组培技术研发-数据调查与分析（园艺植物组织培养）

项目二数据调查与分析模块四组培技术研发123CONTENTS组培苗观察编制组培观察表试验问题分析与处理项目二数据调查与分析三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养三、试验问题分析与处理（一）污染的原因及预防（二）褐变的原因及预防（三）玻璃化的原因及预防（四）其它

三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养（一）污染的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养含义：在组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。1.污染原因

细菌、真菌为病源菌。①外植体灭菌不彻底；②培养基及器皿灭菌不彻底；③操作人员未遵守操作规程；④环境不清洁。（一）污染的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养真菌性污染三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养真菌性污染三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养细菌性污染三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养细菌、真菌混合性污染三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养（1）防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体；春秋采集；材料预培养；（2）严格外植体灭菌；

（3）接种用具灭菌彻底；

（4）严守无菌操作规程；

（5）保持培养室清洁；2.预防措施（一）污染的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养（二）褐变的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养1.褐变的原因（1）植物品种（基因型）（2）生理状态

（3）培养基成分

（4）培养条件

（5）材料转移时间（二）褐变的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养

生理状态材料：幼龄期＜成年型组织：细嫩组织＜老熟组织注意：枝条取芽时期和部位！（春、冬季取材）三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养无机盐浓度过高、CTK水平过高；外植体在最适宜的脱分化条件下，细胞大量增殖，抑制褐变。培养基成分三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养培养条件光照过强，温度过高，培养时间过长，加速褐变。三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养2.防止措施（二）褐变的原因及预防（1）选择适宜的外植体；（2）选择合适的培养条件；

（3）连续培养；

（4）加抗氧化剂（VC、PVP、牛血清、牛蛋白）；

（5）加0.1－0.5%活性炭；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养（三）玻璃化的原因及预防

1.含义:离体培养物的嫩茎或叶呈半透明水渍状，为生理失调症。

三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养2.症状：

矮小肿胀，失绿，，茎叶表皮无蜡质层，无功能性气孔，叶、嫩梢呈水晶透明或半透明；叶色浅，叶片皱缩并纵向卷曲，脆弱易碎；组织发育不全或畸形；体内含水量高，干物质等含量低；试管苗生长缓慢，分化能力降低。

三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养3.原因：细胞过程中的环境变化引起。（1）激素浓度（尤其CTK）增加或CTK╱IAA高；（2）琼脂浓度低；

（3）光照时间大于15h；

（4）温度低；

（5）通风条件不好；

（6）培养基离子种类及比例不适宜；（三）玻璃化的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养

4.预防措施

（1）适当控制培养基中无机盐成分，适当提高蔗糖和琼脂浓度，减少含氮化合物的用量，降低培养基的水势。（2）适当降低CTK和GA的浓度。考虑加入适当的脱落酸。

（三）玻璃化的原因及预防三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养（三）玻璃化的原因及预防4.预防措施

（3）增加自然光照，控制光照时间；增加容器通气，控制温度。（4）加入其他物质（如活性炭、多效唑、CCC）。三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养1.材料死亡2.黄化3.变异和畸形4.增殖率低下或过盛5.组培苗瘦弱或徒长6.不生根或生根率低7.过渡苗死亡率高（四）其它三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养1.材料死亡三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养1.材料死亡原因与预防外植体灭菌过度；污染；培养基不适宜或配制有问题；培养环境恶化；灭菌浓度和时间适宜；注意环境和个人卫生，严格操作；选用合适培养基；改善培养环境，及时转移和分瓶；加强组培苗的过渡管理；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养黄化三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养黄化三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养2.黄化培养基中Fe含量不足；矿物营养不均衡；培养环境通气不良，瓶内乙烯量高；激素配比不当；糖用量不足，长期不转移；培养温度不适；光照不足；原因：三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养3.变异和畸形春兰种子萌发形成的根状茎三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养3.变异和畸形原因：激素浓度和选用的种类不当；

