FACSCantoⅡ信号检测组件八角形检测组件34FACSCantoⅡ信号检测组件三角形检测组件FACSCantoⅡ信号检测组件三角形检测组件35FACSCantoⅡ信号检测组件检测器鞘液流中的颗粒通过激光束时会产生光信号，光信号到达检测器生成电脉冲信号，电子系统对电脉冲信号进一步处理。FACSCanto两类检测器光电二极管：FSC光电倍增管PMT：SSC和荧光信号FACSCantoⅡ信号检测组件检测器36FACSCantoⅡ信号检测组件光学滤片用于调整光谱的分布。当光子遇到滤片时，光子或通过滤片，或被滤片吸收，或被滤片反射。FACSCantoⅡ信号检测组件光学滤片用于调整光谱的分布。37FACSCantoⅡ的滤片长通滤片（LP）：长于设定波长的光通过，并反射短于设定波长的光FACSCantoⅡ的滤片长通滤片（LP）：长于设定波长的光38FACSCantoⅡ的滤片带通滤片：允许一定带宽波长的光通过。FACSCantoⅡ的滤片带通滤片：允许一定带宽波长的光通过39FACSCantoⅡ的滤片FACSCantoⅡ的滤片40FACSCantoⅡ的滤片FACSCantoⅡ的滤片41FACSCantoⅡ电子系统将与电脉冲信号强弱相关的电压数字化有三类电脉冲信号高度信号H面积信号A宽度信号WFACSCantoⅡ电子系统将与电脉冲信号42几个概念信号放大PMT将光信号转换成电信号，调整PMT的电压，信号强度将随之改变。阈值信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片。通过设定某一信号的最低强度值，可将不需要的脉冲信号去除，这一设定值称为阈值。几个概念信号放大43几个概念颜色补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差。在完成双色以上荧光标记的样本时，都需要作颜色补偿。几个概念颜色补偿44颜色补偿FITC主要由FITC的检测器检测，但部分光也会进入PE检测器颜色补偿FITC主要由FITC的检测器检测，但部分光也会进入45几个概念颜色补偿带通滤片接受的是一定带宽波长的荧光，故会有干扰光同时被接收，然后一同进入PMT进行光电转换并放大。几个概念颜色补偿46几个概念颜色补偿通常干扰光占该染料所发出荧光总量的X%几个概念颜色补偿47

补偿模型图

补偿模型图

48颜色补偿判断标准

未作颜色补偿颜色补偿判断标准未作颜色补偿49颜色补偿判断标准

补偿后颜色补偿判断标准补偿后50怎样进行颜色补偿CompBeads用于流式细胞仪多色分析时调整荧光补偿。含两种微球，抗小鼠/大鼠免疫球蛋白链的微球，可与小鼠/大鼠免疫球蛋白的链结合；及阴性对照微球，不与免疫球蛋白结合。这两种微球与鼠源性的荧光抗体混合时，显示为清晰的阳性群与阴性群（背景荧光），可据此手动调整颜色补偿。Anti-MouseIg补偿微球组合，产品号：552843Anti-RatIg补偿微球组合，产品号：552844Anti-Rat/hamsterIg补偿微球组合，产品号：552845怎样进行颜色补偿CompBeads51仪器运作需要的质控品仪器校准需要微球BDFACS7-ColorSetupBeads（CatNo.335775）补偿调整需要微球BDCompBeadsAnti-MouseIg,(CatNo.552843)BDCompBeadsAnti-RatIg,(CatNo.552844)仪器清洁BDFACSRinse漂白水仪器运作需要的质控品仪器校准需要微球52流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用53流式细胞仪可以告诉我们什么？流式细胞仪可以告诉我们什么？54细胞内和细胞外发生了什么事件？细胞内和细胞外发生了什么事件？55流式细胞术的应用细胞生理学研究细胞膜表面标记胞内标记细胞周期分析凋亡分析分选CBA流式细胞术的应用细胞生理学研究56细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性胞内pH值检测Ca++流动性检测膜电势检测细胞活性检测细胞活力(增殖能力)的检测细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性57细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性分析细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性分析58细胞生理学研究胞内pH值的检测细胞生理学研究胞内pH值的检测59细胞生理学研究Ca2+流动性检测Ca2+是非常重要的细胞内离子，在胞膜到胞浆的信号转导中起重要的作用。细胞受到刺激后，胞内Ca2+浓度会发生改变。最常用的染料Indo-1excitedatUVFluo-3excitedat488nmFuraredexcitedat488nm细胞生理学研究Ca2+流动性检测60细胞生理学研究Ca2+流动性检测细胞生理学研究Ca2+流动性检测61细胞生理学研究细胞膜电位的改变超极化的细胞摄取更多的染料，细胞总的荧光强度增大；细胞去极化时，染料释放到细胞外，总的荧光强度减少。染料和试剂DiOC6(3)DiOC5(3)DiOC1(3)DiOC1(5)ValinomycinGramicidinDCCCP细胞生理学研究细胞膜电位的改变62细胞生理学研究细胞膜电位的改变细胞生理学研究细胞膜电位的改变63细胞生理学研究细胞活性分析

