过氧化氢酶活性的测定-课件

过氧化氢酶活性的测定

——碘量法1ppt课件摩洛哥干旱缺水地区特有一景：羊上树2ppt课件2003年湖南旱灾农民不得不下井底获取饮用水3ppt课件2004秋至2005年春海南省连续干旱缺雨4ppt课件2003年湖南旱灾农民不得不下井底获取饮用水5ppt课件2004秋至2005年春海南省连续干旱缺雨6ppt课件旱灾后的水稻7ppt课件逆境的种类与植物的抗逆性

逆境的定义及其种类

逆境（stress）是指对植物生长和生存不利的各种环境因素的总称，又称为胁迫。

植物的抗逆性（stressresistance)，简称抗性：植物在长期的系统发育中逐渐形成了对逆境的适应和抵抗能力。。

生物因素：病虫害、杂草等

逆境的种类

理化因素：温度、水分、辐射、化学因素、天气等8ppt课件9ppt课件1)Intercellularfreezing――细胞间隙结冰

10ppt课件植物对逆境的适应：植物对逆境的适应：

避逆性（stressavoidance）耐逆性（stresstolerance）生物膜胁迫蛋白活性氧渗透调节脱落酸11ppt课件逆境下的自由基伤害12ppt课件

PSI

铁氧还蛋白

O2

还原型铁氧还蛋白

O2

NADP+

O2NADPHO2

叶绿体产生活性氧途径-.-.13ppt课件NADH→FMN→Fe-S→UQ→Cytb→→O2

O2O2

线粒体呼吸链上的电子泄漏产生活性氧-.14ppt课件质膜NADPH氧化酶NADPH2+O2NADP++O-2（质膜）H2O2和1O2的产生：CHLhr

1O2（叶绿体）乙醇酸+O2乙醛酸+H2O2（过氧化物酶体）15ppt课件氧伤害生理与植物抗性活性氧及其对植物的影响（1）活性氧（activeoxygen)

指性质极为活泼、氧化能力很强的含氧物的总称。

如超氧物阴离子自由基（O-2·），羟基自由基（-OH)，过氧化氢（H2O2），脂质过氧化物（ROO-）和单线态氧（1O2）。16ppt课件

（2）活性氧的伤害作用：a.细胞结构和功能受损活性氧易引起线粒体结构和功能破坏，使氧化磷酸化效率（P/O)降低。

b.生长受抑活性氧明显抑制植物生长，且根比芽对高氧逆境更敏感。轻度的氧伤害在解除高氧逆境后可恢复生长，重则不可逆致死。17ppt课件c.膜脂过氧化作用

膜脂过氧化（membranelipidperoxidation)是指生物膜中不饱和脂肪酸在自由基诱发下发生的过氧化反应。

膜脂由液晶态转变成凝胶态，引起膜流动性下降，质膜透性大大增加。d.损伤生物大分子

活性氧的氧化能力很强，能破坏植物内蛋白质（酶）、核酸等生物大分子。18ppt课件（3）活性氧对植物的有益作用a.参与细胞间某些代谢参与黄素酶的辅基（如FMN和FAD）的电子转移反应；木质素合成反应和降解反应（均有H2O2的参与）。b.参与细胞抗病作用

当病原菌侵入植物体时，激发植物细胞产生大量的O-2与H2O2，可作为诱发植物抗病性的直接因子，或在细胞外直接杀死病原体，或使细胞壁氧化交联起到加固效果，从而防止病原菌侵入，还可启动细胞内与抗病相关蛋白的基因表达。19ppt课件c.参与乙烯的形成

O2-可通过激发乙烯合成酶（EFE），从而促进乙烯释放；·OH直接作用于蛋氨酸而产生乙烯。d.活性氧参与调节过剩光能耗散

光能过剩时，过量能量（如ATP）传递给O2后，将O2激发形成O2-、·OH、H2O2等活性氧，随后又在SOD、POD、CAT等酶作用下发生猝灭，从而将过剩能量“消化”掉。

消除过剩光能对植物光合机构的破坏。20ppt课件生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是清除体内自由基：POD：过氧化物酶SOD：超氧化物歧化酶CAT：过氧化氢酶21ppt课件

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。22ppt课件过氧化氢酶（catalase）可以使过氧化氢分解成水和氧，

2H2O2=2H2O+O2

这个反应称为过氧化氢酶反应，过氧化氢酶因有这种分解作用而被划分为分解酶类。23ppt课件

1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；

2、了解过氧化氢酶的作用。一、实验目的：24ppt课件植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。二、实验原理:25ppt课件CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解的H2O2，以钼酸铵作催化剂，H2O2与KI反应，释放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，反应式为：

H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2OI2+2Na2S2O3--→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分解的H2O2量。二、实验原理:26ppt课件1、实验材料：三叶草、盐胁迫、干旱胁迫、低温2、仪器：(1)滴定管(2)研钵(3)容量瓶

(4)移液管(5)三角瓶(100ml)3、试剂：（1）0.05MH2O2（2）0.2MNa2S2O3

（3）1.8MH2SO4

（4）1.5%淀粉溶液（5）10%（NH4)6Mo7O24

（6）20%KI

（7）石英砂

三、实验材料、仪器和试剂：27ppt课件1、酶液提取：

称取0.5g三叶草，加少量石英砂，2ml水，研成匀浆，移入25ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。2、酶促反应：

（1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶中加入1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。（2）向A，B两瓶各加H2O25ml，摇匀，在加入B瓶那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向B瓶中加入1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。四、实验步骤：

28ppt课件3、滴定：

向A，B两瓶各加1ml20%KI和3滴（NH4）6Mo7O24，摇匀后迅速加入5滴1.5%淀粉溶液，用Na2S2O3进行滴定至蓝色恰好消失，记录两次消耗Na2S2O3的体积VA(空白)，VB(反应液)。四、实验步骤：

29ppt课件称取0.5g的三叶草研磨过滤、定容至25ml容量瓶A瓶取酶液10ml,,加入硫酸终止酶活性B瓶取酶液10ml,,各加入5mlH2O2，B瓶5min后加入硫酸终止酶活性滴定反应30ppt课件酶活性测定管号酶液(ml)1.8MH2SO4(ml)0.05MH2O2保温1.8MH2SO4(ml)20%KI溶液(ml)钼酸铵溶液(滴)淀粉溶液(滴)0.2MNa2S2O3溶液的滴定量A空白10555分钟-135VA(空白)=B反应10-55135VB(反应液)=31ppt课件酶活力：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。32ppt课件1、被分解的H2O2量（mg）=（空白滴定值