初研克隆在癌症治疗中的运用

初研克隆在癌症治疗中的运用

1肿瘤细胞中c-FLIP的过表达

在一系列癌症，如结肠癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌中表达较高。在大多数情况下，c-FLIPL在恶性肿瘤中表达增加;另有研究表明c-FLIPS表达也上调，如在胃癌SNU-216细胞和胰腺癌中c-FLIPS表达上调。c-FLIP的过表达可增加拮抗Fas、TＲAIL介导的细胞凋亡。研究证实，在某些组织中c-FLIP的高表达水平还与肿瘤的迁徙有关。在结肠癌、宫颈癌、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和膀胱癌中，c-FLIP的表达水平升高与不良预后有关。c-FLIP异构体在肿瘤细胞中过表达，其表达水平不仅与死亡受体靶向的治疗有关，还与传统治疗有关，因为c-FLIP抑制抗癌药物诱导的细胞凋亡。

2c-FLIP的作用

在外部凋亡通路中，c-FLIP募集到DISc中可以抑制caspase-8前体的二聚化和活性，从而抑制凋亡事件的发生。c-FLIPL与caspase-8前体可以形成一个异源二聚体，c-FLIPL与caspase-8前体的异源二聚化，可以诱导caspase-8的活性。复合体中caspase-8的有限激活可以产生p43-c-FLIP和p41/p43-caspase-8亚单元，然而由于c-FLIPL缺乏蛋白酶水解活性，进一步的切割不能发生，切割的产物继续与DISc结合，阻止凋亡信号的进一步转导。尽管如此，活化的caspase-8能够接近部分底物，如ＲIP。ＲIP在细胞膜上不同的切割，可以导致由Fas配体激活c-FLIPL和c-FLIPS对下游信号通路中c-Fos或者NF-κB的不同调节。

3c-FLIP的转录表达调节

越来越多的转录调节因子被发现结合在c-FLIP的启动子上，转录调节因子对c-FLIP异构体的不同调节，可能是以一种细胞依赖的方式，在特定刺激条件下决定细胞的命运。实验证明，调控c-FLIP的转录因子有NF-κB、p53、p63、FoXo3a、EGＲ1、AＲ、Sp1、E2F1、c-myc、IＲF5、c-Fos、NFATc2和hnＲNPk。NF-κB、p53、p63、NFAT、EGＲ1、hnＲNPk、AＲ和Sp1诱导c-FLIP的表达;而c-myc、FoXo3a、c-Fos、IＲF5和Sp3抑制c-FLIP的转录。许多信号通路通过激活这些转录因子来调控c-FLIP，其中涉及到TNF配体、生长因子、白介素、趋化因子、DNA损伤试剂或者非传统的化疗试剂。TNF-α和cD40配体可激活NF-κB，导致c-FLIP表达上调从而抑制Fas、TNFＲ1和TＲAIL受体介导的细胞凋亡［。另外PI3k、Akt、mAPk信号通路的激活或者生长因子刺激，也可以诱导c-FLIP的转录水平上调。趋化因子IL-8在前列腺癌细胞系中，通过激活NF-κB和雄性激素依赖的转录方式而增加c-FLIPS和c-FLIPL的mＲNA水平。干扰素-β介导的的激活与PmA或者TＲAIL诱导的c-Fos的激活可抑制c-FLIP的表达。c-FLIP异构体的调节机制现在还不完全清楚，可能依赖于转录因子或者激活的信号通路，还可能依赖于特定的细胞系。在肺癌中，E2F1可抑制c-FLIPS而不是c-FLIPL的表达;在活性T-细胞中c-FLIPS的表达上调特别依赖于NFATc2;cD40介导的c-FLIPＲ的表达上调可抑制Fas诱导的细胞凋亡。尽管c-FLIPL和c-FLIPS都受NF-κB调节，但在红白血病细胞系TF-1中，c-FLIPＲ的表达是以不依赖于NF-κB的方式被TNF激活所诱导。在Hacat细胞系中用ＲNAi筛选p63靶标发现，同一种转录因子对不同c-FLIP异构体的调节可能不同。p63可能专门诱导c-FLIPＲ的表达，而抑制c-FLIPＲ并不影响c-FLIPL表达水平。因此，有必要在不同细胞中研究c-FLIP异构体的表达调控机制。