环境恶化和不适。预防：降低CTK浓度，调整生长素与CTK的比例；改善环境条件。三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养4.增殖率低下或过盛原因：与品种特性有关；与激素浓度和配比有关。预防：确定一定范围的激素比试验，根据长势确定配方，并及时调整；交替使用两种培养基；考虑品种的田间表现和特性，优化培养环境。三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养5.组培苗瘦弱或徒长三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养5.组培苗瘦弱或徒长◆CTK过高，过多不定芽未及时转移和分切；◆温度过高；◆光照不足；◆培养基水分过多；◆通气不良；原因：三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养5.组培苗瘦弱或徒长◆减少CTK用量；◆加速转瓶，降低接种量；◆降低环境温度；◆提高光强，延长光照时间；预防措施：◆适当增加培养基硬度；◆用透气膜做封口；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养6.不生根或生根率低原因：◆繁殖苗基质受损；◆种类和品种间的差异；◆激素种类和浓度；◆环境条件；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养6.不生根或生根率低预防：◆切割苗基部时，刀要快，用力均匀，平整无损伤；◆对难生根品种，从激素种类和水平、环境条件综合调控；◆生根苗基部尽是不带愈伤组织；◆掌握种类操作要领和质量要求；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养原因：7.过渡苗死亡率高◆环境条件不适；◆组培苗质量差；◆管理不精细；三、试验问题分析与处理园艺植物组织培养预防：7.过渡苗死亡率高◆及时出瓶，尽快移栽；◆培育高质量组培苗；◆改善环境条件；◆采取配套的管理措施，加强过渡苗的肥水管理和病虫害防治；项目二数据调查与分析模块四组培技术研发12CONTENTS组培苗观察编制组培观察表项目二数据调查与分析3试验问题分析与处理一、组培苗观察（一）组培试验数据指标及含义（二）组培观察的内容、方法与注意事项（三）观察、记录填写要点

一、组培苗观察园艺植物组织培养1.直接观察和测量的数据（长势、长相、叶色、不定芽高度、愈伤组织大小、生长状况等。）2.需要计算的技术指标

（出愈率、污染率、分化率、增殖率、生根率、成活率等。）（一）组培试验数据指标及含义

园艺植物组织培养一、组培苗观察表1

组培技术指标指标名称含义计算公式出愈率反映无菌材料愈伤组织诱导的效果。形成愈伤组织的材料数∕培养材料总×100%污染率大致反映杂菌侵染程度和接种质量。污染的材料数∕培养材料总数×100%分化率反映无菌材料的分化能力与再分化能力。分化的材料数∕培养材料总数×100%增殖率反映中间繁殖体的生长速度和增殖数量的变化。一个增殖周期扩繁的中间繁殖体数∕一次增殖转接材料总数×100%生根率大致反映无根芽苗根原基发生的快慢和生根效果。生根总数∕生根培养总苗数×100%成活率反映组培苗的适应性与移栽效果，一定程度上说明组培与快繁成功率的高低。40天时成活植株总数∕移栽植株总数总数×100%园艺植物组织培养一、组培苗观察（二）组培观察的内容、方法

1.观察阶段（初代培养、继代培养、生根培养、驯化移栽）2.观察方法

（目视观察、显微镜观察、照相、计算等）园艺植物组织培养一、组培苗观察观察阶段观察的内容要点观察方法初代培养外植体变化；愈伤组织、胚状体和芽萌动时间与数量；出愈率；分化率；胚状体或原球茎的诱导率和污染率、褐变率等异常现象。目视观察；照相；计算继代培养中间繁殖体的长势（生长量、健壮程度等）；长相（形态、结构、质地、大小、高度、颜色、位置等）；增值率和污染率、褐变率、玻璃化苗发生率、变异率等异常现象。目视；照相；显微观察；计算生根培养根发生时间；长势（生长量、根发达程度）；长相（根长、根数、根粗、根色、位置等）；生根率和污染率、畸形根发生率等异常现象。目视；照相；显微观察；计算驯化移栽试管苗长势（生长量、健壮程度）；长相（株高、根数、根长、根色、叶厚、叶色、叶数等）；驯化移栽成活率；壮苗指数；变异率等。目视；计算；试验表2

组培苗观察的内容与方法园艺植物组织培养一、组培苗观察

及时认真观察记录；数据调查准确；记录全面、客观；及时发现问题。1.观察组培苗时，手不要握封口处，以防二次污染。2.定量观察时，有些指标需要按照公式准确计算。3.细菌污染和真菌污染出现的时间和表现的症状是不同的。4.组培苗观察的内容和方法的选择因培养阶段不同而不同。（三）观察、记录填写要