FluoresceinDiacetate进入活细胞后,被胞内酯酶降解,生成荧光底物.活细胞会发绿色荧光细胞生理学研究细胞活性分析64细胞生理学研究细胞活力分析CFSE(CarboxyfluoresceinSuccinimidylester)是一种亲脂性染料，可被细胞膜吸收。细胞标记CFSE后再诱导增殖，分裂后的细胞将含半量的CFSE，如此可监控细胞分裂的数目。细胞生理学研究细胞活力分析65细胞生理学研究细胞活力分析上图中人T细胞被标记并刺激后，可跟踪六代的分裂。如果配合使用Modfit软件分析，可确定每代的细胞数。细胞生理学研究细胞活力分析66细胞膜表面标记CD2CD4CD#=clusterdesignationnumber细胞膜表面标记CD2CD4CD#=clusterd67细胞内标记胞内多种肽类已被成功标记，包括病毒颗粒、免疫球蛋白、雌激素受体、细胞因子、特殊蛋白如Bcl-2和cyclooxygenase.胞内细胞因子磷酸化蛋白

细胞内标记胞内多种肽类已被成功标记，包括病毒颗粒、免疫球68细胞内标记胞内细胞因子细胞内标记胞内细胞因子69细胞内标记磷酸化蛋白接受刺激后细胞的动态反应刺激因子对特异位点的作用检测转录后调控特殊蛋白在正常及异常细胞的表达细胞内标记磷酸化蛋白70细胞内标记磷酸化蛋白RelativeCellNumberAlexaFluor®488ControlIFN-gstimulated(1000

