型别检测-oweroin-幻灯片

HPV检测在宫颈癌

诊治中的应用胡飞红在2003年，香港天后级艺人，梅艳芳身患癌症，在她刚刚过完40岁生日后离开人世宫颈癌与HPV关系豪森，德国人，2008年10月诺贝尔奖获得者研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系HPV型别与宫颈病变HPV病毒通过皮肤表面的微小创口侵入更多的HPV病毒侵入到创口周围组织并进入上皮细胞病毒复制HPV检测在宫颈癌诊治中的临床意义

CIN治疗后，宫颈癌手术后的随访筛查宫颈癌高发人群：协助诊断早期宫颈癌和癌前病变：科学研究指导（疫苗）

常用HPV检测方法的分析1.细胞学检查2.组织学检查3感染组织中HPV蛋白的检测；3HPV感染的血清学检查5.HPV基因组检测.1.细胞学检查传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术(TCT)2.组织左学检胃查（肉眼食观察踩。阴络道镜坝观察严。组望织检肥查）3.感染璃组织朝中HP既V蛋白岂的检楼测4.HP睡V感染闷的血篇清学纪检查检测友人体懂血清骡中是莲否存样在有扬针对HP滔V产生备的抗池体，熔通过雹免疫检学方鹿法进亩行检观测。检测肃人体咽血清赚中是拿否存宇在有闹针对HP说V产生避的抗舱体，报通过黎免疫待学方息法进庄行检逢测。HP小V基因跌检测5.HP叼V基因熊组检辟测1.基于PC拳R靶向压扩增2.基于PC朗R产物远分析,杂交这分析型特异PCR用型特异PCR引物-设计成能特定扩增单个HPV基因型。一个PCR反应仅能检测一种型别通用引物PCR依据不同HPV亚型用共同保守序列的特点合成通用引物，对HPV广谱扩增E6，E7特异引物阳性率远高于用L1区通用引物实时荧光定量PCR普通PCR的基础上增添了荧光探针，，常用通用引物，仅多定量功能。目前两通用探针可检测40多种型别。1。基盖于PC吗R靶向殃扩增（1）直接测序法对PCR产物的一对引物间序列进行测序实现HPV型别，避免了杂交固有的交叉反应。特别对少见型和新型别作用大，但多重感染影响测序准确度，病毒载量少者易被忽略。（2）限制性片段长度多态性分析选择合适的限制性核酸内切酶，据特定酶切电泳条带模式判断型别。可检测具体型别，但对特异性要求高，非特异性性条带可致酶切后分型不准确。2.基于PC迟R产物糠分析（1）杂交捕获法杂交捕获(hybridcapturesystem，HCS)实验是美国Digene公司新发展的一种检测HPVDNA的技术，其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。敏感性好，重复性高，不存在交叉杂交问题。（2）反向杂交法有线性平行杂交，点杂交，反向线性杂交。常用于HPV型别分布的统计研究中。（3）以聚笨乙稀磁铁珠为载体的多重HPV分型方法杂交载体是磁珠，通用引物行广谱扩增，加入变性剂，产物解为单链，与磁珠上型别特异性探针杂交反应。2.基于PC碗R产物适杂交似分析（4）基粮因芯偿片技雁术杂交陪捕获吴法杂交笔捕获谦一代碑（HC拉-Ⅰ)试验算可检殃测9种高著危型HP扁V垮,包括16、18、31、33、35、45、51、52和56。所姓用的身反应涌载体烧是试预管；杂交光捕获片二代婆试验(H婆C－Ⅱ)原来丽的试欣管法亦改为96孔平御板法角，能颗同时萌检测13种高合危型HP鉴V崖(1捎6、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68时)。杂交倦捕获咐法捕获职杂交触法（通过星对病构毒DN饺A解链,杂交暮捕获,光信甜号放拦大获朴取结荣果）基本眼实验压步骤婚如下兔：1.样本DN害A双链池被释挖放并达分解循为核策苷酸宪单链;2.携DN扁A单链谢与RN鄙A探针葛结合腿为RN江A－DN培A杂交姻体;3.特异究性抗辩体将RN辟A－DN父A杂交鲁体固章定在肤试管苏壁或许微孔凝壁上;4.结合兔有碱杠性磷吊酸酶确的多烛个第阀二抗捕体与RN盲A－DN槽A杂交坏体结苍合,使信撒号放油大;5.碱性驶磷酸青酶使搅酶底芒物发悬光,判读容光的守强弱保可确短定碱布性磷乱酸酶伪的含遗量,从而祸确定RN尖A－DN槐A杂交划体的斯含量。HC摧II唯一进通过FD颂A批准购可在继临床费使用醋的HP妖V技术DN停A裂解阅→RN或A-狮DN资A杂交巷→励抗体方捕获剖→芒化学孝发光矿→属计算括机判猾读新发日展的冒一项用诊断软技术丝式，在HP殖V分型井中用渔寡核乒苷酸卵原位颠合成辞法，琴原理围是将漂疾病盾的特祸征性右基因泳片段贤或致标病病宾原体饼片段房诚固定挖芯片昆上，获制成侨诊断臂芯片废，提炭取患头者样单本中促核酸慈行标刘记作舍探针垦，利乞用探雪针与胡芯片软杂交访，扫谢描杂碰交结姑果，辣判断随基因摔型分挎型是诞否被荡感染僻，可紧诊断HP每V潜在镰感染貌，行池早期级预防基因午芯片透技术HP菌V基因鱼芯片消检测敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠检测灵敏度是PCR方法的100倍针对性强：对样品中的HPV-DNA直接进行检测。检出HPV的潜伏期感染，克服了血清学及免疫组化检测法对潜伏感染会产生漏检的缺点（实现对疾病的早期快速诊断）操作简单：通过1次杂交检测不仅可以判断待检样品中是否存在HPV感染，而且可以鉴定出是哪种型别的HPV感染同时检测多种HPV型别，对多重HPV.感染的判断一目了然，克服了其他HPV.检测方法难以判断混合感染或操作烦琐的缺点。总结梨。总之隙，目换前的HP削V分型弟检测更技术恭主要销基于鸽聚合肢酶链顺反应坑。HP洒V特定翅型别增在宫触颈疾恢病发掉展中心的重两要作羞用，狐考虑进到HP共V型谱爱的多呼样性脏和多沸重性HP瞎V联合扁感染疫的高沸发率稠，准巡寿确的HP偿V检测餐显得胳尤为陪重要纺。不刺断寻辟求更哀准确转，快柳速有汇效的匙检测党技术过。注：如何迅对待HP腊V感染版？1.爷HP染V感染漂较为介常见2.多数HP蛛V可以闻被清爪除,“一过牺性”进感染灯不致酬宫颈殖病变3.少数扒持续迅性感乳染会索引发叠宫颈不病变4.彼HP弊V致CI致NI、CI枕NI夫I、CI局NI舅II到浸殖润癌衣需要六相当抛长的矮时间拖，一辽般是8~加10年5.致宫热颈癌华的是患高危阀型HP位V6.妨HP稠V(搞+)只说血明是巨一种朝感染英，并骨非是蛛一种敲疾病7.没有HP欲