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文档简介

第三章

细胞生物学的研究方法

ResearchMethodsforCellBiology第一节细胞的分离与培养（细胞分离）第二节细胞组分的分离与纯化（细胞组分分离）第三节显微镜技术（细胞结构）第四节细胞化学与分子示踪（细胞分子）第五节细胞功能基因组学研究技术（分子功能）第一节细胞的分离与培养一、细胞分离（离心、流式、免疫磁珠、激光切割）二、细胞培养（原代、传代、细胞系、细胞株）差速离心或密度梯度离心流式细胞技术（FACS）免疫磁珠法激光俘获显微切割技术细胞培养技术细胞培养技术细胞培养技术第二节细胞组分的分离与纯化一、分级离心（差速离心、速度沉降、平衡沉降）二、层析法分离蛋白质（柱层析、高效液相层析）三、蛋白质电泳（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳）分级离心技术分级离心技术（成分的大小和形状）（成分的浮力密度）层析分离技术层析分离技术层析分离技术蛋白质电泳技术蛋白质电泳技术—WesternBlot蛋白质电泳技术蛋白质电泳技术第三节显微镜技术一、光学显微镜（普通、荧光、激光共聚焦）二、电子显微镜（透射、扫描、技术投影法）三、纳米显微镜（扫描隧道、原子力）普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜共聚焦激光扫描显微镜三共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜电子显微镜透射电子显微镜（TEM）与扫描电子显微镜（SEM）第四节细胞化学与分子示踪一、酶细胞化学技术二、免疫细胞化学技术三、放射自显影技术四、活细胞分子示踪技术酶细胞化学技术酶细胞化学技术抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)标记破骨细胞免疫细胞化学技术免疫细胞化学技术放射自显影技术放射自显影技术胰岛B细胞3H-亮氨酸标记完成之后，A10分钟后；B.完成45分钟后。细胞内分子示踪技术细胞内分子示踪技术细胞内分子示踪技术第五节细胞功能基因组学研究技术基因的基本研究技术限制性核酸内切酶

核酸凝胶电泳

聚合酶链式反应DNA文库和基因克隆DNA测序

核酸分子杂交限制性核酸内切酶技术核酸凝胶电泳技术聚合酶链式反应技术（PCR）DNA文库和基因克隆技术DNA测序技术核酸分子杂交技术原位杂交技术Southern、Northern

Blot技术一、细胞及其组分的分离和纯化技术：多种方法可从组织中分离和纯化特定类型的细胞或分离和纯化细胞组分和活性分子。细胞培养需要无菌条件和营养供应。二、显微成像技术：光镜技术是研究细胞结构最早和最基本的工具；电镜技术用于研究细胞的亚显微结构。三、细胞化学和细胞内分子示踪技术：细胞化学技术可以显示细胞和组织中的酶类；免疫细胞化学技术是生物大分子定性和定位研究的有效工具；原位杂交技术用以检测组织和细胞中的特异性核酸分子；放射自显影术可以追踪并分析体内大分子代谢的动态过程；绿色荧光蛋白用于示踪细胞内的特定蛋白质。四、细胞功能基因组学技术：PCR技术可以在体外快速扩增特异性DNA

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