版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
《生物产品的分析与检验技术》酶制剂的分析与检验——次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力酶:生物催化剂酶制剂:酶的工业化制剂酶活力的测定是酶产品检测的主要项目之一,也是衡量一个酶产品品质的主要指标。常见的酶活力测定法有滴定法、分光光度法和紫外分光光度法等。本节课以饲料用原料糖化酶中酶活力的测定为例介绍滴定法测定糖化酶活力的方法。次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力
(一)原理
糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解α-1,4葡萄糖苷键,生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基,能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液滴定,计算出酶活力。次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(二)试剂与仪器
1.试剂碘、碘化钾、冰醋酸、醋酸钠、蒸馏水、NaOH、商品葡萄糖淀粉酶、可溶性淀粉、浓硫酸、硫代硫酸钠、Na2C03
2.仪器恒温水浴锅、秒表、比色大试管、滴定管、碘量瓶、容量瓶、锥形瓶、移液管等次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程可溶性淀粉制备待测酶液的制备加试液反应滴定酶活力的计算
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程1.可溶性淀粉溶液制备:称取绝干淀粉2g,用少量蒸馏水调匀,徐徐倾入已沸的蒸馏水中,加热煮沸至透明,冷却后定容至100ml,此溶液需当天配制。次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程可溶性淀粉制备待测酶液的制备加试液反应滴定酶活力的计算
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程
2.待测酶液的制备:称取定量酶粉精确至0.0001g,先用少量的缓冲液溶解,用玻璃棒捣研,将上清液小心倾入容量瓶中,沉渣部分再加少量缓冲液,如此捣研3~4次,最后全部移入容量瓶中,用缓冲液定容至刻度,摇匀,通过4层纱布过滤,滤液供测定用。
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程可溶性淀粉制备待测酶液的制备加试液反应滴定酶活力的计算
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程3.加试液反应:于甲乙两支比色管(50ml)中,分别加2%可溶性淀粉溶液25ml,0.1mol/LpH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液5ml,摇匀。将试管置于40℃的恒温水浴中预热5~10min。在甲管中加酶制备液2ml(酶活总量110~170U),立即计时,摇匀,在此温度下准确反应1h,1h后立即各加20%NaOH溶液0.2ml,摇匀,将二管取出迅速用水冷却,并于乙管中补加酶液2ml(作为对照)。次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程可溶性淀粉制备待测酶液的制备加试液反应滴定酶活力的计算
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程4.滴定:分别取上述反应液5ml放入碘量瓶中,准确加入0.1mol/L碘液10ml,再加0.1mol/LNaOH溶液15ml(边摇晃),暗处放置15min,加入2mol/L硫酸2ml.用0.05mol/L硫代硫酸钠滴定至无色为终点。次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程可溶性淀粉制备待测酶液的制备加试液反应滴定酶活力的计算
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程5.结果记录与酶活力的计算:结果记录将所测数据填入下表
消耗标准硫代硫酸钠溶液的体积(ml)V样品消耗V0空白消耗
次亚碘酸滴定法检测糖化酶的活力(三)操作流程
5.结果记录与酶活力的计算:酶活力的计算X=(V0-V)c×90.05×32.2/5×1/2×n×2=579.9×(V0-V)c×n式中:X—样品的酶活力[u/g(u/ml)];V0—空白消耗Na2S2O3标准溶液的体积(ml)V—样品消耗Na2S2O3标准溶液的体积(ml);C—Na2S2O3标准溶液的浓度(mol/L)90.05—与1.00mlNa2S2O3标准溶液[c(1/2Na2S2O3)=1.000mol/L]相当的以克表示的葡萄糖的质量32.2—标准溶液的体积(ml);5—吸取反应液的体积(ml);1/2—吸取酶液2.00ml,以1.00ml计;n—样品稀释倍数;2—反应30min,换算成1h的酶活力系数(四)注意事项
1.可溶性淀粉称量前要烘至绝干,淀粉溶液需当天用当天配,配制时要注意不要让淀粉液喷出来,煮沸时要沸腾2min;2.酶液配制时要注意用玻璃棒捣研,使沉淀中的酶充分溶解到溶液中,定容后摇匀时要注意慢摇,防止起泡引起酶液表面张力的变化,致使体积损失;3.量取各溶液体积时要分别润洗移液管3次,管子外壁要擦干净,使定量刻度更准确。4.滴定操作时一定要边滴定变摇晃碘量瓶,滴加速度随着越接近
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 一体化课程(正时皮带)教案
- 酊剂行业相关项目创业计划书
- 2024年证券分析与咨询服务项目经营分析报告
- 2022届广东省数学八年级下册期末经典模拟试题含解析
- 苏山猪生产管理技术规程
- 四川省柔性饰面板块建筑外墙装饰工程技术标准
- 四川省公共建筑机电系统节能运行技术标准
- 四川省合江中学2023-2024学年高一下数学期末调研模拟试题含解析
- 华北油田冀中坳陷勘探情况介绍
- 2024年江西省九江市永修县中考二模数学试题
- 2024全国安全生产月主题征文(32篇)
- 期末试卷(试题)-2023-2024学年三年级数学下册人教版
- MOOC 微观经济学-北京化工大学 中国大学慕课答案
- 考古勘探发掘服务投标方案技术标
- 幼儿游戏测试卷附答案【附答案】
- 完整版)所罗门学习风格量表
- 铝合金阳极氧化缺陷明细表
- 北京版小学英语1至6年级词汇(带音标);
- 南京市建筑设计导则
- 人教版八年级下册数学工作总结
- GB3883.6-1991 手持式电动工具的安全 第二部分 电钻和冲击电钻的专用要求
评论
0/150
提交评论