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文档简介
Illumina测序的原理和应用
2021/5/91Illumina测序流程DataAnalysis
数据分析Sequencing
测序ClusterGeneration
簇生成LibraryPreparation
文库制备测序流程2021/5/92AdapterandLibrary接头和文库接头：与flowcell结合区Read1和Read2测序引物结合区Index
用来区分不同样本2021/5/93Illumina测序流程DataAnalysis
数据分析Sequencing
测序ClusterGeneration
簇生成LibraryPreparation
文库制备测序流程2021/5/94什么是flowcell？Flowcell即流动槽，如载玻片大小，有8个通道即8条lane。2021/5/951.SingleDNAlibrariesarehybridizedtoprimerlawnandextendedbypolymerase2021/5/962.Double-strandedmoleculeisdenaturedandoriginaltemplateiswashedaway2021/5/973.Newsynthesizedstrandiscovalentlyattachedtoflowcellsurfacetoformabridgeandextendedbypolymerase4.Double-strandbridgeisformed2021/5/985.Double-strandbridgeisdenaturedandformtwocopiesofcovalentlyboundsingle-strandedtemplates6.Bridgeamplificationcyclerepeat2021/5/99MultiplebridgesareformeddsDNAbridgesaredenaturedandreversestrandsarecleaved2021/5/9109.Cleaved
reversestrandsarewashedawayandleavingaclusterwithforwardstrandsonly在Illumina的测序过程中，无论是单端测序还是双端测序，都会用到特异选择性链切断的过程。其中单端测序的要切断1次，双端测序中的两条链要先后各切断1次（共2次）。单端测序：高碘酸希夫反应。双端测序：Illumina巧妙地利用了“甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）”对“8-氧鸟嘌吟糖苷（8-oxo-G）”的选择性切断作用。2021/5/911Illumina测序流程DataAnalysis
数据分析Sequencing
测序ClusterGeneration
簇生成LibraryPreparation
文库制备测序流程2021/5/912Hiseq2500Twoflowcell2021/5/91310.
Sequencingprimerishybridizedtoadaptersequence测序引物3‘端5‘端2021/5/91411.Onlyonenucleotideisaddedeverycycleasthe3’endisblocked2021/5/91512.Cleavethefluorandfreethe3’endthenrepeatabovestepsfornextcycle2021/5/91613.Sequencedstrandisstrippedoffandtheindexprimerisaddedfortoseqindex3‘端5‘端Indexprimer2021/5/91714.Repeatbridgeamplificationtoformreversestrandafterindexsequencing15.Sequencingthereversestrands
2021/5/918高通量测序的应用DNA水平RNA水平基因组denovo、重测序外显子捕获测序DNA甲基化测序Chip-Seq16s、宏基因组转录组测序数字表达谱DGESmallRNAlncRNA2021/5/919高通量测序的应用RNADNA
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