u/ml)细胞内标记磷酸化蛋白RelativeCellNumber71细胞周期分析DNA含量分析-PI染色细胞周期分析DNA含量分析-PI染色72细胞周期分析DNA含量分析细胞周期分析DNA含量分析73细胞凋亡细胞膜分析-PS外翻PS（磷脂酰丝氨酸）正常暴露在胞膜的内表面，凋亡时，PS外翻向细胞外表面。重组蛋白Annexin-V可与PS结合细胞凋亡细胞膜分析-PS外翻74CBA（CytometricBeadArray）++AnalyteofInterestFluorescentDetectorAbCaptureBeadCaptureAbCBA（CytometricBeadArray）++An75CBACBA76BD网站更多的产品信息请登陆bdbiosciencesBD网站更多的产品信息请登陆77谢谢大家谢谢大家78谢谢！79谢谢！798080BD公司介绍BD公司是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在纽约创立的,总部位于美国新泽西州BD公司介绍BD公司是由MaxwellW.Becton和81BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司产品涵盖诸多医疗领域生物科学部:流式细胞仪及应用于生物科学的试剂、耗材BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司82BD公司流式细胞仪产品FACSVantageSE-大型分选机FACSAria-高速分选的台式机FACSDiva-高速分选的数字化大型机BD公司流式细胞仪产品FACSVantageSE-大型分83BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSCalibur流式细胞仪FACSCantoII流式细胞仪BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSC84BD公司流式细胞仪产品BDFACSCantoII流式细胞仪BD公司流式细胞仪产品BDFACSCantoII流式细85FACSCantoII流式细胞仪原理FACSCantoII流式细胞仪原理86流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向角散射光信号，FSC）细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性（侧向散射光信号，SSC）相关的荧光强度流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向87散射光信号的特征FSC和SSC当颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为侧向角散色光信号（SSC）。488nm激光激发产生散射光散射光信号的特征FSC和SSC88前向角散射光信号FSC前向角散射光信号FSC89侧向角散射光信号SSC侧向角散射光信号SSC90散射光信号的特征红细胞裂解的全血散射光信号的特征红细胞裂解的全血91荧光信号的特征什么是荧光信号当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光束时，染料吸收光子跃迁到高能级，返回基态时，染料释放出能量，大部分以光的形式释放。这种发射出的光称为荧光。荧光信号的特征什么是荧光信号92荧光信号的特征发射光的荧光强度与结合的位点成正比荧光信号的特征发射光的荧光强度与结合的位点成正比93信号产生荧光信号信号产生荧光信号94荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长95直方图显示荧光信号直方图显示荧光信号96点图显示荧光信号点图显示荧光信号97什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的98流式细胞仪特点及检测标本特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析；可检测的样本种类多样(1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细胞(2)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液流式细胞仪特点及检测标本99FACSCantoII流式细胞仪系统组成流式细胞仪液流车工作站FACSCantoII流式细胞仪系统组成流式细胞仪100FACSCanto简介配置空冷激光两根激光:488nm、633nm、光路固定，无需调校液流系统信号检测系统八角形和三角形光学收集系统，将光信号转换成电信号电子系统将电信号转换成数字化信号FACSCanto简介配置空冷激光101液流系统流动室鞘液工作液，可选PBS、血球稀释液或蒸馏水。样本流单细胞悬液，浓度51051106/mL液流系统流动室102液流系统鞘液是压力驱动的。在压力作用下，鞘液经过滤器进入流动室下部的小室中。检测的样本在压力的作用下，也进入流动室下部的小室中，样本压力略大于鞘液的压力。在鞘液的包裹下，样本由下向上通过流动室，经激光激发后，样本中的颗粒被检测。液流系统鞘液是压力驱动的。在压力作用下，鞘液经过滤器进入流动103液流系统

-FLOWCELL(流动室)InjectorTip荧光信号聚焦的激光光束鞘液液流系统

-FLOWCELL(流动室)Injec104液流系统液流系统105液流系统-样本流速液流系统-样本流速106样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度快,但分辨率低.低流速：一般用于对分辨率要求较高的分析，如DNA分析。样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度107光学系统光学系统108光学系统染色的细胞或其他颗粒通过聚焦的激光束时，会散射激光或荧光。因为激光束是一个小斑点，颗粒快速通过流动室，散射光或荧光持续的时间非常短-只有几微秒。这些短暂的光信号被收集、过滤然后被检测器转换成电信号。光学系统染色的细胞或其他颗粒通过聚焦的激光束时，会散射激光或109信号采集系统激光488nm，633nm，激发样本中的颗粒或细胞产生散射光信号和荧光信号信号检测组件-八角形和三角形光学滤片将激光激发后产生的散射光信号和荧光信号引导至相应的PMTPMT-将光信号转换成电信号信号采集系统激光110常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色PerCP 488 670免疫荧光深红APC633 670免疫荧光红色PI488620DNA染色

