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文档简介
abo和rh血型鉴定专业知识讲座abo和rh血型鉴定专业知识讲座第1页实验内容
一、5%红细胞悬液配制
二、ABO血型判定(试管法、纸片法)三、Rh血型判定?abo和rh血型鉴定专业知识讲座第2页一、5%红细胞悬液配制
原理:使用一定量稀释液(生理盐水)稀释压积红细胞,遵照抗原抗体结合量比关系,获出最正确结果。器材:
小试管(玻璃及塑料皆可)、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂:
生理盐水。标本:
抗凝或非抗凝静脉血。
abo和rh血型鉴定专业知识讲座第3页操作1、全血2ml1000g离心5min,吸收分离上清至另一洁净试管(备用);2、压积加生理盐水约2~3ml,充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀,再次离心去掉上清液;3、重复离心(1000g,60s)洗涤红细胞3次,去掉上清液制备压积红细胞;4、取1滴压积红细胞于1支洁净小试管中,在其中加入19滴生理盐水,用小吸管轻轻吹打混匀,就是5%红细胞悬液。
abo和rh血型鉴定专业知识讲座第4页目标:掌握ABO正反定型原理、方法。原理:红细胞凝集试验,经过正、反定型判定ABO血型。正定型:用已知血型特异性抗体(抗-A、抗-B)来测定红细胞上有没有对应抗原;反定型:用已知血型试剂红细胞测定血清中有没有对应抗体。二、ABO判定
abo和rh血型鉴定专业知识讲座第5页abo和rh血型鉴定专业知识讲座第6页器材:
记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、判定纸板、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体:抗A、抗B(-A、-B);2.试剂红细胞:3%~5%Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本:
抗凝或非抗凝静脉血。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第7页操作(试管法)(1)标识试管:正定型:取洁净小试管2支,分别标明-A、-B;反定型:取3支小试管,标识Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞:取静脉血2滴于小试管中,加2ml生理盐水,混匀,1000g离心60s,弃上清;重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水,即为5%悬红。(3)加样:正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红,反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。(4)离心:1000g离心15秒。
(5)结果:轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第8页
4+
红细胞凝集成一大块,血清清楚透明。
3+
红细胞凝集成大小块,血清清楚。
2+
红细胞凝块分散成许多小块,血清清楚。
l+
肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。mf
混合凝集外观(mixedfield)指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。-表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准abo和rh血型鉴定专业知识讲座第9页试管法结果判定abo和rh血型鉴定专业知识讲座第10页表lABO血型正反定型结果试剂血清+受检红细胞受检血清+试剂红细胞(正定型)(反定型)-A-B受检血型AcBcOc
+- A -+--+ B + ---- O + +-++ AB ---判断标准abo和rh血型鉴定专业知识讲座第11页操作:玻片法(判定纸板)
(1)洁净玻片(判定纸板)一张。标-A、-B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴,再加受检者10%红细胞悬液l滴,混匀。(2)另取洁净玻片(或判定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc,各加受检血清2滴,再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或判定纸板),使血清与细胞充分混匀,约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。
abo和rh血型鉴定专业知识讲座第12页正定型反定型abo和rh血型鉴定专业知识讲座第13页注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染abo和rh血型鉴定专业知识讲座第14页目标掌握Rh血型判定原理、方法。原理Rh血型系统,包含四十几个抗原,通常使用对应抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检验红细胞抗原。在临床输血中普通只做D抗原判定,被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性,不凝集者为Rh阴性。三、Rh血型判定abo和rh血型鉴定专业知识讲座第15页器材小试管、滴管、试管架、记号笔、判定纸板、显微镜、离心机。试剂1.Rh抗血清:常见为IgM抗抗D(其它为抗C、抗c、抗E、抗e)。2.己知Rh阳性和阴性5%红细胞悬液各1份3.生理盐水。标本静脉血。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第16页操作(盐水试管测试法)1.取单克隆抗-D(IgM)-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。2.每管各加1滴3%~5%待检红细胞悬液。3.充分混匀,以1000g离心15秒。4.观察结果:轻摇散开试管底部细胞扣,用肉眼观看凝集。5.判定结果abo和rh血型鉴定专业知识讲座第17页abo和rh血型鉴定专业知识讲座第18页注意事项1.用抗D血清进行Rh血型判别时,结果为阴性,不能直接汇报Rh阴性,需深入检测弱D型还是个别D型。2.Rh血型判定应严格控制温度与时间,因R
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