ε/NF-κB信号通路

对c-FLIP的调节NF-κB是真核细胞的转录因子，几乎存在于所有的细胞中。在有害刺激等作用下，Pkcε活化并激活NF-κB转位到细胞核，与多种细胞因子、应激相关等基因启动子和增强子上的κB序列特异结合，促进细胞因子的过表达和细胞在应激条件下的存活和生长。研究发现，Pkcε的活化可以增强c-FLIPmＲNA的转录，诱导c-FLIP表达上调;而NF-κB活性的抑制则能抑制Pkcε诱导的c-FLIP的表达上调。人T细胞白血病Ⅰ型病毒癌蛋白tax可以通过激活NF-κB诱导c-FLIP的表达，抑制Fas介导的细胞凋。NF-κB抑制剂DHmEQ可抑制cLL细胞内NF-κB的活性诱导细胞凋亡，并伴随NF-κB依赖的抗凋亡基因，如c-IAP、Bfl-1、Bcl-xL和c-FLIP等基因的表达下调。由此可见在上调c-FLIP表达的过程中，Pkcε/NF-κB信号通路以及NF-κB的活性起了至关重要的作用。

/Akt信号通路

对c-FLIP的调节PI3k/Akt信号通路与细胞生长、增殖及癌变密切相关，是细胞内一条重要的信号转导通路。PI3k催化磷脂酰肌醇磷酸化生成PIP3，在PIP3存在的情况下，磷脂酰肌醇依赖性激酶，PDk-1)能磷酸化Akt/PkB并使之活化。在肿瘤细胞内，PI3k通过Akt的磷酸化可增强c-FLIPmＲNA的转录及蛋白质表达水平。PI3k抑制剂下调c-FLIP的表达，增强Fas介导的HL-60细胞凋亡的敏感性。尽管在口腔磷状上皮细胞癌中，PI3k抑制剂waltman和Ly294002不影响oScc细胞中Fas的表达，却能强烈抑制Akt的磷酸化、显著降低细胞内c-FLIP的水平，促进Fas介导的细胞凋亡。c-myc作为一个癌基因，在细胞增殖和细胞凋亡中具有双重作用。PI3k/Akt信号通路的激活可诱导c-myc的转录，而c-myc表达增加可使c-FLIP表达降低，促进TＲAIL诱导的细胞凋亡。染色质免疫沉淀及荧光标记分析显示，c-myc结合并抑制了c-FLIP的启动子，c-myc的表达增强了TＲAIL诱导的DISc中caspase-8的活性，从而促进了c-FLIP的降解。在对TＲAIL敏感的细胞系中，c-myc的表达水平与细胞对TＲAIL的敏感性呈正相关。过表达c-myc或激活融合的myc-EＲ，可增加TＲAIL耐受细胞对TＲAIL敏感性;如果用siＲNA抑制c-myc活性，能显著降低c-myc的表达和TＲAIL诱导的细胞凋亡。c-FLIP是c-myc的直接靶向作用蛋白，无论是在培养细胞还是在c-myc诱导肿瘤发生的小鼠动物模型中，过表达c-myc或者活化myc-EＲ都能降低c-FLIP的表达水平，而用siＲNA抑制c-myc的活性则能增强c-FLIP的表达。另外，补体c5b-9复合物可以抑制凋亡蛋白caspase-8的活化以及对Bid的切割，显著提高c-FLIPL蛋白的表达水平。但是，PI3k抑制剂Ly294002可逆转c5b-9复合物的抗凋亡效应。综上所述，PI3k/Akt信号通路对c-FLIP的表达调控具有很重要的作用。

转录因子

E2F1对c-FLIP的调节转录因子E2F1是在细胞周期S期及细胞凋亡过程中起作用的转录因子。研究发现，低水平表达E2F1的肺癌细胞中，c-FLIPs特异性过表达;在不同的肺癌细胞系中，E2F1可以通过下调c-FLIPS并激活死亡诱导信号复合体DISc中caspase-8，诱导细胞凋亡。E2F1可促进Fas和TＲAIL介导的肿瘤细胞凋亡，增强T淋巴细胞抗肿瘤的细胞毒效应。在原发性肺癌细胞中低水平的E2F1可能是促成细胞癌变的一个重要因素，其表达水平的下调将促成肿瘤细胞的免疫逃逸。因此，在死亡受体介导的细胞凋亡通路中，E2F1是一个至关重要的细胞凋亡转录调节因子。

其他干细胞因子

可增强c-FLIPmＲNA的转录及蛋白质表达，减弱IFN-γ诱导的细胞凋亡。研究认为，雄激素可以提供前列腺上皮细胞生存信号，前列腺中雄激素的去除会诱导细胞凋亡。在雄激素存在的情况下，雄激素受体被募集到c-FLIP基因的启动子上，诱导c-FLIP基因的表达，研究表明在雄激素作用下，雄激素受体可以通过调节c-FLIP基因影响前列腺细胞的存活