橙红ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发111

常用荧光染料(488nm,633nm激发)FluoresceinIsothiocyanate(FITC)异硫氰酸荧光素Phycoerythrin(PE)藻红素Allophycocyanin(APC)异藻蓝蛋白Peridinin-ChlorophyllProtein(PerCP)多甲藻黄素-叶绿素蛋白TandemDyesPE-TexasRed(ECD)PE-Cy5(PC5)PE-Cy5.5(PC5.5)(futures)PE-Cy7(PC7)(futures)常用荧光染料(488nm,633nm激发)Fluoresc112FACSCantoⅡ信号检测组件种类八角形三角形构成检测器滤片FACSCantoⅡ信号检测组件种类113FACSCantoⅡ信号检测组件八角形检测组件FACSCantoⅡ信号检测组件八角形检测组件114FACSCantoⅡ信号检测组件三角形检测组件FACSCantoⅡ信号检测组件三角形检测组件115FACSCantoⅡ信号检测组件检测器鞘液流中的颗粒通过激光束时会产生光信号，光信号到达检测器生成电脉冲信号，电子系统对电脉冲信号进一步处理。FACSCanto两类检测器光电二极管：FSC光电倍增管PMT：SSC和荧光信号FACSCantoⅡ信号检测组件检测器116FACSCantoⅡ信号检测组件光学滤片用于调整光谱的分布。当光子遇到滤片时，光子或通过滤片，或被滤片吸收，或被滤片反射。FACSCantoⅡ信号检测组件光学滤片用于调整光谱的分布。117FACSCantoⅡ的滤片长通滤片（LP）：长于设定波长的光通过，并反射短于设定波长的光FACSCantoⅡ的滤片长通滤片（LP）：长于设定波长的光118FACSCantoⅡ的滤片带通滤片：允许一定带宽波长的光通过。FACSCantoⅡ的滤片带通滤片：允许一定带宽波长的光通过119FACSCantoⅡ的滤片FACSCantoⅡ的滤片120FACSCantoⅡ的滤片FACSCantoⅡ的滤片121FACSCantoⅡ电子系统将与电脉冲信号强弱相关的电压数字化有三类电脉冲信号高度信号H面积信号A宽度信号WFACSCantoⅡ电子系统将与电脉冲信号122几个概念信号放大PMT将光信号转换成电信号，调整PMT的电压，信号强度将随之改变。阈值信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片。通过设定某一信号的最低强度值，可将不需要的脉冲信号去除，这一设定值称为阈值。几个概念信号放大123几个概念颜色补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差。在完成双色以上荧光标记的样本时，都需要作颜色补偿。几个概念颜色补偿124颜色补偿FITC主要由FITC的检测器检测，但部分光也会进入PE检测器颜色补偿FITC主要由FITC的检测器检测，但部分光也会进入125几个概念颜色补偿带通滤片接受的是一定带宽波长的荧光，故会有干扰光同时被接收，然后一同进入PMT进行光电转换并放大。几个概念颜色补偿126几个概念颜色补偿通常干扰光占该染料所发出荧光总量的X%几个概念颜色补偿127

补偿模型图

补偿模型图

128颜色补偿判断标准

未作颜色补偿颜色补偿判断标准未作颜色补偿129颜色补偿判断标准

补偿后颜色补偿判断标准补偿后130怎样进行颜色补偿CompBeads用于流式细胞仪多色分析时调整荧光补偿。含两种微球，抗小鼠/大鼠免疫球蛋白链的微球，可与小鼠/大鼠免疫球蛋白的链结合；及阴性对照微球，不与免疫球蛋白结合。这两种微球与鼠源性的荧光抗体混合时，显示为清晰的阳性群与阴性群（背景荧光），可据此手动调整颜色补偿。Anti-MouseIg补偿微球组合，产品号：552843Anti-RatIg补偿微球组合，产品号：552844Anti-Rat/hamsterIg补偿微球组合，产品号：552845怎样进行颜色补偿CompBeads131仪器运作需要的质控品仪器校准需要微球BDFACS7-ColorSetupBeads（CatNo.335775）补偿调整需要微球BDCompBeadsAnti-MouseIg,(CatNo.552843)BDCompBeadsAnti-RatIg,(CatNo.552844)仪器清洁BDFACSRinse漂白水仪器运作需要的质控品仪器校准需要微球132流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用133流式细胞仪可以告诉我们什么？流式细胞仪可以告诉我们什么？134细胞内和细胞外发生了什么事件？细胞内和细胞外发生了什么事件？135流式细胞术的应用细胞生理学研究细胞膜表面标记胞内标记细胞周期分析凋亡分析分选CBA流式细胞术的应用细胞生理学研究136细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性胞内pH值检测Ca++流动性检测膜电势检测细胞活性检测细胞活力(增殖能力)的检测细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性137细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性分析细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性分析138细胞生理学研究胞内pH值的检测细胞生理学研究胞内pH值的检测139细胞生理学研究Ca2+流动性检测Ca2+是非常重要的细胞内离子，在胞膜到胞浆的信号转导中起重要的作用。细胞受到刺激后，胞内Ca2+浓度会发生改变。最常用的染料Indo-1excitedatUVFluo-3excitedat488nmFuraredexcitedat488nm细胞生理学研究Ca2+流动性检测140细胞生理学研究Ca2+流动性检测细胞生理学研究Ca2+流动性检测141细胞生理学研究细胞膜电位的改变超极化的细胞摄取更多的染料，